microRNa-33-122調(diào)控草魚肝臟脂質(zhì)代謝的作用及分子機制研究.pdf

1、單位代碼 j 0 4 7 6學 號 1 4 2 0 1 8 3 0 0 5分類號 S 9 6 3‘㈦J I i | J l 州川 川??州《——礦3 2 6 1 9 0 2河南{ ；彳蕁己大學碩士學位論文m i c r o R N A ．3 3 ，1 2 2 調(diào)控草魚肝臟脂質(zhì)代謝的作用及分子機制研究學科、專業(yè)研究方向申請學位類別申 請 人指導(dǎo)教師：水產(chǎn)學、水產(chǎn)養(yǎng)殖學：水產(chǎn)動物營養(yǎng)與品質(zhì)調(diào)控：農(nóng)學碩士：楊峰：盧榮華副教授二O 一七年六月摘

2、要在目前集約化水產(chǎn)養(yǎng)殖模式下，草魚( C 紀胛叩辦口秒唧如挖f 如砌) 作為我國產(chǎn)量最大的經(jīng)濟魚類，在實際養(yǎng)殖過程中，特別容易出現(xiàn)肝臟脂肪過度蓄積進而導(dǎo)致脂質(zhì)代謝紊亂等癥狀，免疫力也下降，嚴重者則表現(xiàn)為脂肪肝。因此，如何提高魚類肝臟對脂肪利用能力及肝脂質(zhì)蓄積調(diào)控的研究已顯得非常迫切和必要。近年來，關(guān)于I n i c r o 對妊( m j R N A ) 的研究越來越深入。研究顯示面I 玳A 參與陸上動物的膽固醇、甘油三酯和脂肪酸代謝等

3、，因而在脂質(zhì)代謝調(diào)控中發(fā)揮重要作用。目前，有關(guān)1 1 1 i R N A 調(diào)控魚類脂質(zhì)代謝的研究還不深入，相關(guān)機理還不明晰。本研究主要以草魚和草魚肝細胞系( L 8 8 2 4 )為實驗材料，采用基因克隆、基因過表達及干擾、q R T - P C R 、酶活性測定及腹腔注射等營養(yǎng)學、生物化學、分子生物學和細胞生物學相關(guān)技術(shù)與方法，在活體與細胞水平上較系統(tǒng)地研究了l l l i R - 3 3 ／1 2 2 調(diào)控草魚肝臟脂質(zhì)代謝的作用及初

4、步機理。研究結(jié)果為豐富魚類脂質(zhì)代謝調(diào)控機理提供了基礎(chǔ)資料，為防治魚類營養(yǎng)性脂肪肝等代謝性疾病及提高機體免疫力提供了思路及理論基礎(chǔ)，進而為促進魚類健康生長提供了科學依據(jù)。本文主要的研究結(jié)果和結(jié)論如下：1 ．m 諏．3 3 調(diào)控草魚肝臟脂質(zhì)代謝研究為探究血R 一3 3 調(diào)控草魚肝臟脂質(zhì)代謝的作用及初步機理，本項研究首先采用R T ．P C R 技術(shù)，克隆了I l l i R - 3 3 的前體序列，并進行了同源性比對和組織分布規(guī)律分析。結(jié)果

5、顯示，I I l i R - 3 3 的前體長度為6 5 b p ，和其它物種的同源性較高；構(gòu)建系統(tǒng)進化發(fā)育樹也顯示草魚I I l i R ．3 3 和魚類面R ．3 3 的進化關(guān)系最近；組織分布規(guī)律顯示在腦、眼睛、肝臟、肌肉和腸道中表達量較高，而在腎臟、脾臟、心臟和脂肪中的表達量較低。本研究采用m R 一3 3m h i c ( r n j R 一3 3 模擬物) 轉(zhuǎn)染草魚肝細胞L 8 8 2 4 的方法，開展了m 釀．3 3 的功能

6、研究。實驗設(shè)置三個組，空白對照組、陰性對照組和m 諏．3 31 1 1 i m i c 轉(zhuǎn)染組，處理2 4 h 后收集細胞。采用油紅O 染色提取法檢測了L 8 8 2 4 細胞中甘油三酯( T G )含量，q R T - P C R 技術(shù)檢測了與脂質(zhì)代謝相關(guān)基因的n Ⅱ斟A 表達水平。結(jié)果顯示，相對于空白對照組和陰性對照組，I I l i R ．3 31 1 1 i m i c 轉(zhuǎn)染細胞2 4 h 使r n i R - 3 3 超表達后