腸球菌毒力基因和萬(wàn)古霉素耐藥基因研究.pdf

1、目的：
　　 1.了解溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院2007年至2011年5年間臨床分離屎腸球菌和糞腸球菌的標(biāo)本類型分布情況及其對(duì)各種抗菌藥物的耐藥性。
　　 2.統(tǒng)計(jì)分析各種標(biāo)本來(lái)源腸球菌之間毒力基因攜帶率的差異，為進(jìn)一步研究腸球菌致病機(jī)制和毒力基因作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
　　 3.了解耐萬(wàn)古霉素腸球菌耐藥基因特點(diǎn)及表型特點(diǎn)，并對(duì)其水平傳播特性進(jìn)行研究。
　　 4.對(duì)耐萬(wàn)古霉素腸球菌進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查研究。
　

2、　 方法：
　　 1.回顧性調(diào)查2007年至2011年臨床分離的屎腸球菌和糞腸球菌的標(biāo)本來(lái)源分布情況，統(tǒng)計(jì)分析兩種腸球菌對(duì)各種抗菌藥物的耐藥情況。
　　 2.PCR的方法篩查腸球菌毒力因子基因，并與菌株來(lái)源結(jié)合進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)方差分析，找出二者對(duì)應(yīng)聯(lián)系。
　　 3.用PCR的方法對(duì)腸球菌進(jìn)行基因篩查，檢測(cè)萬(wàn)古霉素耐藥相關(guān)基因vanA、vanB、vanC1/C2、vanM和毒力因子基因(esp、cyl、hyl、gel)

3、。通過(guò)接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn)觀察耐藥基因的水平轉(zhuǎn)移能力，檢測(cè)接合子的最低抑菌濃度，同時(shí)用PCR的方法驗(yàn)證結(jié)合實(shí)驗(yàn)是否成功。
　　 4.用脈沖場(chǎng)凝膠電泳(PFGE)和多位點(diǎn)序列分型(MLST)方法對(duì)耐萬(wàn)古霉素的腸球菌進(jìn)行同源性分析，了解其流行病學(xué)特點(diǎn)。
　　 結(jié)果：
　　 1.618株腸球菌（包括屎腸球菌360株和糞腸球菌258株）分離自溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院臨床送檢的各類標(biāo)本，其中來(lái)自尿液標(biāo)本198株(占32.0％)，痰液

4、標(biāo)本165株（占26.7％），糞便標(biāo)本115株（占18.6％），引流液、創(chuàng)面、膿液、血液等標(biāo)本140株（占22.7％）。藥敏結(jié)果顯示:屎腸球菌對(duì)青霉素G、氨芐青霉素、左氧氟沙星和莫西沙星耐藥率均達(dá)在90％以上;其對(duì)呋喃妥因、莫西沙星、青霉素G、氨芐青霉素、氨基糖苷類和喹諾酮類藥物的耐藥率都要明顯高于糞腸球菌;屎腸球菌和糞腸球菌對(duì)利奈唑胺、萬(wàn)古霉素和替考拉寧，二者敏感率都在90％以上。
　　 2.分離自尿液標(biāo)本的菌株esp、gel

5、E和cyl三種毒力基因的攜帶率要高于糞便標(biāo)本來(lái)源的菌株，分離自痰液標(biāo)本菌株cyl攜帶率也高于糞便標(biāo)本來(lái)源菌株，而分離自尿液標(biāo)本的菌株gelE攜帶率高于痰液標(biāo)本來(lái)源菌株， hyl基因在不同標(biāo)本來(lái)源的菌株中檢出率無(wú)明顯差異。
　　 3.618株腸球菌中共檢出VRE15株，其中14株為屎腸球菌。所有VRE對(duì)臨床常用抗菌藥物大部分表現(xiàn)為耐藥。對(duì)糖肽類藥物萬(wàn)古霉素呈高水平耐藥（MIC≥256μg/ml），對(duì)替考拉寧有2株表現(xiàn)為敏感，其余耐

6、藥;VRE菌株中大部分都對(duì)氨芐西林、青霉素G、替考拉寧、環(huán)丙沙星和左氧氟沙星耐藥;對(duì)四環(huán)素耐藥存在異質(zhì)性;所有菌株對(duì)利奈唑胺敏感。
　　 4.對(duì)15株萬(wàn)古霉素耐藥的vanA型菌株進(jìn)行液體接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn)，接合試驗(yàn)全陰性，未獲得陽(yáng)性接合子。
　　 5.對(duì)vanA基因陽(yáng)性屎腸球菌進(jìn)行PFGE同源性分析并繪制各菌株間的相似性樹狀圖，少數(shù)菌株存在同源性，多位點(diǎn)序列分型(MLST)也證實(shí)少數(shù)菌株親緣關(guān)系相近。
　　 結(jié)論：

7、r>　　 1.臨床分離的腸球菌主要來(lái)源于泌尿道和呼吸道標(biāo)本。屎腸球菌和糞腸球菌對(duì)臨床常用抗菌藥物的耐藥性存在差異。
　　 2.毒力因子基因在不同標(biāo)本來(lái)源的腸球菌中攜帶率不同，尿液標(biāo)本中分離的菌株毒力因子基因攜帶率高于糞便來(lái)源的菌株。四種毒力因子基因中esp基因攜帶率最高。
　　 3.耐萬(wàn)古霉素腸球菌主要為屎腸球菌，多為多重耐藥菌株，均為vanA基因型，攜帶至少一種毒力基因。
　　 4.MLST分型和脈沖場(chǎng)凝膠電