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1、浙江理工大學(xué)碩士學(xué)位論文家蠶Sir2基因的表達(dá)及其功能的初步研究姓名:梁丹軍申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師:張耀洲20100301浙江理工人學(xué)碩十學(xué)位論文AbstractSir2(silenceinformationregulator2)familyisatypeofconserveddependedNADhistone/nonhistoneclassIIIdeacetylasewhichcouldbefoundf
2、romarchaeastomammalsAsaSir2proteinfamilysirtuinsplayallimportantroleinphysiologicalregulationsuchasnervoussystem,longevityandSOonAnewgeneWasobtainedfrompupaecDNAlibraryofsilkwormconstructedbyourlaboratoryAftersequenceali
3、gnmentsanalysedinNCBI,itWaspresumedthatthisgenecodedSir2relatedproteinandWasnamedasBmSir2,ofwhichtheGenBankaccessionnumberWasNM001043472ThegenehasanORFof1164bpcodingapolypeptideof387aminoacidresiduesItcontainsaSIRTldomai
4、nofSIR2superfamilywimapredictedmolecularmassof4337kDandatheoreticalpIof494BmSir2WasclonedintopET一28a()vectorandtransformedintoEcoliRosettacompetentcellsforexpressionThefusionproteinWasexpressedsuccessfullyinRosettabyaddi
5、ngIPTGasinductorThemolecularweightofthisfusionproteinwithHis—tagis4787kDAfterNi2affinitychromatographytheHisBmSir2washighlypurifiedandusedtoimmunizeamaleNewZealandrabbittoobtainthepolyclonalantibodyagainstBmSir2whosetite
6、rWaslargerthan1:12800byELISAassayanalysisTotalproteinsofvariousdevelopmentalstagesofsilkwormandthedifferenttissuesproteinsofthefifthinstarlarvaewereextractedforWesternblotanalysisTheresultsshowedthatthedistributingofBmSi
7、r2infourstagesofsilkwormisdifferentwitllthehighestintheeggandthelowestinthefifthinstarlarvaeInthefifthinstarlarvae,BmSir2proteinwasonlyfoundinfourdifferentlarva’Stissues:Silkgland,fat,tracheaandheadSubcellularlocalizatio
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