葫蘆素B對(duì)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞增殖和凋亡的影響及機(jī)制研究.pdf

1、神經(jīng)母細(xì)胞瘤(Neuroblastoma，NB)是一種胚胎性惡性腫瘤，是兒童最常見(jiàn)的顱外實(shí)體腫瘤之一。神經(jīng)母細(xì)胞瘤在嬰幼兒中的發(fā)病率及死亡率高，預(yù)后差。目前為止，尚未有十分行之有效的治療方法。葫蘆素B(cucurbitacin B, CuB)是一種中藥，具有抗腫瘤、保肝、提高機(jī)體免疫力等多種作用，近年來(lái)其抑制腫瘤的作用逐步成為研究熱點(diǎn)，但其抗腫瘤的機(jī)制尚未揭示。本文以人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞為研究材料，運(yùn)用MTT、PI染色、An

2、nexin V-FITC/PI染色、流式細(xì)胞術(shù)、RT-PCR、Western blot等方法研究CuB對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞增殖的影響，為CuB預(yù)防和治療神經(jīng)母細(xì)胞瘤提供理論基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：
　?。?）CuB能有效抑制人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞增殖。MTT檢測(cè)結(jié)果表明，隨著時(shí)間和濃度的增加，CuB對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞的抑制作用增強(qiáng)；CuB作用24h的半抑制濃度為8μM。
　?。?） CuB對(duì)SH-SY5Y細(xì)胞G2

3、/M期進(jìn)行阻滯。通過(guò)不同濃度梯度的CuB處理神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞24h后，運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的周期情況，隨著藥物濃度的增加表現(xiàn)出明顯的G2/M期阻滯；此外，不同濃度的CuB處理SH-SY5Y細(xì)胞24h后，ROS明顯升高。
　?。?）RT-PCR結(jié)果顯示CuB呈時(shí)間和劑量依賴性抑制G2/M期關(guān)鍵基因CyclinB1, CDK1和抗基凋亡因 Bcl-2轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)，活化促凋亡基因Bax轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)；Westernbl