阻斷SDF-1-CXCR4軸對(duì)胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的抑制作用.pdf

1、目的：探討胰腺癌組織中CXCR4表達(dá)與胰腺癌臨床病理特征的關(guān)系；研究胰腺癌細(xì)胞株CXCR4表達(dá)及與增殖、侵襲的關(guān)系；應(yīng)AMD3100及RNA干擾(RNAi)技術(shù)阻斷CXCR4/基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(SDF-1)受體配體系統(tǒng)，探討阻斷CXCR4/ SDF-1受體配體系統(tǒng)對(duì)胰腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的抑制作用及其可能機(jī)制；觀(guān)察胰腺星狀細(xì)胞(PSCs)SDF-1的表達(dá)，應(yīng)用AMD3100及SDF-1中和抗體阻斷SDF-1/CXCR4受體配體系統(tǒng)，

2、探討SDF-1/CXCR4受體配體系統(tǒng)在PSCs促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中的作用。研究SDF-1/CXCR-4受體配體系統(tǒng)在胰腺癌及其PSCs促進(jìn)胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用機(jī)制。 方法：①免疫組織化學(xué)(IHC)方法檢測(cè)胰腺癌及癌旁組織中CXCR4表達(dá)；RT-PCR檢測(cè)PSCs、胰腺癌組織及細(xì)胞系中CXCR4及SDF-1mRNA的表達(dá)；Western blot檢測(cè)PSCs及胰腺癌細(xì)胞株中CXCR4及SDF-1的蛋白表達(dá)；共聚焦顯微鏡檢測(cè)

3、AsPC-1細(xì)胞鈣內(nèi)流，趨化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SDF-1α對(duì)AsPC-1細(xì)胞遷移的影響。②設(shè)計(jì)、構(gòu)建、篩選和鑒定表達(dá)CXCR4 shRNA的慢病毒(LV)載體；MTT試驗(yàn)檢測(cè)AsPC-1細(xì)胞增殖及生長(zhǎng)曲線(xiàn)；細(xì)胞體外黏附試驗(yàn)、遷移及體外侵襲實(shí)驗(yàn)觀(guān)察AsPC-1細(xì)胞的黏附、遷移及侵襲能力；Western blot檢測(cè)檢測(cè)AsPC-1細(xì)胞中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP2)及MMP9的蛋白表達(dá)；IHC檢測(cè)裸鼠移植瘤中微血管密度

4、(MVD)。HE染色觀(guān)察裸鼠肺移植瘤。③組織塊法原代分離并培養(yǎng)人PSCs，免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)檢測(cè)PSCs中α-SMA及Desmin表達(dá)；ELISA檢測(cè)PSCs的上清液中SDF-1α的含量；RT-PCR和Western-blot檢測(cè)PSCs中SDF-1表達(dá)；MTT試驗(yàn)檢測(cè)AsPC-1細(xì)胞增殖及生長(zhǎng)曲線(xiàn)；細(xì)胞遷移及體外侵襲實(shí)驗(yàn)觀(guān)察AsPC-1細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲能力。 結(jié)果：⑴胰腺癌組織中CXCR4的表達(dá)在不同TNM分期及淋巴

5、結(jié)是否轉(zhuǎn)移之間有顯著差異；三個(gè)胰腺癌細(xì)胞株均不同程度地存在CXCR4mRNA及蛋白表達(dá)；胰腺癌組織中存在SDF-1表達(dá)，三個(gè)胰腺癌細(xì)胞系中無(wú)SDF-1表達(dá)；SDF-1α以劑量和時(shí)間依賴(lài)性促進(jìn)AsPC-1的鈣內(nèi)流。⑵SDF-1α促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的增殖、黏附、遷移及侵襲，AsPC-1細(xì)胞增加最為明顯，SW1990細(xì)胞增加程度最低；AMD3100或RNAi可抑制SDF-1α所致的促增殖、侵襲及黏附作用；AMD3100或RNAi可抑制AsPC-1

6、細(xì)胞VEGF、MMP2及MMP9的蛋白表達(dá)；AMD3100可抑制皮下移植瘤的生長(zhǎng)及MVD； RNAi可抑制AsPC-1體內(nèi)血行轉(zhuǎn)移能力。⑶PSCs表達(dá)SDF-1，PSCs上清液(PSC-SN)中可檢測(cè)到SDF-1α蛋白。加入AsPC-1上清液PSCs表達(dá)SDF-1增高，PSCs條件培養(yǎng)液(PSC-CM)可促進(jìn)AsPC-1的增殖、遷移及侵襲，AMD3100或SDF-1中和抗體可抑制這種效應(yīng)。 結(jié)論：①胰腺癌組織CXCR4的表達(dá)與胰