干細胞治療宮腔粘連抗纖維化作用機制的探索.pdf

1、目的：
　　評估人臍帶間充質(zhì)干細胞（UCMSC）、輸卵管內(nèi)膜干細胞（FMMSC）和子宮內(nèi)膜干細胞（EnMSC）的抗纖維化作用潛能，初步探索干細胞治療宮腔粘連抗纖維化的作用機制，尋求一種更好的干細胞用于宮腔粘連抗纖維化的治療。
　　方法：
　　體外分離、培養(yǎng)及鑒定人UCMSC、EnMSC和FMMSC，倒置顯微鏡觀察其細胞形態(tài)，流式細胞儀進行細胞表型分析和周期測定，平板細胞克隆形成試驗檢測其增殖能力，CCK-8法判斷其生長

2、特性，核型分析檢測其遺傳穩(wěn)定性，體外誘導(dǎo)分化實驗證明其多向分化潛能，Real Time PCR方法檢測UCMSC、EnMSC和FMMSC抗纖維化相關(guān)蛋白相對表達量。
　　結(jié)果：
　　1.三種不同組織來源的細胞接種于MSC完全培養(yǎng)基后，約12h即見貼壁細胞，培養(yǎng)至5d時，細胞融合達80％左右，所有細胞傳至P5代，倒置顯微鏡下觀察，表現(xiàn)為均一長梭形，并呈漩渦狀生長，UC來源的細胞形態(tài)更為均一，細長，并且排列緊密，F(xiàn)M和En來源細

3、胞形態(tài)立體感更強，二者形態(tài)更為相似。
　　2.三種MSC均陽性表達CD90、CD73、CD105、CD29、CD44、CD166和HLA-ABC，陰性表達CD14、CD19、CD45、CD34和HLA-DR。
　　3.細胞周期檢測結(jié)果顯示，F(xiàn)MMSC中處于DNA合成期（G2+S期）的細胞比例高于UCMSC和EnMSC。
　　4.平板細胞克隆形成試驗結(jié)果顯示，UCMSC形成的克隆團為136±26.32個， FMMSC形成

4、的克隆團為89±5.34個，EnMSC形成的克隆團為91.6±2.7個，克隆形成率分別為136%±26.32%、89%±5.34%、91.6%±2.7%。UCMSC和FMMSC、UCMSC和 EnMSC克隆團數(shù)目及克隆形成率差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），F(xiàn)MMSC和EnMSC克隆團數(shù)目及克隆形成率差異無統(tǒng)計學意義。
　　5.三種細胞增殖曲線均呈S型。UCMSC潛伏時間較短，于24h左右即進入對數(shù)生長期。FMMSC于4-6d進入

5、對數(shù)生長期后生長快速，于7-8d進入平臺期。
　　6.核型結(jié)果符合樣本來源，此方法所培養(yǎng)的細胞具有遺傳穩(wěn)定性。
　　7.三種干細胞在體外均具有成脂、成骨和成軟骨誘導(dǎo)分化的能力。
　　8.抗纖維化相關(guān)蛋白mRNA表達結(jié)果顯示，F(xiàn)MMSC和EnMSC分泌的HGF、IL-10和IFN-γ均高于UCMSC（P<0.05），而FMMSC和EnMSC分泌HGF、IL-10和IFN-γ無差別。三組干細胞分泌bFGF、Adrenome

6、dullin和lefty無統(tǒng)計學差異，但根據(jù)數(shù)值目測應(yīng)該是有差異的，目測FMMSC和EnMSC分泌的bFGF相對表達量多于UCMSC，EnMSC分泌的Adrenomedullin顯著多于FMMSC和EnMSC，F(xiàn)MMSC分泌的lefty多于EnMSC，EnMSC分泌的lefty多于UCMSC。
　　結(jié)論：
　　1.UCMSC的增殖能力高于FMMSC和EnMSC，但FMMSC的增殖速度較快；
　　2.FMMSC和EnMS

7、C生物學特性高度相似；
　　3.UCMSC、FMMSC和EnMSC均分泌抗纖維化相關(guān)蛋白；
　　4.FMMSC和EnMSC在抗纖維化作用中，HGF、IL-10和IFN-γ發(fā)揮的比重可能要多于bFGF、Adrenomedullin和lefty，其可能主要通過HGF、IL-10和IFN-γ參與的通路來發(fā)揮抗纖維化作用。
　　5.對于缺失EnMSC的患者，F(xiàn)MMSC可實現(xiàn)MSC的自體移植。在自體移植方面，UCMSC和FMMS