2023年全國碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩73頁(yè)未讀, 繼續免費閱讀

下載本文檔

版權說(shuō)明:本文檔由用戶(hù)提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進(jìn)行舉報或認領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、E(spl)my基因是果蠅中的剪切增強子,為Notch信號通路的下游調控靶基因,與果蠅的神經(jīng)發(fā)育調節有關(guān),目前該方面的研究主要在果蠅中進(jìn)行,家蠶、小鼠等哺乳動(dòng)物中也有發(fā)現Notch途徑的保守靶基因序列,有關(guān)其編碼的蛋白功能研究報道甚少。
   家蠶Bmmy(Bombyxmori,E(spl)my)是果蠅E(spl)my的同源基因,GenBank登錄號為AB474582,該基因ORF框為747bp,編碼249個(gè)氨基酸殘基,預測分子

2、量為27.91kDa。經(jīng)生物信息學(xué)分析發(fā)現該蛋白在體虱、大紅斑蝶、火蟻、谷蛀蟲(chóng)和切葉蜂中的都有高度保守的同源序列。RT-PCR方法從化蛹第三天的蛹組織中克隆得到完整ORF片段,并克隆到T載體上,重組質(zhì)粒轉化E.coliTG1感受態(tài)細胞,挑選克隆培養后提質(zhì)粒經(jīng)PCR和酶切鑒定后,連接到表達載體pET-28a上,構建融合蛋白表達載體pET-28a-Bmmy,將該重組質(zhì)粒轉化大腸桿菌BL21(DE3),經(jīng)提質(zhì)粒、雙酶切鑒定正確后,測序分析。陽(yáng)

3、性克隆培養后經(jīng)IPTG誘導表達,菌體總蛋白SDS-PAGE分析結果發(fā)現,在約35kDa的位置有一條特異性目的條帶與預期值(Bmmy27.91kDa,加融合標簽3.56kDa)相符,重組蛋白以包涵體的形式存在,Westernblot鑒定正確。用8M尿素溶解該蛋白,采用用Ni親和層析的方法純化,純化蛋白以1mg/次的劑量皮下注射新西蘭大白兔,免疫后采血制備多克隆抗體,ELISA檢測其效價(jià)為1∶12800。用該抗體檢測Bmmy蛋白在家蠶蛹、五

4、齡幼蟲(chóng)的組織分布及家蠶BmN亞細胞定位。通過(guò)Westemblot、實(shí)時(shí)熒光定量PCR和免疫組化發(fā)現Bmmy在家蠶不同發(fā)育時(shí)期的mRNA轉錄水平和蛋白表達水平有較大差異,蛹和卵的表達量較高,而在四齡幼蟲(chóng)和蛾中表達較少;在家蠶五齡幼蟲(chóng)各組織中頭、皮、性腺、氣門(mén)、脂肪體、絲腺中均較高表達,而在馬氏管、血淋巴液和腸較少。但是各個(gè)時(shí)期熒光定量PCR結果顯示該基因在五齡幼蟲(chóng)、蛾、一齡幼蟲(chóng)中的mRNA水平含量較高;各個(gè)組織熒光定量PCR結果顯示該基因

5、在腸、皮、馬氏管部位的mRNA水平含量較高,與Westemblot蛋白檢測結果表達不完全一致,該蛋白表達可能存在翻譯水平的調控;蛾四個(gè)部位免疫印跡顯示該蛋白在胸部表達量最高。免疫組化結果顯示該蛋白主要分布在五齡幼蟲(chóng)頭部、絲腺、皮、性腺以及蛹的頭部、腸道及體壁。亞細胞定位結果表明,該蛋白主要分布在細胞質(zhì)中。分別采用不同時(shí)間和梯度濃度的Notch信號途徑阻斷劑DAPT處理家蠶BmN細胞,之后提取細胞的總RNA,用熒光定量PCR檢測Bmmy基

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶(hù)所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內容里面會(huì )有圖紙預覽,若沒(méi)有圖紙預覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶(hù)上傳內容的表現方式做保護處理,對用戶(hù)上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔用戶(hù)因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論