超聲輔助酶解高溫豆粕制糖肽技術(shù)研究與構(gòu)效分析.pdf

1、高溫豆粕作為大豆提油后的副產(chǎn)物，其蛋白質(zhì)含量高達(dá)40～45％，是一種高性價比的大宗植物蛋白資源，然而高溫豆粕在生產(chǎn)過程中由于經(jīng)過高溫長時處理，豆粕中的蛋白質(zhì)發(fā)生高度變性，其溶解度僅是12～15％，蛋白質(zhì)提取率較低，導(dǎo)致應(yīng)用范圍較窄，加工工序復(fù)雜，成本高，嚴(yán)重降低了高溫豆粕深加工產(chǎn)品的開發(fā)及其使用價值，限制其在食品加工領(lǐng)域的應(yīng)用。本文采用超聲波復(fù)合酶制劑處理高溫豆粕，依次利用乙醇沉淀、DEAE-Cellulose52離子交換層析、Seph

2、adxeG-25凝膠色譜層析分離純化，制備高溫豆粕水溶性糖肽，探究高溫豆粕糖肽理化特性和構(gòu)效分析，拓展了高溫豆粕資源的利用價值，增強(qiáng)高溫豆粕的高附加值，豐富活性糖肽的種類和功能，富有理論和現(xiàn)實意義。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴超聲波同步纖維素酶酶解，在超聲功率300 W，超聲時間20 min，底物濃度8.36％、纖維素酶添加量646 U/g、酶解pH值為4.1時，可溶性多肽含量為18.51±0.36％，可溶性多糖含量為10.83±

3、0.32％。⑵蛋白酶添加量61200 U、酶解pH9、酶解時間3h、酶解溫度56.4℃，可溶性多肽含量為25.47±0.81％，可溶性多糖含量為13.22±0.49％。⑶采用無水乙醇（加入量為75％ V/V）沉淀粗品糖肽，透析、濃縮，利用DEAE-Cellulose52離子交換層析分離、純化三種成分:糖肽a1、糖肽a2、糖肽a3，并對三種成分進(jìn)行抗氧化活性檢測，選擇具有抗氧化能力較強(qiáng)的糖肽a2進(jìn)一步分離純化;采用Sephadex G-2

4、5凝膠色譜層析分離、純化后獲得篩選具有糖肽a2b1、糖肽a2b2進(jìn)行抗氧化活性檢測，糖肽a2b1為本研究所提取的具有抗氧化功能的水溶性高溫豆粕糖肽。⑷高溫豆粕糖肽的蛋白含量為61.28±0.83％，糖含量為29.76±0.26％; SDS-PAGE電泳試驗表明高溫豆粕糖肽為單一條帶，分子量為4383 D。高溫豆粕糖肽溶解性較高，NSI值高于80％; DSC測定分析，高溫豆粕糖肽的熱變性溫度為109.9℃，變性熱焓值為150.2 J/g;

5、高溫豆粕糖肽的FRAP和抑制O2-能力顯著高于高溫豆粕和高溫豆粕大豆肽。⑸高溫豆粕糖肽含量最多三種氨基酸:谷氨酸、天門冬氨酸、賴氨酸;β-消除反應(yīng)，表明高溫豆粕糖肽存在O-糖肽鍵;紅外光譜分析，表明糖肽的糖環(huán)為吡喃環(huán)、糖苷鍵為α-型糖苷鍵結(jié)構(gòu);圓二色譜分析，糖肽的α-螺旋4.7％、β-折疊25.6％、β-轉(zhuǎn)角19.2％、無規(guī)則卷曲51.5％，高溫豆粕糖肽與天然蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)存在差別。⑹利用超聲波復(fù)合酶制劑處理高溫豆粕，分離純化制備一種高