八角有效部位提取及其生物活性研究.pdf

1、本論文以廣西特色林產(chǎn)資源八角和提取揮發(fā)油后的八角渣為原料,系統(tǒng)進(jìn)行了多糖、總黃酮、抗氧化劑和莽草酸等多個(gè)有效部位提取及其生物活性研究,大大提高了八角的綜合利用率。其中,揮發(fā)油提取率為7％,多糖提取率為11％,總黃酮提取率為24％,莽草酸提取率為13％。提取揮發(fā)油后剩余的八角渣中,多糖提取率為7％,總黃酮提取率為17％。具體的工作有:開展了以溶劑法提取八角多糖和總黃酮成分的研究,優(yōu)化提取工藝;分離、純化并分析八角多糖的結(jié)構(gòu);考察八角多糖的

2、體內(nèi)抗腫瘤活性以及八角黃酮的降血壓活性;從八角和八角渣中提取抗氧化劑,并采用多種體系評(píng)價(jià)其抗氧化性能;探索和改進(jìn)八角莽草酸的提取純化工藝。主要研究?jī)?nèi)容和取得的成果如下:
　　 (1)建立了用3,5-二硝基水楊酸吸光光度法測(cè)定八角及八角渣中的總糖和還原糖含量的分析方法,操作簡(jiǎn)單方便,精密度、重現(xiàn)性良好。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:八角經(jīng)過一次水中蒸餾提取揮發(fā)油后,剩余的殘?jiān)腥院邢喈?dāng)數(shù)量的、值得利用的總糖和還原糖(分別占原有含量的79.4％、

3、31.4％)。通過正交試驗(yàn)法對(duì)八角多糖的提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)化,各個(gè)因素對(duì)提取效果影響的主次順序?yàn)樘崛囟龋咎崛〈螖?shù)＞料液比＞提取時(shí)間,八角多糖的最佳提取條件為A3B2C1D2,即提取溫度100℃、時(shí)間4h、提取料液比為1:11、提取次數(shù)2次,最佳提取率可達(dá)10.50％。
　　 (2)利用DEAE-纖維素離子交換柱、凝膠SephadexG-100柱分離純化了八角粗多糖,制得單一組分的八角精制多糖,HPGPC分析得到其分子量為520

4、47。利用HPLC分析了八角多糖的單糖組成:由葡萄糖、樹膠醛糖、木糖組成,含量分別為50.54mg/g、11.01mg/g、2.301mg/g,摩爾比為18.3:4.8:1。同時(shí)利用HPLC分析了八角中的單糖組分:由葡萄糖和果糖組成,含量分別為0.5730mg/g、9.461mg/g。利用紅外光譜分析了八角多糖的結(jié)構(gòu)。動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示,八角粗多糖對(duì)S180肉瘤有一定的抑制作用,且粗多糖對(duì)免疫器官無抑制作用,毒副作用小。
　　 (

5、3)通過正交試驗(yàn)法分別對(duì)八角和八角渣中的總黃酮提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)化,并進(jìn)行了驗(yàn)證試驗(yàn),結(jié)果顯示運(yùn)用最佳提取工藝,八角中總黃酮提取率為23.61％,八角渣中總黃酮提取率為16.81％,說明八角和八角渣中含有相當(dāng)豐富的、可利用的黃酮類化合物。在考查八角總黃酮提取影響因素的正交試驗(yàn)中,四個(gè)因素對(duì)提取效果影響的主次順序?yàn)樘崛〈螖?shù)＞料液比＞提取時(shí)間＞乙醇體積分?jǐn)?shù)。八角總黃酮最佳提取條件為乙醇體積分?jǐn)?shù)為80％、料液比為1:30、提取時(shí)間120min

6、、提取次數(shù)3次。在考查八角殘?jiān)傸S酮提取影響因素的正交試驗(yàn)中,四個(gè)因素對(duì)提取效果影響的主次順序?yàn)橐掖俭w積分?jǐn)?shù)＞提取次數(shù)＞提取時(shí)間＞料液比。八角殘?jiān)傸S酮最佳提取條件為50％乙醇、料液比為1:10、提取時(shí)間120min、提取次數(shù)3次。選擇動(dòng)物慢性降壓實(shí)驗(yàn)用于觀察八角總黃酮的降壓作用。結(jié)果表明,八角總黃酮對(duì)高血壓大鼠無明顯的降壓作用。
　　 (4)從八角和八角渣中提取抗氧化劑,并采用多種體系評(píng)價(jià)其抗氧化性能。結(jié)果表明:八角提取物對(duì)羥

7、自由基、超氧陰離子和DPPH·均具有較強(qiáng)的清除作用,且在一定的濃度范圍內(nèi)其自由基清除率隨濃度的增加呈上升趨勢(shì)。其中對(duì)DPPH·的清除能力最強(qiáng),各提取物的清除能力均強(qiáng)于抗壞血酸兩倍以上。根據(jù)IC50值比較出各物質(zhì)的清除能力大小,清除羥基自由基次序?yàn)?抗壞血酸＞八角渣水提液＞八角渣醇提液＞八角醇沉液＞八角水提液＞八角醇提液;清除超氧陰離子自由基次序?yàn)?抗壞血酸＞八角渣醇提液＞八角渣水提液＞八角醇提液＞八角水提液＞八角醇沉液;清除DPPH·次

8、序?yàn)?八角渣水提液＞八角渣醇提液＞八角水提液＞八角醇提液＞八角醇沉液＞抗壞血酸。實(shí)驗(yàn)方法不同,清除的自由基不同,各種物質(zhì)表現(xiàn)出來的清除能力的大小次序也不盡相同。在實(shí)驗(yàn)所考察的三種清除自由基體系中,八角渣提取物的清除能力均強(qiáng)于八角提取物。
　　 (5)探索和改進(jìn)八角莽草酸的提取純化工藝,確定了高效提取純化莽草酸的工藝路線:微波提取——醇沉純化——-柱層析法進(jìn)一步純化莽草酸。并建立了HPLC測(cè)定莽草酸的方法。醇沉法用于八角莽草酸的純