豆粕適度酶解研究.pdf

1、豆粕(DSF)適度酶解旨在使其產(chǎn)品組成符合動物營養(yǎng)學模型，現(xiàn)有的評判體系不能滿足這方面研究需要。本課題建立了豆粕水解程度、平均分子量、酶解液中鉬形態(tài)分布和植酸磷釋放率四種分析方法，應用于適度酶解研究，得到兼具營養(yǎng)性和功能性的豆粕酶解液。蛋白質測定方法主要有考馬斯亮藍法(CBB G-250)、紫外吸收法(UV)和凱氏定氮法。研究表明酶解液中蛋白成分，因豆粕來源和所處水解階段不同，分子結構中堿性基團或芳環(huán)氨基酸殘基暴露程度存在顯著差異，使C

2、BB G-250和UV法難以測定酶解液中蛋白的準確含量，而凱氏定氮法不受上述因素影響，呈現(xiàn)出很好的精密度和準確性。酶解液中氨基類化合物的平均分子量更能了解大豆蛋白的實際水解程度，由于茚三酮法測定的主要對象是α-氨基酸，以單一氨基酸為標準定量酶解液中氨基端數(shù)量欠妥；甲醛滴定法測定的是肽和氨基酸中氨基含量之和，結合pH計控制滴定終點，克服了樣品顏色帶來的誤差，使相對標準偏差小于2.5％。鉬是動物必需的微量元素，其含量與形態(tài)直接影響動物對它的

3、吸收，基于新試劑p-甲基偶氮水楊基熒光酮與鉬(Ⅵ)的顯色反應，建立一種新的鉬形態(tài)分布的光度分析方法。鉬配合物的表觀摩爾吸光系數(shù)為1.54×10<'5>L.mol<'-1>·cm<'-1>，反應具有很高的靈敏度和選擇性；酶解液A經(jīng)等電點沉淀除去未水解蛋白后得溶液B，溶液B經(jīng)D301R樹脂吸附后，依次用25mL pH3.6HAc-NaAc和80mL pH 9 NH<,4>Cl-HN<,3>·H<,2>O緩沖溶液洗脫得溶液C和D，分別用光度法

4、測定溶液B、C、D中水解鉬、結合態(tài)鉬(多肽和氨基酸螯合態(tài)鉬)和游離鉬的含量，實現(xiàn)鉬的形態(tài)分布研究。植酸酶可以將動物不能利用的植酸磷轉化為無機磷，孔雀綠-鉬酸銨在聚乙烯醇增敏下，在酸性介質中與磷酸根生成綠色締合物，在635 nm處有最大吸收，表觀摩爾吸光系數(shù)為9.30×10<'4>L．mol<'1>．cm<'-1>，方法選擇性好，測得DSF中含磷0.87％，其中植酸磷占62.13％，將方法應用于植酸酶的作用條件優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)在pH4.5，45

5、℃下添加0.67％植酸酶作用45min可以達到較高的磷釋放率。 本文將整個酶解過程分解成豆粕預處理、蛋白酶解和植酸酶與蛋白酶的協(xié)同性三個方面加以研究。選擇pH3、40℃浸泡2h后沸水浴1.5min，再加入α-淀粉酶于pH6、40℃環(huán)境下作用30min進行預處理，可使水解度提高35％。在單酶法、雙酶法和三酶法酶解DSF工藝中，三酶復合法效果最好。由于植酸酶于酸浸階段加入對蛋白酶的水解無抑制作用，從水解液的營養(yǎng)性和工藝的簡化出發(fā)，最