雷帕霉素對大鼠肝纖維化進(jìn)程的影響.pdf

1、[目的]
　　利用雷帕霉素（Rapamycin，RAPA）對大鼠肝纖維化模型的治療，觀察RAPA對大鼠肝纖維化進(jìn)程的影響，探討RAPA作為治療肝纖維化的候選藥物的可行性及相關(guān)作用機(jī)制。
　　[方法]
　　實驗分為3組:A組為健康鼠對照組，B組為肝纖維化模型對照組，C組為RAPA處理組（即肝纖維化模型+RAPA組）。A組，B組和C組各10只雄性大鼠。B和C組按照3mL/kg體重在皮下注射40％體積濃度的四氯化碳油溶液每周

2、2次，連續(xù)8周，空白組皮下注射生理鹽水。在建立肝纖維化模型期間，C組在第六周予以RAPA2mg/kg體重灌胃，每天一次，持續(xù)兩周，A和B組用生理鹽水灌胃。于第八周處死所有大鼠，取肝臟組織進(jìn)行以下檢測:固定大鼠肝組織并制作石蠟切片進(jìn)行HE染色觀察各組大鼠肝結(jié)構(gòu)變化:
　　1.固定大鼠肝組織并制作石蠟切片進(jìn)行HE染色觀察各組大鼠肝結(jié)構(gòu)變化。
　　2.對PAI-1.TIMP-1.MMP-2.MMP-13進(jìn)行免疫組化檢測。
　

3、　3.提取大鼠肝臟總RNA，進(jìn)行RT-PCR檢測，指標(biāo)包括PAI-1，TIMP-1，MMP2, MMP-13。
　　[結(jié)果]
　　1.四氯化碳油建立肝纖維化模型，通過病理組織切片觀察造模成功。
　　2.免疫組化顯示，PAI-1，TIMP-1，MMP2，MMP-13的吸光度值，在三組之間的互相比較有差異，均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。與健康鼠相比，肝纖維化大鼠的PAI-1表達(dá)顯著上升(P＜0.05)，但在經(jīng)過RAPA治

4、療后，PAI-1表達(dá)有明顯下降，但仍高于正常水平，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。與健康鼠相比，肝纖維化大鼠的TIMP-1表達(dá)也有明顯上升(P＜0.05)，在經(jīng)過RAPA治療后，表達(dá)有明顯下降(P＜0.05)，但仍高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。肝纖維化大鼠的MMP-2表達(dá)相比健康鼠上升(P＜0.05)，經(jīng)過RAPA治療后，表達(dá)下降，與肝纖維化大鼠相比均有差異(P＜0.05)，與健康鼠相比仍有差異(P＜0.05).肝纖維

5、化大鼠的MMP-13表達(dá)相比健康鼠上升(P＜0.05)，經(jīng)過RAPA治療后，表達(dá)上升明顯，與肝纖維化大鼠相比均有差異(P＜0.05)。
　　3.RT-PCR顯示，PAI-1，TIMP-1，MMP2，MMP-13 mRNA的陽性表達(dá)在三組間的互相比較有差異，均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。與健康鼠相比，肝纖維化大鼠的PAI-1mRNA表達(dá)明顯上升，但在經(jīng)過RAPA治療后，PAI-1表達(dá)有明顯下降，但仍高于正常水平，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(

6、P＜0.05)。與健康鼠相比，肝纖維化大鼠TIMP-1表達(dá)有顯著上升，經(jīng)過RAPA治療后，TIMP-1表達(dá)有下降，但仍高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。肝纖維化大鼠的MMP-2表達(dá)相比健康鼠有上升(P＜0.05)，經(jīng)過RAPA治療后，MMP-2的表達(dá)下降(P＜0.05)，與健康鼠相比仍有差異(P＜0.05)。肝纖維化大鼠的MMP-13表達(dá)相比健康鼠有上升(P＜0.05)，經(jīng)過RAPA治療后，MMP-13的表達(dá)上升明顯(P＜0

7、.05)。
　　4.進(jìn)行MMP-2/TIMP-1，MMP-13/TIMP-1 mRNA的比值在各組的比較;對照組MMP-2/TIMP-1 mRNA約為1.076，模型組為1.4077，RAPA組為1.109，三組互相比值均沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。對照組MMP-13/TIMP-1 mRNA約為0.8756，模型組為0.34，RAPA組為5.4165，三組互相的比值升高均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　[結(jié)論]