抗Aβ抗體清除Aβ寡聚體后BV2細胞對SH-SY5Y細胞損傷的影響及機制.pdf

1、目的：阿爾茨海默病(Alzheimer's disease AD)是中樞神經系統變性疾病，常呈進行性發(fā)展，給社會造成了巨大影響。AD的病理特征是腦組織的淀粉樣斑塊沉積和神經元內的神經纖維纏結。目前，關于AD病因的主要假說是淀粉樣蛋白級聯假說。這一理論認為β淀粉樣蛋白（Beta amyloid peptide Aβ），尤其是高毒性的低聚形式是促發(fā)疾病發(fā)生的主要原因。最近研究表明，Aβ1-42寡聚體(Aβ1-42oligomers)對神經元

2、的毒性及誘導膠質細胞的炎癥反應最強，且被認為是AD炎癥病理生理發(fā)生發(fā)展的早期始發(fā)因子。
　　P38MAPK是分子量為38KD的多肽，存在4種亞型（α，β，γ，δ）。所有亞型都通過磷酸化Thr180/Tyr182而激活。在多種底物（激酶和轉錄因子）中借助p38依賴的絲/蘇氨酸磷酸化使p38MAPK激活可引起不同的適應性反應。對AD患者的大腦進行尸檢后發(fā)現，磷酸化的p38MAPK的免疫活性與神經炎性的β-淀粉樣斑塊和神經元內的神經纖維

3、纏結相關。且相關研究表明p38MAPK的激活發(fā)生在AD的超早期。進一步研究表明，p38MAPK信號通路可通過多種途徑參與AD的病理過程，其中由p38MAPK介導的免疫炎癥機制參與了AD病理的發(fā)生發(fā)展過程。研究表明，Aβ1-42寡聚體可通過激活小膠質細胞中的p38MAPK通路，釋放炎癥介質如腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等從而引起神經元的損傷。
　　AD的免疫治療旨在清除患者腦內的Aβ，從而阻止神經退行性變的進展。一些主動和被動免疫

4、方法正在臨床試驗階段。然而，有臨床研究顯示，用抗Aβ抗體清除Aβ后AD患者的認知及腦脊液中tau蛋白水平并沒有改善，且某些免疫治療甚至可引起腦膜腦炎及血管性水腫等不良反應。
　　本實驗研究抗Aβ1-42抗體清除Aβ1-42寡聚體后預處理的BV2細胞對SH-SY5Y細胞損傷的影響及機制，觀察清除Aβ后神經退行性變是否繼續(xù)存在及相關機制。
　　方法：用2umol/LAβ1-42寡聚體作用于BV2細胞為激活組，加入2umol/LA

5、β1-42寡聚體6h后加入12ul抗Aβ1-42抗體清除Aβ1-42為抗體組，對照組為加入等量的生理鹽水，各組培養(yǎng)24h。將各組收集的條件培養(yǎng)液作用于SH-SY5Y細胞，培養(yǎng)24h。1、MTT法檢測神經細胞活力:將SH-SY5Y細胞接種于96孔板中，培養(yǎng)過夜后更換上述收集的3組條件培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24h。每孔加入5g/L MTT溶液20ul，37度孵育4h后，加入DMSO150ul并振蕩15min，于570nm波長處測定各孔A570值，并

6、計算細胞存活率。2、用ELISA法檢測BV2細胞上清液中TNF-α水平。3、Western印跡法檢測磷酸化p38MAPK的表達情況。數據以均數±標準差表示，采用SPSS19.0進行t檢驗，認為p＜0.05差異有統計學意義。
　　結果：1、MTT法檢測細胞活力:與對照組相比，Aβ1-42寡聚體激活組和抗體組分別作用于神經細胞24h后，細胞存活率明顯下降，分別為（61.65±3.04）％和（13.55±3.04）％，抗體組的神經細胞存

7、活率明顯低于Aβ1-42寡聚體激活組(p＜0.01)。
　　2、ELISA法檢測BV2細胞上清液中TNF-α水平:與對照組相比，Aβ1-42寡聚體激活組和抗體組均可引起TNF-α的釋放，且水平明顯高于對照組(p＜0.05)。而Aβ1-42寡聚體激活組和抗體組引起的TNF-α升高水平相當，二者無統計學差異。
　　3、Western印跡法檢測磷酸化p38MAPK的表達情況:Aβ1-42寡聚體可以誘導磷酸化p38MAPK的表達且作