雌激素對宮腔粘連纖維化進程及叉頭框F2表達的影響.pdf

1、背景:
　　宮腔粘連(IUAs)是指創(chuàng)傷、感染等各種原因所致子宮內膜基底層損傷后，宮腔部分或全部粘連。近年研究表明，子宮內膜纖維化是IUAs的主要病理學特征，是其本質。叉頭框F2(FoxF2)是器官發(fā)育、細胞外基質合成、上皮-間質細胞轉化中的重要轉錄調節(jié)因子，參與了多種器官的纖維化過程。FoxF2在IUAs的作用尚未見文獻報道。雌激素是存在于女性體內的最主要性激素，在IUAs治療中常作為經驗性治療被臨床廣泛應用，但因療效不一、基礎

2、研究缺乏，其應用劑量仍存在廣泛爭議。本實驗擬探討FoxF2在IUAs中的表達及不同濃度雌激素對IUAs纖維化進程和FoxF2表達的影響。
　　第一章 FoxF2在宮腔粘連細胞模型中的表達及意義
　　目的:
　　探討FoxF2在IUAs細胞模型中的表達。
　　方法:
　　1.原代培養(yǎng)人子宮內膜基質細胞(HESCs)。
　　2.免疫細胞化學法進行細胞鑒定。
　　3.建立IUAs細胞模型:用0和10n

3、g/ml轉化生長因子β1(TGF-β1)分別作用于HESCs48h作為對照組和模型組。
　　4.實時熒光定量PCR(qPCR)和蛋白質印跡法(WB)檢測α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、膠原I(COLI)及FoxF2的mRNA和蛋白表達。
　　結果:
　　1.原代培養(yǎng)的HESCs形態(tài)穩(wěn)定，生長活性好。
　　2.免疫細胞化學法檢測細胞波形蛋白表達陽性，且波形蛋白陽性細胞比率高，而角蛋白18表達陰性，證實為HESCs

4、，且純度高。
　　3.與對照組相比，模型組α-SMA、COLI及FoxF2的mRNA和蛋白表達均顯著性增高（P＜0.05）。
　　結論:
　　1.10ng/ml TGF-β1可誘導HESCs向肌成纖維細胞轉化，引起纖維化標志物α-SMA和COLI的表達穩(wěn)定性增加，從而建立IUAs細胞模型。
　　2.FoxF2在IUAs中高表達，提示FoxF2可能參與IUAs纖維化進程。
　　第二章 雌激素對宮腔粘連纖維化進

5、程及FoxF2表達的影響
　　目的:
　　探討不同濃度雌激素對IUAs纖維化進程及FoxF2表達的影響。
　　方法:
　　1.配置10-6、10-8、10-10、10-12mol/L的雌激素工作液。
　　2.本實驗分為5組，分別為模型組、10-6mol/L E2組、10-8mol/L E2組、10-10mol/L E2組、10-12mol/L E2組。先用10ng/ml TGF-β1作用于HESCs48h以

6、建立IUAs細胞模型，再用上述不同濃度雌激素作用于該模型中48h。
　　3.qPCR和WB法檢測α-SMA、COLI及FoxF2的mRNA和蛋白表達。
　　結果:
　　1.qPCR結果:與模型組相比，10-6、10-8、10-10mol/L E2組α-SMA、COLI、FoxF2mRNA表達均下降（10-10mol/L E2組COLI:P＞0.05，其余各組P＜0.05）;10-12mol/L E2組α-SMA、COL

7、I mRNA表達上升(P＞0.05)，FoxF2mRNA表達下降(P＜0.05)。
　　2.WB結果:與模型組相比，10-6、10-8、10-10mol/L E2組α-SMA、COLI、FoxF2蛋白表達均下降(P＜0.05);10-12mol/L E2組α-SMA蛋白表達上升(P＞0.05)，COLI和FoxF2蛋白表達均下降(P＜0.05)。
　　結論:
　　17β-雌二醇可在一定范圍內下調α-SMA和COLI的表