兒童耐萬古霉素腸球菌的表型測定與基因分型.pdf

1、研究背景：腸球菌是條件致病菌，可導(dǎo)致人體多臟器的感染，不僅可引起尿路感染、皮膚軟組織感染，還可以引起危及生命的腹腔感染、敗血癥、心內(nèi)膜炎和腦膜炎等。近年來抗生素的廣泛應(yīng)用使腸球菌對β-內(nèi)酰胺類和高濃度氨基糖苷類抗生素的耐藥性增加，同時也出現(xiàn)耐萬古霉素腸球菌，多重耐藥的腸球菌的出現(xiàn)給臨床治療造成了極大的困難，因此應(yīng)廣泛引起重視。VRE在美國疾病控制中心(CDC)被列為第二院內(nèi)感染病原體，主要引起院內(nèi)感染，暴發(fā)流行多發(fā)生于重癥監(jiān)護(hù)病房和血液

2、腫瘤病房等患有危重疾病和免疫功能低下的患者，所致感染發(fā)病率和死亡率高。 腸球菌對萬古霉素耐藥主要有5種基因型：VanA、VanB、VanC、VanD、VanE。臨床上的VRE大多屬于VanA型耐藥，VanA型耐藥的VRE對萬古霉素呈現(xiàn)高水平耐藥(MIC為64～＞512mg／L)，VanA型耐藥可以被萬古霉素和替考拉寧誘導(dǎo)產(chǎn)生。該型耐藥菌株多見于屎腸球菌和糞腸球菌，多由質(zhì)粒介導(dǎo)。VanB型耐藥株對替考拉寧敏感，對萬古毒素的耐藥水平

3、則有很大差異。同時也多見于屎腸球菌和糞腸球菌中。VanC型耐藥對萬古霉素呈天然低水平耐藥，對替考拉寧敏感。 耐萬古霉素腸球菌的基因分型鑒定對于其流行病學(xué)分析和感染控制具有重要意義。近年來，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，PCR技術(shù)己應(yīng)用于耐萬古霉素腸球的基因分型和相關(guān)研究。目的：研究腸球菌臨床分離株的耐藥性，調(diào)查腸球菌對萬古霉素的耐藥狀況，檢測耐萬古霉素腸球菌的耐藥表型和基因型，并為臨床治療用藥、控制院內(nèi)感染及進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查提供依據(jù)

4、。 方法：1.對江西省兒童醫(yī)院臨床標(biāo)本中分離的165株腸球菌采用微量肉湯稀釋法測定9種抗菌藥物的最低抑菌濃度(MIC)。2.對分離出來的萬古霉素不敏感菌株(MIC＞4μg／ml)應(yīng)用瓊脂平板法測試。3.對篩選出的萬古霉素不敏感菌株再用Etest方法進(jìn)行檢測。4.用PCR技術(shù)對篩選出來的耐萬古霉素腸球菌進(jìn)行基因分型。5.選擇耐萬古霉素腸球菌耐藥菌株的基因擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行DNA測序。 結(jié)果：165株腸球菌在各類臨床標(biāo)本中的分布分

5、別為大便143株占86.7％，尿液15株占9.1％，血液3株占1.8％，痰液、皮膚、膿液和腦脊液各1株占0.6％。腸球菌中屎腸球菌132株占80％，糞腸球菌22株占13.4％，鳥腸球菌和棉子糖腸球菌各3株各占1.8％，鶉雞腸球菌2株占1.2％，其它腸球菌3株占1.8％。微量肉湯稀釋法結(jié)果顯示，腸球菌對萬古霉素敏感的有148株，不敏感的有17株，對其它抗菌藥物的耐藥性高低依次為紅霉素、青霉素、高水平慶大霉素、氨芐西林、四環(huán)素、環(huán)丙沙星、高

6、水平鏈霉素、利福平，其耐藥率分別為88．5％、87.3％、86.7％、83.6％、83.6％、77％、55.2％、46.7％。瓊脂篩選法顯示有6株耐萬古霉素腸球菌在含有萬古霉素(6μg／m1)腦心浸液瓊脂上生長。Etest方法測試表明MIc>4μg／ml有6株，與瓊脂篩選法結(jié)果相吻合。對這6株腸球菌進(jìn)行VanA、VanB、VanC、ermB(紅霉素)、qacE△1-sull(消毒劑-磺胺)基因檢測，其中1株屎腸球菌為VanB基因型、1株

7、鶉雞腸球菌VanC基因型和3株屎腸球菌為ermB基因陽性，未檢測到VanA基因型和qacEA△1-sull基因。對VanB基因型陽性菌株進(jìn)行基因測序，將其測序結(jié)果與Genebank中糞腸球菌V583進(jìn)行比對，結(jié)果顯示二者具有95％的同源性。 結(jié)論：糞腸球菌和屎腸球菌是腸球菌中引起感染性疾病較常見的病原菌，腸球菌的耐藥現(xiàn)狀十分嚴(yán)重，且為多重耐藥。屎腸球菌對多種抗菌藥物的耐藥率明顯高于糞腸球菌，因此需對腸球菌進(jìn)行菌種鑒定、耐藥性檢測