蜂斗菜素對SK-N-SH細(xì)胞和SH-SY5Y細(xì)胞增殖抑制作用的比較研究.pdf

1、神經(jīng)母細(xì)胞瘤(Neuroblastoma，NB)是嬰幼兒最為常見的惡性腫瘤，以其發(fā)病率和死亡率高、預(yù)后差、有家族傾向性等特點(diǎn)被稱為“兒童癌癥之王”。蜂斗菜作為一種植物藥，在歐洲已經(jīng)有幾百年的應(yīng)用歷史，經(jīng)臨床實(shí)驗(yàn)證實(shí)，其在治療偏頭疼、過敏性鼻炎、哮喘、泌尿生殖道痙攣等方面，療效可靠，不良反應(yīng)少。研究發(fā)現(xiàn)蜂斗菜素(petasin)作為一種來源天然的植物提取物，具有明顯的抗人神經(jīng)母細(xì)胞瘤作用。本研究中我們以兩種人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株SK-N-S

2、H細(xì)胞和SH-SY5Y細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對象，探討蜂斗菜素抗神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的作用機(jī)制，以期為將其開發(fā)用于預(yù)防和治療神經(jīng)母細(xì)胞瘤提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 本研究首先就蜂斗菜素對SK-N-SH和SH-SY5Y細(xì)胞的增殖抑制作用進(jìn)行了初步的比較研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)蜂斗菜素對SK-N-SH和SH-SY5Y細(xì)胞均具有不同程度的增殖抑制作用，且呈現(xiàn)明顯的時間和濃度依賴性，尤其是對SK-N-SH細(xì)胞的增殖抑制作用相對化學(xué)治療藥順鉑較強(qiáng)（蜂斗菜素和順鉑作用72

3、h后的IC50分別為0.8μmol·L-1和3μmol·L-1）。
　　 為進(jìn)一步探索其作用機(jī)制，我們觀察了蜂斗菜素對SK-N-SH和SH-SY5Y細(xì)胞增殖周期和凋亡的影響，并對MAPK蛋白通路等方面做了深入研究。流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期，結(jié)果發(fā)現(xiàn)蜂斗菜素作用48h后，能將SK-N-SH細(xì)胞周期阻滯于G1/G0期;將SH-SY5Y細(xì)胞周期阻滯于S期。流式細(xì)胞儀和Hoechst33342/PI雙染色法檢測蜂斗菜素對細(xì)胞凋亡的影響，采

4、用順鉑作為誘導(dǎo)SK-N-SH和SH-SY5Y細(xì)胞凋亡的陽性對照藥物，結(jié)果顯示蜂斗菜素能明顯誘導(dǎo)SH-SY5Y細(xì)胞凋亡，而不能誘導(dǎo)SK-N-SH細(xì)胞產(chǎn)生凋亡;在熒光顯微鏡視野中，SK-N-SH細(xì)胞核保持完整，呈現(xiàn)微弱藍(lán)色熒光，而SH-SY5Y細(xì)胞核均出現(xiàn)破裂，呈現(xiàn)明亮藍(lán)色熒光，高濃度的蜂斗菜素作用SK-N-SH細(xì)胞后，出現(xiàn)明亮的紅色熒光，說明細(xì)胞均已壞死。蛋白免疫印記法（westernblotting）檢測蜂斗菜素作用后SK-N-SH和S

5、H-SY5Y細(xì)胞中ERK1/2、MEK和p38蛋白磷酸化表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，蜂斗菜素能瞬時上調(diào)SK-N-SH和SH-SY5Y細(xì)胞的ERK1/2和MEK蛋白磷酸化水平，且呈現(xiàn)一定的濃度依賴性，12h后又會恢復(fù)至正常水平;同時蜂斗菜素作用后，SK-N-SH細(xì)胞的p38蛋白磷酸化水平?jīng)]有明顯變化，而SH-SY5Y細(xì)胞的p38蛋白磷酸化水平明顯上調(diào)。
　　 綜上所述，蜂斗菜素對人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH和SH-SY5Y兩種細(xì)胞株均有明