GL-7-ACA?；富蚬こ叹陌l(fā)酵工藝優(yōu)化及酶工程研究.pdf

1、GL-7-ACA?；?EC.3.1.5.11)是兩步酶法催化CPC生產(chǎn)7-ACA的重要工業(yè)用酶之一，它的表達(dá)量和酶活性的增加是提高7-ACA產(chǎn)量的前提。重組大腸桿菌E.coliBL21(DE3)pYW-GA表達(dá)GL-7-ACA?；赋式M成型表達(dá)，其高效表達(dá)的關(guān)鍵技術(shù)是補(bǔ)料策略。 本文探索了組成型重組大腸桿菌EcoliBL21(DE3)PYW-GA高效表達(dá)的發(fā)酵工藝。在搖瓶培養(yǎng)獲得GL-7-ACA?；腹こ叹淖罴寻l(fā)酵條件的基礎(chǔ)

2、上，用5L自控式發(fā)酵罐進(jìn)行分批補(bǔ)料培養(yǎng)。為了減少基因工程菌代謝過(guò)程中乙酸的積累，使GL-7-ACA?；富颢@得高效表達(dá)，發(fā)酵過(guò)程中采用不同的流加方式進(jìn)行補(bǔ)料，同時(shí)對(duì)轉(zhuǎn)速和溶氧等進(jìn)行控制?？疾炝撕闼倭骷?、pH反饋流加和指數(shù)流加三種補(bǔ)料模式，比較得出菌濃最高的是pH8.0反饋流加這一模式，OD<,600>可達(dá)35，而酶活最高的模式是pH7.0反饋流加，最高酶活可達(dá)3463.8U/L。 固定化金屬親和層析技術(shù)以其分離蛋白專(zhuān)一性強(qiáng)而得

3、到廣泛應(yīng)用，本文以EIP-ARG-IDA-Co<'2+>為載體，從可溶性總蛋白中一步分離純化具有His-tag標(biāo)簽的GL-7-ACA?；?。在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了固定化方面的研究，確定固定化最適條件是150～200U/g給酶量與載體比，固定化時(shí)間16h，固定化介質(zhì)pH7.0。固定化酶的最適反應(yīng)溫度為50℃，最適反應(yīng)pH為8.0。同時(shí)還考察了固定化酶的熱穩(wěn)定性，重復(fù)利用性及載體的重復(fù)使用等特性。 大腸桿菌E.coliBL21(DE3)p