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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
1.了解溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院2007年至2011年5年間臨床分離屎腸球菌和糞腸球菌的標(biāo)本類型分布情況及其對(duì)各種抗菌藥物的耐藥性。
2.統(tǒng)計(jì)分析各種標(biāo)本來(lái)源腸球菌之間毒力基因攜帶率的差異,為進(jìn)一步研究腸球菌致病機(jī)制和毒力基因作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
3.了解耐萬(wàn)古霉素腸球菌耐藥基因特點(diǎn)及表型特點(diǎn),并對(duì)其水平傳播特性進(jìn)行研究。
4.對(duì)耐萬(wàn)古霉素腸球菌進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查研究。
2、 方法:
1.回顧性調(diào)查2007年至2011年臨床分離的屎腸球菌和糞腸球菌的標(biāo)本來(lái)源分布情況,統(tǒng)計(jì)分析兩種腸球菌對(duì)各種抗菌藥物的耐藥情況。
2.PCR的方法篩查腸球菌毒力因子基因,并與菌株來(lái)源結(jié)合進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)方差分析,找出二者對(duì)應(yīng)聯(lián)系。
3.用PCR的方法對(duì)腸球菌進(jìn)行基因篩查,檢測(cè)萬(wàn)古霉素耐藥相關(guān)基因vanA、vanB、vanC1/C2、vanM和毒力因子基因(esp、cyl、hyl、gel)
3、。通過(guò)接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn)觀察耐藥基因的水平轉(zhuǎn)移能力,檢測(cè)接合子的最低抑菌濃度,同時(shí)用PCR的方法驗(yàn)證結(jié)合實(shí)驗(yàn)是否成功。
4.用脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)和多位點(diǎn)序列分型(MLST)方法對(duì)耐萬(wàn)古霉素的腸球菌進(jìn)行同源性分析,了解其流行病學(xué)特點(diǎn)。
結(jié)果:
1.618株腸球菌(包括屎腸球菌360株和糞腸球菌258株)分離自溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院臨床送檢的各類標(biāo)本,其中來(lái)自尿液標(biāo)本198株(占32.0%),痰液
4、標(biāo)本165株(占26.7%),糞便標(biāo)本115株(占18.6%),引流液、創(chuàng)面、膿液、血液等標(biāo)本140株(占22.7%)。藥敏結(jié)果顯示:屎腸球菌對(duì)青霉素G、氨芐青霉素、左氧氟沙星和莫西沙星耐藥率均達(dá)在90%以上;其對(duì)呋喃妥因、莫西沙星、青霉素G、氨芐青霉素、氨基糖苷類和喹諾酮類藥物的耐藥率都要明顯高于糞腸球菌;屎腸球菌和糞腸球菌對(duì)利奈唑胺、萬(wàn)古霉素和替考拉寧,二者敏感率都在90%以上。
2.分離自尿液標(biāo)本的菌株esp、gel
5、E和cyl三種毒力基因的攜帶率要高于糞便標(biāo)本來(lái)源的菌株,分離自痰液標(biāo)本菌株cyl攜帶率也高于糞便標(biāo)本來(lái)源菌株,而分離自尿液標(biāo)本的菌株gelE攜帶率高于痰液標(biāo)本來(lái)源菌株, hyl基因在不同標(biāo)本來(lái)源的菌株中檢出率無(wú)明顯差異。
3.618株腸球菌中共檢出VRE15株,其中14株為屎腸球菌。所有VRE對(duì)臨床常用抗菌藥物大部分表現(xiàn)為耐藥。對(duì)糖肽類藥物萬(wàn)古霉素呈高水平耐藥(MIC≥256μg/ml),對(duì)替考拉寧有2株表現(xiàn)為敏感,其余耐
6、藥;VRE菌株中大部分都對(duì)氨芐西林、青霉素G、替考拉寧、環(huán)丙沙星和左氧氟沙星耐藥;對(duì)四環(huán)素耐藥存在異質(zhì)性;所有菌株對(duì)利奈唑胺敏感。
4.對(duì)15株萬(wàn)古霉素耐藥的vanA型菌株進(jìn)行液體接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn),接合試驗(yàn)全陰性,未獲得陽(yáng)性接合子。
5.對(duì)vanA基因陽(yáng)性屎腸球菌進(jìn)行PFGE同源性分析并繪制各菌株間的相似性樹狀圖,少數(shù)菌株存在同源性,多位點(diǎn)序列分型(MLST)也證實(shí)少數(shù)菌株親緣關(guān)系相近。
結(jié)論:
7、r> 1.臨床分離的腸球菌主要來(lái)源于泌尿道和呼吸道標(biāo)本。屎腸球菌和糞腸球菌對(duì)臨床常用抗菌藥物的耐藥性存在差異。
2.毒力因子基因在不同標(biāo)本來(lái)源的腸球菌中攜帶率不同,尿液標(biāo)本中分離的菌株毒力因子基因攜帶率高于糞便來(lái)源的菌株。四種毒力因子基因中esp基因攜帶率最高。
3.耐萬(wàn)古霉素腸球菌主要為屎腸球菌,多為多重耐藥菌株,均為vanA基因型,攜帶至少一種毒力基因。
4.MLST分型和脈沖場(chǎng)凝膠電
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