microRNA-33在代謝綜合征相關HDL異常中的作用及機制探討.pdf

1、背景：
　　 代謝綜合征(metabolicsyndrome，MS)患者體內(nèi)高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）降低總是與甘油三酯(TG)升高相伴而行，而小鼠代謝綜合征模型中無類似人體HDL-C降低的改變，這些現(xiàn)象仍無明確解釋。我們觀察到脂肪細胞與肝細胞共培養(yǎng)可影響肝細胞固醇調節(jié)元件結合蛋白（SREBP-1c）及ATP結合盒轉運體A1(ABCA1)表達，結合最新發(fā)現(xiàn)SREBP基因內(nèi)含子中隱藏了調節(jié)ABCA1的microRNA-33，

2、我們推測代謝綜合征的相關因素可調節(jié)SREBP1-miR33b，導致TG升高與HDL-C同步降低，而小鼠SREBP1基因中缺乏miR-33b是人鼠代謝綜合征血脂異常差異的因素之一。
　　 目的：
　　 探討代謝綜合征相關因素對肝細胞SREBP1/miR-33b的影響及其在調節(jié)肝細胞HDL代謝中的作用。
　　 方法：
　　 分別以100nM胰島素和200ng/mlTNF-α干預人原代肝臟細胞，以不加干預的細胞

3、為對照組，干預24小時后提取各組細胞的總RNA及蛋白，通過實時熒光定量PCR(Real-timepolymerasechainreaction)比較各組中miR-33b，SREBP-1c，SREBP-2，ABCA1，ABCG1，APOA1基因的相對表達量。通過免疫印跡（WesternBlot）方法檢測各組中ABCA1及ABCG1的蛋白表達量。通過閃爍計數(shù)法檢測肝細胞膽固醇流出率。利用轉染試劑LipofectamineTM2000分別以m

4、iR-33b模擬物（mimic50nM）和miR-33b抑制物（inhibitor100nM）轉染人原代肝細胞，6小時后再以100nM胰島素干預，24小時后PCR檢測miR-33b，SREBP-1c及ABCA1基因的相對表達量。
　　 結果：
　　 1.與對照組相比，胰島素干預人原代肝細胞24小時后，可見miR-33b及SREBP-1c表達明顯上調，ABCA1，ABCG1和APOA1基因表達下調，其中ABCA1和ABCG

5、1蛋白表達水平也出現(xiàn)相應下降，apoA-Ⅰ介導的膽固醇流出效率下降，其變化均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。而胰島素干預后SREBP-2基因無明顯變化(P＞0.05)。
　　 2.與對照組相比，TNF-α干預人原代肝細胞24小時后，可見miR-33b及SREBP-1c表達明顯下調，同時ABCA1和APOA1基因表達也出現(xiàn)下降，而ABCG1表達升高，其變化均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。TNF-α干預后SREBP-2基因無明顯變化(

6、P＞0.05)。
　　 3.過表達miR-33b可以下調人原代肝細胞中ABCA1表達水平，沉默miR-33b可以上調ABCA1表達水平;過表達miR-33b后，胰島素干預可以進一步抑制ABCA1，而沉默miR-33b后，胰島素對ABCA1的抑制作用消失（均P＜0.05）。
　　 4.無論過表達或沉默miR-33b后，SREBP-1c表達均無明顯變化，P＞0.05。而同時加入胰島素后，SREBP-1c表達均明顯上升，P＜0