吉非羅齊參與細(xì)胞脂代謝調(diào)控的分子作用機(jī)制研究.pdf

1、血脂是血漿中的中性脂肪(甘油三酯和膽固醇)和類脂(磷脂、脂、固醇、類固醇)的總稱，是細(xì)胞基礎(chǔ)代謝的必需物質(zhì)。近來，由于飲食生活不當(dāng)或者缺乏鍛煉造成的肥胖患者越來越多，由此引發(fā)的高血脂癥受到廣泛關(guān)注。常用的降脂藥物主要有膽酸結(jié)合樹脂、他汀類、煙酸類和苯氧芳酸衍生物。其中吉非羅齊屬于苯氧芳酸類，是一種較新的血脂調(diào)節(jié)劑，其作用機(jī)理主要是抑制極低密度脂蛋白(VLDL)在肝臟的合成，增加脂蛋白脂酶的活性，促進(jìn)VLDL的分解代謝，從而降低TG和低密

2、度脂蛋白的形成。但其在細(xì)胞內(nèi)對脂代謝的調(diào)控機(jī)制尚不清楚，因此我們利用模式生物酵母探究吉非羅齊在細(xì)胞內(nèi)對脂類代謝的調(diào)控機(jī)制。
　　吉非羅齊處理野生型釀酒酵母by4741a后，與我們預(yù)測相反，TAG含量和脂滴數(shù)目均有顯著增加。然后我們逐一檢測細(xì)胞中性脂代謝通路中關(guān)鍵基因缺失（pah1△、tgl3△、tgl4△、tgl3△tgl4△、lro1△、are1△、are2△、dga1△、dgk1△等）后吉非羅齊的升脂效應(yīng)，對比發(fā)現(xiàn)，DGK1敲

3、除之后細(xì)胞內(nèi)TAG和脂滴數(shù)目不再受藥物的影響。初步確定DGK1p可能是吉非羅齊細(xì)胞內(nèi)靶向調(diào)控的酶。
　　由于DGK1p調(diào)控DAG生成PA，因此進(jìn)一步檢測吉非羅齊對細(xì)胞PA含量的影響，結(jié)果表明其可以抑制DGK1p的活性。RT-PCR檢測吉非羅齊處理顯著下調(diào)DGK1的表達(dá)，并且下調(diào)依賴于轉(zhuǎn)錄因子TUP1和CYC8；隨后，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明吉非羅齊通過 TUP1p-CYC8p與DGK1啟動(dòng)子-TATA-高度保守元件（-400bp—-200bp

4、）結(jié)合起調(diào)控作用；同時(shí)，發(fā)現(xiàn)藥物也可以通過上調(diào)具有轉(zhuǎn)錄抑制作用的轉(zhuǎn)錄因子TUP1、CYC8基因的表達(dá)，增強(qiáng)對DGK1基因啟動(dòng)子的抑制作用，從而降低DGK1基因的表達(dá)量，進(jìn)而升高細(xì)胞內(nèi)TAG的含量。最后，我們對pah1△背景下酵母必需基因超表達(dá)文庫進(jìn)行吉非羅齊耐受篩選鑒定，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)NAF1、KIN28、RPL15A等能明顯提高細(xì)胞的藥物抗性，其中大部分與蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄與翻譯息息相關(guān)，為進(jìn)一步研究吉非羅齊通過TUP1、CYC8調(diào)控DGK1對