簡(jiǎn)介：一、病毒感染的傳播方式和途徑（一）水平傳播病毒在人群不同個(gè)體間的傳播動(dòng)物到動(dòng)物再到人P77，表56感染途徑（二）垂直傳播從親代到子代，主要通過(guò)胎盤(pán)或產(chǎn)道其它哺乳、接觸、生殖細(xì)胞先天性感染宮內(nèi)感染、生殖細(xì)胞基因遺傳,（三）病毒在體內(nèi)的播散,1局部感染或表面感染2全身播散直接播散接觸或分泌液感染附近細(xì)胞經(jīng)血流播散；經(jīng)神經(jīng)系統(tǒng)播散,皰疹病毒,二、病毒感染的類(lèi)型根據(jù)癥狀隱性感染（病毒攜帶者）顯性感染根據(jù)起病緩急、病毒滯留持續(xù)時(shí)間等急性感染持續(xù)性感染（慢性感染、潛伏性感染、慢發(fā)病毒感染）,（一）隱性感染和顯性感染1隱性病毒感染病毒攜帶者重要傳染源2顯性病毒感染（二）急性病毒感染病原消滅型感染,（三）持續(xù)性病毒感染持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)數(shù)月、數(shù)年、數(shù)十年癥狀有或無(wú)重要類(lèi)型、重要傳染源機(jī)制機(jī)體免疫力、病毒抗原性、免疫逃避、基因整合,慢性感染乙肝潛伏性感染皰疹病毒慢發(fā)病毒感染朊粒人克雅病庫(kù)魯病HIV亞急性硬化性全腦炎（SSPE）,四病毒與腫瘤,三、病毒的致病機(jī)制（一）病毒對(duì)宿主細(xì)胞的作用病毒對(duì)宿主細(xì)胞的直接致病作用1溶細(xì)胞型感染殺細(xì)胞效應(yīng)致細(xì)胞病變作用（CPE）無(wú)包膜、脊灰、腺病毒、急性感染原因阻斷核酸、蛋白質(zhì)合成，新陳代謝紊亂，溶酶體酶、免疫損傷。,,病毒的致細(xì)胞病變作用CPE,正常細(xì)胞,病變細(xì)胞,2穩(wěn)定狀態(tài)感染（穩(wěn)定性感染）細(xì)胞暫不溶解死亡,有胞膜、出芽方式釋放的病毒如麻疹病毒診斷依據(jù)（1）細(xì)胞融合胞膜改變，出現(xiàn)多核巨細(xì)胞（2）細(xì)胞表面出現(xiàn)新抗原血凝素3包涵體形成胞內(nèi)/核內(nèi)嗜酸/嗜堿內(nèi)基小體診斷依據(jù)2/3都可破壞細(xì)胞的結(jié)構(gòu)與代謝，也可引起細(xì)胞死亡,狂犬病毒包涵體（NEGRIBODY）,,4細(xì)胞凋亡（CELLAPOPTOSIS）細(xì)胞自殺性死亡（核濃縮、DNA降解細(xì)胞死亡基因被激活由病毒或其編碼的蛋白誘導(dǎo),,5病毒基因組的整合病毒核酸整合到宿主染色體DNA全基因組整合逆轉(zhuǎn)錄病毒失常式整合（部分基因）DNA病毒作用宿主細(xì)胞基因組損傷（基因失活或激活）整合基因編碼有特殊作用的蛋白（如SV40的T蛋白）,6細(xì)胞的增殖與轉(zhuǎn)化病毒感染細(xì)胞后，促細(xì)胞增殖并使細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化，失去接觸性抑制。細(xì)胞轉(zhuǎn)化。病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞生長(zhǎng)力旺盛、易于連續(xù)傳代，多數(shù)細(xì)胞染色體整合有病毒DNA，具有致癌潛能。HSV、CMV、EBV、HPV、腺病毒,二病毒感染的免疫病理?yè)p傷1抗體介導(dǎo)的免疫病理作用II型超敏反應(yīng)、III型超敏反應(yīng)2細(xì)胞介導(dǎo)的免疫病理作用3自身免疫病理作用病毒抗原存留、自身抗原暴露或釋放（三）免疫系統(tǒng)抑制1免疫抑制2侵入或殺傷免疫細(xì)胞（四）病毒的免疫逃逸P82表57,第六章第二節(jié)抗病毒免疫一、非特異性免疫（固有免疫）干擾素和NK，天然免疫，早期抗病毒作用（一）干擾素（IFN）1定義由病毒或干擾素誘生劑，誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生的一類(lèi)分泌性糖蛋白，具有抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)活性。誘生劑病毒、內(nèi)毒素、人工合成雙鏈RNA細(xì)胞作用,,2分類(lèi)根據(jù)抗原性分類(lèi)Α干擾素白細(xì)胞產(chǎn)生Β干擾素成纖維細(xì)胞產(chǎn)生Γ干擾素T細(xì)胞產(chǎn)生ΑΒ干擾素以抗病毒作用為主,I型Γ干擾素以調(diào)節(jié)免疫功能為主，II型幾乎所有有核細(xì)胞表面均有I型干擾素受體，作用范圍廣,,3抗病毒作用機(jī)制通過(guò)抗病毒蛋白干擾素與臨近細(xì)胞表面干擾素受體結(jié)合2’5A’合成酶細(xì)胞合成抗病毒蛋白磷酸二脂酶蛋白激酶PKR降解MRNA,抑制多肽鏈延伸,抑制轉(zhuǎn)譯阻斷病毒蛋白合成,,,,,中斷受染細(xì)胞的感染，限制病毒擴(kuò)散,4抗病毒作用特點(diǎn)（1）間接性干擾素刺激感染細(xì)胞與鄰近細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒蛋白，中斷受染細(xì)胞的感染，限制病毒擴(kuò)散。（2）相對(duì)的種屬特異性和細(xì)胞選擇性在同種細(xì)胞中活性高（3）廣譜性廣泛的抗病毒特性，但敏感度有異抗病毒蛋白對(duì)病毒無(wú)特異性（4）抗病毒蛋白有抑制作用，無(wú)殺滅作用。,,（二）NK細(xì)胞殺傷病毒感染的靶細(xì)胞作用無(wú)特異性,不受MHC限制,不依賴(lài)抗體,,二、特異性免疫（適應(yīng)性免疫）（一）體液免疫IGG、SIGA、IGM1作用于細(xì)胞外游離病毒中和抗體消除感染如血凝抑制抗體2作用于病毒感染細(xì)胞補(bǔ)體和抗體的調(diào)理作用ADCC殺傷作用,,（二）細(xì)胞免疫CTL直接殺傷靶細(xì)胞活化T細(xì)胞分泌Γ干擾素、TNF病毒感染靶細(xì)胞（內(nèi)源性抗原）AGMHCICD8T細(xì)胞（TC細(xì)胞）感染細(xì)胞被巨噬細(xì)胞吞噬（外源性抗原）AGMHCIICD4T細(xì)胞輔助AB產(chǎn)生產(chǎn)生細(xì)胞因子,,,

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簡(jiǎn)介：我的學(xué)思?xì)v程從病毒學(xué)家到大學(xué)校長(zhǎng)賴(lài)明詔成功大學(xué)校長(zhǎng)NOV62008成功大學(xué)成立於1931於臺(tái)南工學(xué)院，理學(xué)院，文學(xué)院，電機(jī)資訊，規(guī)則設(shè)計(jì)，管理學(xué)院，醫(yī)學(xué)院，社會(huì)科學(xué)，生物科技學(xué)院學(xué)生20538名10462名大學(xué)生，6948名碩士，3128名博士教授1789名職員3673名1520名於大學(xué)部，2153名於附設(shè)醫(yī)院我的研究生涯大學(xué)時(shí)代臺(tái)大醫(yī)學(xué)院醫(yī)科研究生時(shí)代加大柏克萊大學(xué)教授時(shí)代南加大冠狀病毒肝炎病毒回國(guó)2003後中央研究院成功大學(xué)病毒形狀病毒形狀（二）廿面體的基本構(gòu)造製造病毒模型的方法病毒的基因人類(lèi)細(xì)胞有3萬(wàn)個(gè)基因細(xì)菌有5千個(gè)基因病毒有10100個(gè)基因所以病毒要在細(xì)胞內(nèi)才能繁殖我的研究生涯大學(xué)時(shí)代臺(tái)大醫(yī)學(xué)院醫(yī)科研究生時(shí)代加大柏克萊大學(xué)教授時(shí)代南加大冠狀病毒肝炎病毒回國(guó)2003後中央研究院成功大學(xué)CONAVIRUS（冠狀病毒MULTIPLESCLEROSIS多發(fā)性神經(jīng)硬化COMMONCOLDS傷風(fēng)感冒SARS臺(tái)灣SARS可能病例統(tǒng)計(jì)表果子貍廣東市場(chǎng)帶有類(lèi)似SARS的病毒市場(chǎng)野生動(dòng)物商人多有SARS的抗體果子貍是直接的媒介嗎SARS病毒從何而來(lái)PALMCIVETCAT果子貍THEIGINOFSARSSARS抗體的發(fā)生率野生動(dòng)物商人40屠夫20蔬菜商5一般人0蝙蝠B(yǎng)AT可能是SARS病毒的病灶廣東蝙蝠半數(shù)有蝙蝠冠狀病毒蝙蝠病毒類(lèi)似SARS病毒，但果子貍病毒和SARS病毒的血緣較近結(jié)論蝙蝠病毒果子貍病毒SARS病毒病毒的來(lái)源多是來(lái)自動(dòng)物愛(ài)滋病毒非洲的猴子西尼羅病毒鳥(niǎo)→蚊子→人依波拉病毒蝙蝠→人泥巴病毒蝙蝠→豬→人SARS蝙蝠→果子貍→人流行性感冒家禽、豬、馬→人SARS病毒還會(huì)再回來(lái)嗎有可能因?yàn)樵谝巴怛鸹蚱渌麆?dòng)物還帶有類(lèi)SARS病毒但不太可能引起大流行因?yàn)榉拦?fàn)隔離措施做的很好肝炎病毒A型急性肝炎B型慢行肝炎肝硬化、肝癌C型慢性肝炎肝硬化、肝癌D型慢性肝炎E型急性肝炎廿年新興及再發(fā)傳染病疫情區(qū)COURTESYOFDRANTHONYFAUCINIAIDSARSAVIANFLUHIVMARBURGMEASLES我的研究生涯大學(xué)時(shí)代臺(tái)大醫(yī)學(xué)院醫(yī)科研究生時(shí)代加大柏克萊大學(xué)教授時(shí)代南加大冠狀病毒肝炎病毒回國(guó)2003後中央研究院成功大學(xué)新的醫(yī)療潮流基因醫(yī)學(xué)的進(jìn)步個(gè)人化醫(yī)學(xué)PERSONALIZEDPREDICTIVE慢性病的增加長(zhǎng)期照顧新陳代謝病LIFESTYLEDISEASES糖尿病、高血壓、肥胖老年化少子化老人癡呆醫(yī)療及診斷器材的進(jìn)步AGTCACCAGTTGTTATCTTGAAAGCCTCAGGAACTTCAGACGCAATTCATCCTGGCTACCCAGTGGGTCCAGAAAGGACCCAAGTGCACAAAGGGGCCGGCATCGGCCAATCCTAGGGTGGGGAAAAGTTAGGTATCCATGCCCCTGTGCCCACTTCTTCCAGGCACAGCCCTTGGTTCTTGCTCTAGCTCCCCTAAAGACACAGAAAATATTTAGAAGTTCACTTAACAAAAATATTACAGCTGGAAAGGACCTCAGAGATAACAATGGTAGTCCATCCACTTCATTTTATAGATGAGGAAAGTGAGGCCCAAACAAGTAAAGGAGCCGACTGAAGCGCCCGTGGTGAATTAATGGCACAGTCGGAACTAGAGCCCAGGCCTCTCTCCTCTCTAAAGTCTAAAACATTCTTGGATTTCAGTTTCCTCTTCTGTAAAACGGGGTGAAAATTAGCCTCTCAGGACAGTGGTGAGGAGCAAATGAGATAATGAATGTAAAAGAAATTACTATATTAGCAACAGAAATCAGAGCGGAGCGAGATGGTGTAGAGGAATCTAAGGGGTGTCCGGAGACATGTGTTCCAGTCATGTCATCTCTGTGAACCTCAGTCTCCTCATCTGCAAATGCAGGACCTGGCCCGGCTGACCGCCGAGACCCTTCCAGCTCTGCCGACCCAGGCCCTGAGGCCCTTCCCGGAGGGCCGGACCCTGAGGGAAAAAAACGAAGGAGCCCGTGGGGACCCTCGAGTTACCGTCCTGCAGCAGCGCAGTCTTCTGGGCTGTCCGCAGACTCTCCAACCAGCCCGTCACCGCCATCTTTCCCCTGCTAAGCAGCACGCCCAGCCGCTGCCATGGCAACCGTTCCAGAGGGTCACTTCCGGCTGACTCGGAAGCTATTCTGGCCATTTGCCCTCCTTCCCCCCTTCGTCCGCTCTCATTGGCTCTGCTGGTAAGTGGTCTATTCCTGCCCACCCCCGGGTGACTAGCTTGGCCAGTAGTCGACCCCACCCGGGGACCGACTCTGGGGGTTGGAGAGACTCTTGGGGCCGGGGTCGGGCACTCCAGCTTTCTTCTAGCCCCGAGCTGGGATTCCCTGGCCTGCGCCAGCTGCGTACACGGCGAGTACACCGCACCTGCCCGGGACTTCACCCGCAGCTGCGAGACTCCTCCATTCCCGGAGGGCTCCCCACACCTGCTGCGGCCGTGCCCCATCTCCCCGCAGCTGCGGCGCTGAGCACCCCCATGTCGAGAGGCTGAGACCAGGACAGGTGCAGGGCGTTCCCACTCACCCCCGAAAGTCCTCCTCCTTCCTCTGCGAGTCTGTGTTGGAGGTAGAGAAATAGTATGTGGGGTTTATGTGCAGGTCCTCCCCAGGCTCCGCTCCATCCCCTAAAGCTCCATTTCCTAGCCCAGCATCCCATTTGGTAAAGCCCTTCGAAGTGGGCCGCAGCAGGGCTGTGCTGAATCTTTAGCGCAACCCCTCTGAGGAATGGTGTCGTTTCCTACTCCTCAAAAGTACCCCCGATGGCACCAGCCTTCCCCTCATTTCCCGTAATACTCCAACTTCGAAAGGCTGGGGAGTGTGAAGCTAGGCTAAACCACTGAAGTTTAACCGGGTTTGAAGAGACCCCCTCCCCCGACCCGCTTCCCCAAACTGGGCTGCTACCCCCAAAGCCTGGTCAGGAAAGACCCTACCTCCATAGGCAAAGGGGTTGGAGGGCCTCAATTCTGGATTTCCACGTGCAGCAGCCCTGACCAACGCTCCAATAGGCCGGGATCCAGCCATACTTCAATGGATCCCAGGGGTATCTTGAAGGCATTTCCCAAGCGGCAGAAAATTCATGCTGATGCATCATCAAAAGTACTTGCAAAGATTCCTAGGAGGGAAGAG追求未知的領(lǐng)域BASICRESEARCH上游的研究腦神經(jīng)科學(xué)意識(shí)，智慧，感情，行為，認(rèn)知資訊能源地球宇宙氣候人口問(wèn)題“世界又熱又平又?jǐn)D”THOMASFRIEDMAN學(xué)以致用APPLIEDSCIENCETRANSLATIONALRESEARCHCOMPUTATIONALENGINEERINGELECTRONICENGINEERINGBIOTECHNOLOGYNANOTECHNOLOGYGENOMICSCIENCESTEMCELL臺(tái)灣高科技的未來(lái)1兩兆半導(dǎo)體IC與影像顯示2雙網(wǎng)通訊手機(jī)與無(wú)線網(wǎng)路3雙星數(shù)位與生技產(chǎn)業(yè)4奈米我的研究生涯大學(xué)時(shí)代臺(tái)大醫(yī)學(xué)院醫(yī)科研究生時(shí)代加大柏克萊大學(xué)教授時(shí)代南加大冠狀病毒肝炎病毒回國(guó)2003後中央研究院成功大學(xué)大學(xué)教育的目標(biāo)17世紀(jì)「文藝復(fù)興」RENAISSANCEMAN有價(jià)值的社會(huì)公民19世紀(jì)促進(jìn)新知，研究發(fā)展「研究型大學(xué)」專(zhuān)精分科系「象牙塔」20世紀(jì)後期通識(shí)教育大學(xué)教育主要為未來(lái)生涯的基礎(chǔ)準(zhǔn)備通識(shí)、自學(xué)的技巧專(zhuān)業(yè)訓(xùn)練集中在POSTGRADUATEPROFESSIONALSCHOOLS二十一世紀(jì)的人才條件SKILLSKNOWLEDGE技術(shù)與智慧IQINTELLIGENCEQUOTIENT智商EQEMOTIONQUOTIENT情緒MQMALQUOTIENT倫理AQATTITUDEQUOTIENTADVERSITYQUOTIENT態(tài)度逆境二十一世紀(jì)的人才李開(kāi)復(fù)20世紀(jì)21世紀(jì)勤奮好學(xué)融會(huì)貫通創(chuàng)新創(chuàng)新與實(shí)踐專(zhuān)精跨領(lǐng)域IQIQEQMQAQ個(gè)人能力溝通與合作能力選擇熱門(mén)的工作選擇熱愛(ài)的工作紀(jì)律、謹(jǐn)慎積極、樂(lè)觀成功大學(xué)的教育目標(biāo)人文與專(zhuān)業(yè)訓(xùn)練並重跨領(lǐng)域教育創(chuàng)意訓(xùn)練國(guó)際觀企業(yè)家精神及領(lǐng)導(dǎo)能力語(yǔ)言文字溝通能力社會(huì)關(guān)懷人文訓(xùn)練開(kāi)拓視野培養(yǎng)人格人際關(guān)係職位升遷企業(yè)成敗生涯的遠(yuǎn)景跨領(lǐng)域的訓(xùn)練每一社會(huì)需要跨領(lǐng)域的知識(shí)，例如老年化地球暖化擴(kuò)充視野及經(jīng)驗(yàn)新的想法創(chuàng)意定義（賴(lài)聲川）「創(chuàng)意是發(fā)掘問(wèn)題以及解決問(wèn)題」人腦是一部電腦COMPUTER，創(chuàng)意是建造電腦的操作系統(tǒng)創(chuàng)意是可訓(xùn)練的培養(yǎng)創(chuàng)意應(yīng)避免舊習(xí)、過(guò)去的經(jīng)驗(yàn)及做事的動(dòng)機(jī)從資訊INFMATION時(shí)代到知識(shí)KNOWLEDGE時(shí)代到觀念I(lǐng)DEAS時(shí)代創(chuàng)意是未來(lái)競(jìng)爭(zhēng)力的基本元素勞工密集的衰退，使創(chuàng)意的需求更高（韓國(guó)的電影文化、泰國(guó)的設(shè)計(jì)）資訊爆炸、新領(lǐng)域不斷出現(xiàn)臺(tái)灣的教育特質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)教科書(shū)及課程反射性的學(xué)習(xí)及考試方式（選擇性問(wèn)題）重複性的背誦及反芻補(bǔ)習(xí)班式教學(xué)適合打好基礎(chǔ)學(xué)術(shù)工具，但缺創(chuàng)意中小學(xué)辛苦，大學(xué)輕鬆美國(guó)的教育特質(zhì)鼓勵(lì)創(chuàng)意（思考能力）強(qiáng)調(diào)整合能力SYNTHETICABILITY（寫(xiě)作論文）鼓勵(lì)發(fā)表自己的意見(jiàn)中小學(xué)輕鬆、大學(xué)忙碌國(guó)際化（全球化）世界是平的（T佛里曼）國(guó)際化是雙向的出國(guó)及接受?chē)?guó)際學(xué)生BRAINDRAIN（腦力流失）BRAINCIRCULATION（腦力回流）BRAINSTAGNATION腦力呆滯國(guó)際化的目的吸取新的及高深的知識(shí)及技術(shù)擴(kuò)充國(guó)際視野及瞭解外國(guó)文化企業(yè)家精神及領(lǐng)袖人才有領(lǐng)導(dǎo)的意願(yuàn)不同的時(shí)空需要不同的領(lǐng)袖人才大學(xué)校長(zhǎng)為藝人ENTERTAINER、理想家VISIONARY、傳道PREACHER、心理師PSYCHOLOGIST及多方面企業(yè)經(jīng)理CEO領(lǐng)導(dǎo)能力是一種藝術(shù)，但可訓(xùn)練有創(chuàng)意新鮮的想法能聽(tīng)別人溝通能力有能力以口頭或文字表達(dá)（用中文或外文）讓別人知道你自己及你的工作交換而取得新的概念領(lǐng)導(dǎo)別人社會(huì)關(guān)懷及責(zé)任參與社區(qū)服務(wù)工作瞭解社會(huì)問(wèn)題大學(xué)不是只玩的時(shí)候而是成長(zhǎng)的時(shí)期大學(xué)生要學(xué)什麼追求自己的興趣，不管「熱」或「冷」門(mén)不怕選「錯(cuò)」門(mén)多嘗試新的領(lǐng)域重視通識(shí)教育，培養(yǎng)人文藝術(shù)素養(yǎng)養(yǎng)成表達(dá)的能力

簡(jiǎn)介：第32章蟲(chóng)媒病毒（ARBOVIRUS）黃病毒科（FLAVIVIRUS）、披膜病毒科、布尼亞病毒科小球狀，20面體，有包膜、刺突為RNA病毒節(jié)肢動(dòng)物是傳播媒介，儲(chǔ)存宿主自然疫源性疾病、人畜共患病地方性、季節(jié)性所致疾病腦炎或腦脊髓炎全身性感染肝炎出血熱關(guān)節(jié)炎第一節(jié)流行性乙型腦炎病毒一、生物學(xué)性狀黃病毒科，單正鏈RNA有包膜，二十面立體對(duì)稱(chēng)三種結(jié)構(gòu)蛋白E鑲嵌在包膜上的糖蛋白M位于包膜內(nèi)層的膜蛋白C為衣殼蛋白抗原性穩(wěn)定，較少變異乙腦病毒的電鏡照片二、流行病學(xué)傳染源家畜、家禽、野生禽鳥(niǎo)儲(chǔ)存宿主豬病毒在蚊內(nèi)增殖，越冬或經(jīng)卵傳代傳播媒介三帶喙庫(kù)蚊、伊蚊、按蚊豬→蚊→豬的傳播環(huán)節(jié)華南地區(qū)67月，華北地區(qū)78月，東北地區(qū)8～9月，與蚊蟲(chóng)密度曲線一致三、致病性與免疫性帶毒蚊蟲(chóng)叮咬毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及淋巴節(jié)內(nèi)增殖少量入血肝、脾單核巨噬細(xì)胞內(nèi)增殖二次病毒血癥突破血腦屏障中樞神經(jīng)系統(tǒng)廣泛病變頓挫感染1機(jī)制隱形感染2臨床特點(diǎn)隱性感染或輕型感染腦炎3免疫性血凝抑制抗體中和抗體補(bǔ)體結(jié)合抗體（無(wú)保護(hù)作用）細(xì)胞免疫、血腦屏障免疫力穩(wěn)定持久隱性感染也可獲免疫力四、實(shí)驗(yàn)室檢查1病毒分離難2病毒抗原檢測(cè)免疫熒光或ELISA，早3血清學(xué)檢查特異性IGM抗體，早期診斷血凝抑制試驗(yàn)中和試驗(yàn)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)五、乙腦的預(yù)防滅蚊防蚊人群免疫減毒活疫苗幼豬免疫第二節(jié)登革病毒（DENGUEVIRUS）傳染源患者和隱性感染者，猴子、某些家畜傳播媒介白紋伊蚊、埃及伊蚊，病毒在唾液腺細(xì)胞增殖，經(jīng)卵傳代，終身帶毒。儲(chǔ)存宿主人和靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物、蚊子人人傳播，家庭、社區(qū)感染，聚集性帶毒蚊蟲(chóng)叮咬網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)增殖第一次病毒血癥單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)第二次病毒血癥感染細(xì)胞釋放激酶等大量免疫復(fù)合物的形成病理變化致病機(jī)制（了解）靶細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞病毒株的毒力不同Ⅱ型引起登革出血熱，其他型引起登革熱病毒變異病毒基因變異后導(dǎo)致毒力增強(qiáng)二次感染學(xué)說(shuō)抗體依賴(lài)促病毒感染作用（ADE）細(xì)胞免疫病理發(fā)病原理的三種假說(shuō)登革熱（自限性疾?。┌l(fā)熱骨、關(guān)節(jié)疼痛皮疹出血登革出血熱開(kāi)始表現(xiàn)為典型登革熱，出血傾向嚴(yán)重常有兩個(gè)以上器官大量出血，出血量大于100ML登革休克綜合征在病程中或退熱后，病情突然加重有明顯出血傾向伴周?chē)h(huán)衰竭臨床表現(xiàn)登革出血熱（DENGUEHEMRHAGICFEVER）黑斑蚊皮下出血胰腺組織切片預(yù)防預(yù)防措施的重點(diǎn)在于防蚊和滅蚊第三節(jié)森林腦炎病毒生物學(xué)性狀與乙腦病毒相似蜱是傳播媒介也是儲(chǔ)存宿主在我國(guó)東北和西北林區(qū)曾有流行林區(qū)工作者應(yīng)接種疫苗病后免疫力持久第33章出血熱病毒出血熱（HEMRHAGICFEVERS）黃病毒科登革病毒、黃熱病病毒布尼亞病毒科漢坦病毒、新疆出血熱病毒非洲出血熱埃博拉病毒或馬堡病毒第一節(jié)漢坦病毒（HANTAVIRUS）30多個(gè)型別、其中20以上引起人類(lèi)疾病腎綜合征出血熱（HFRS舊漢灘病毒株HTNV漢坦病毒肺綜合征（HPS）新新諾柏病毒株SNV成人呼吸窘迫綜合征由鼠類(lèi)等傳播的自然疫源性急性傳染病漢坦病毒屬漢灘病毒型一、生物學(xué)性狀（一）形態(tài)與結(jié)構(gòu)1圓形、橢圓型或多形態(tài)2有包膜，刺突，可凝集鵝紅細(xì)胞3單負(fù)鏈RNA，分為L(zhǎng)、M、S三節(jié)段RNA多聚酶糖蛋白G1、G2核衣殼蛋白（N）（二）培養(yǎng)特性可在人肺傳代細(xì)胞（A549）等中增殖不引起明顯的細(xì)胞病變?cè)诟腥炯?xì)胞細(xì)胞質(zhì)內(nèi)形成包涵體（三）病毒型別據(jù)基因序列和抗原性至少分為6個(gè)型別我國(guó)流行漢灘病毒（姬鼠）和漢城病毒（褐家鼠）（四）抵抗力二、流行環(huán)節(jié)傳染源黑線姬鼠和褐家鼠傳播途徑呼吸道、消化道、皮膚傷口蟲(chóng)媒傳播（厲螨）垂直傳播地區(qū)性和季節(jié)性秋冬（黑線姬鼠）、春夏（褐家鼠）三、臨床表現(xiàn)腎綜合征出血熱（HFRS）隱性感染低三大主癥，即發(fā)熱、出血和腎臟損害漢坦病毒肺綜合征（HPS）病原為漢坦病毒屬的辛諾柏病毒雙側(cè)肺彌散性浸潤(rùn)、間質(zhì)水腫嚴(yán)重時(shí)呼吸衰竭四、免疫性感染后抗體出現(xiàn)早細(xì)胞免疫也有重要作用免疫力牢固五、微生物學(xué)檢查病毒分離與抗原檢測(cè)P3實(shí)驗(yàn)室VEROE6細(xì)胞分離培養(yǎng)，免疫熒光染色血清學(xué)檢查1檢測(cè)特異性LGM抗體2檢測(cè)特異性LGG抗體六、預(yù)防與治療滅鼠、防鼠注意個(gè)人防護(hù)三類(lèi)HFRS疫苗純化鼠腦滅活疫苗細(xì)胞培養(yǎng)滅活疫苗基因工程疫苗單克隆抗體第二節(jié)新疆出血熱病毒克里米亞剛果出血熱病毒屬布尼亞病毒科自然疫源疾病，有硬蜱活動(dòng)的荒漠和牧場(chǎng)季節(jié)性每年45月為流行高峰儲(chǔ)存宿主野生嚙齒動(dòng)物（牛、羊、馬、駱駝）傳播媒介硬蜱亞洲璃眼蜱臨床表現(xiàn)發(fā)熱、全身疼痛、出血及中毒癥狀病后免疫力牢固第三節(jié)非洲出血熱病毒埃博拉病毒、馬堡病毒，非洲地區(qū)引起人、靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物感染。絲狀病毒科，SSRNA病毒，出芽釋放，包膜病毒VERO細(xì)胞人胚肺成纖維細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞病變，嗜酸性包涵體直接接觸、醫(yī)院內(nèi)傳播靶細(xì)胞全身細(xì)胞、肝細(xì)胞細(xì)胞損傷、血小板功能異常、免疫抑制高熱；皮膚淤血、紫癜、鼻出血、消化道泌尿生殖道出血；血小板減少，休克P4實(shí)驗(yàn)室，抗原核酸檢測(cè)、抗體檢查對(duì)癥治療

簡(jiǎn)介：病毒學(xué)各論微生物及免疫學(xué)雙股DNA病毒單股DNA病毒具有反轉(zhuǎn)錄過(guò)程的病毒單負(fù)股病毒目分節(jié)段的負(fù)股RNA病毒套式病毒其他正股病毒朊病毒雙股RNA病毒病毒顆粒無(wú)囊膜，直徑27NM，20面體對(duì)稱(chēng)外表光滑呈球形，由60多個(gè)亞單位組成，每個(gè)亞單位含有4種衣殼蛋白?；蚪M為單分子線狀正股RNA。一、微RNA病毒科（PICNAVIRIDAE）口蹄疫是全球性最重要的動(dòng)物疫病，常在牛群、豬群大范圍流行。多種偶蹄動(dòng)物都易感。感染率很高，致死率較低。人類(lèi)偶能感染，表現(xiàn)發(fā)熱、食欲差及口、手、腳產(chǎn)生水泡?？谔阋卟《綟MDV診斷申報(bào)被列為必須申報(bào)的疾病，診斷只能在指定的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。檢測(cè)方法OIE推薦使用商品化及標(biāo)準(zhǔn)化的ELISA試劑盒用于診斷，數(shù)小時(shí)出結(jié)果。也用細(xì)胞培養(yǎng)分離病毒，分離的病毒通過(guò)ELISA或者中和試驗(yàn)加以鑒定。疫苗弱毒疫苗可能散毒，不安全。推薦使用濃縮的滅活疫苗。檢測(cè)豬血清中抗豬口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC的抗體腸道病毒EV71手足口病HFMD是由腸道病毒引起的傳染病，多發(fā)生于5歲以下的嬰幼兒，可引起發(fā)熱和手、足、口腔等部位的皮疹、潰瘍，個(gè)別患者可引起心肌炎、肺水腫、無(wú)菌性腦膜腦炎等并發(fā)癥。引發(fā)手足口病的腸道病毒有20多種，其中柯薩奇病毒A16型COXA16和腸道病毒71型（EV71）最常見(jiàn)。二分節(jié)段的負(fù)股RNA病毒分節(jié)段的RNA病毒有3個(gè)科即正粘病毒科、布尼病毒科和砂粒病毒科。正粘病毒科中禽流感病毒在動(dòng)物病毒中較為重要，核酸分8個(gè)節(jié)段，基因易發(fā)生基因重配，使病毒變異率較高，給預(yù)防帶來(lái)困難。流行的禽流感病毒毒株差異很大。布尼病毒中裂谷熱病毒是其中較為重要的病毒。第一節(jié)正黏病毒科（THOMYXOVIRIDAE）病毒顆粒多形性，多球形；有囊膜及纖突，甲、乙型病毒纖突上有兩種糖蛋白（棒狀的凝血素蛋白H、蘑菇狀的神經(jīng)氨酸酶蛋白N）；基因組為8節(jié)段線狀負(fù)股單股RNA；細(xì)胞核內(nèi)復(fù)制，胞漿膜出芽成熟釋放；對(duì)脂溶劑敏感，在外環(huán)境中極不穩(wěn)定。禽流感病毒AIV1與人及哺乳動(dòng)物流感有關(guān)雖然早在1901年即分離禽流感病毒，但直到1955年才明確它與人及哺乳動(dòng)物流感的關(guān)系。禽流感病毒某些毒株，可不經(jīng)過(guò)豬體混合重配而直接感染人。2基因庫(kù)水禽是流感病毒的“基因庫(kù)”，并對(duì)養(yǎng)禽業(yè)構(gòu)成潛在威脅。禽流感電鏡照片3病毒毒力禽流感的高致病力毒株HPALV對(duì)雞有較強(qiáng)致病性，舊稱(chēng)真性雞瘟。高致病性禽流感HPAL是OIE規(guī)定的A類(lèi)疫病。病毒毒力有很大差異。高致病力毒株主要有H7N7、H5N2、H5N1亞型的某些毒株。診斷分離病毒非常必要，對(duì)鑒定病原及其毒力均不可少。病料一般從泄殖腔內(nèi)采樣，也可采肝、脾、血液、肺等。分離接種810日齡雞胚尿囊腔。鑒定取尿囊液用雞紅細(xì)胞作HAHI或ELISA等。進(jìn)一步鑒定亞型需送國(guó)家級(jí)指定實(shí)驗(yàn)室完成。毒力分析可將分離株接種雞，或用分離毒作空斑試驗(yàn)，檢測(cè)其毒力，有毒株能產(chǎn)生空斑，無(wú)毒株則否。高致病OIE規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)為將含病毒的雞胚尿囊液原液用滅菌生理鹽水作110稀釋靜脈內(nèi)接種48周齡SPF雞8只，每只02ML，隔離飼養(yǎng)觀察10D，死亡≥6只者，判為高致病性禽流感病毒。預(yù)防與控制預(yù)防措施應(yīng)包括在國(guó)際、國(guó)內(nèi)及局部養(yǎng)禽場(chǎng)3個(gè)不同水平。高致病力禽流感被OIE列為A類(lèi)疫病，一旦發(fā)生應(yīng)立即通報(bào)。國(guó)內(nèi)措施主要為防止病毒傳人及蔓延。養(yǎng)禽場(chǎng)還應(yīng)側(cè)重防止由野禽傳給家禽，要有隔離設(shè)施阻擋野禽。一旦發(fā)生高致病力禽流感，應(yīng)采取斷然措施防止擴(kuò)散。滅活疫苗可作預(yù)防用。三彈狀病毒科（RHABDOVIRIDAE）病毒顆粒子彈狀，直徑20NM長(zhǎng)170NM。圓柱形核衣殼螺旋形對(duì)稱(chēng)，有囊膜及膜粒?；蚪M為單分子負(fù)股單股RNA。彈狀病毒結(jié)構(gòu)模式圖彈狀病毒電鏡照片狂犬病毒1感染動(dòng)物病毒感染所有溫血?jiǎng)游?，引致人與動(dòng)物狂犬病，感染的動(dòng)物和人一旦發(fā)病，兒乎都難免死亡。2癥狀狂犬病表現(xiàn)神經(jīng)癥狀，有興奮型及麻痹型兩種。透射電鏡下的狂犬病毒3致病機(jī)理傳播主要傳播途徑為被帶毒動(dòng)物咬傷，病犬唾液具有高度傳染性。病毒復(fù)制病毒特異結(jié)合神經(jīng)肌肉結(jié)合處的乙酰膽堿受體及神經(jīng)節(jié)苷脂等受體。在傷口附近的肌細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，而后侵入外周神經(jīng)系統(tǒng)，沿神經(jīng)軸索上行至中樞神經(jīng)系統(tǒng)，在腦的邊緣系統(tǒng)大量復(fù)制，導(dǎo)致腦組織損傷，行為失控出現(xiàn)癥狀。病毒從腦沿傳出神經(jīng)擴(kuò)散至唾液腺等器官，在其內(nèi)復(fù)制，并以很高的滴度分泌到唾液中。4診斷具有確認(rèn)資格的人員才能作出狂犬病的實(shí)驗(yàn)室診斷。往往要確定咬人的動(dòng)物是否患狂犬病，需作腦組織切片，檢測(cè)包涵體。取其腦組織如小腦或海馬或唾液腺檢測(cè)，方法為熒光抗體染色。RTPCR技術(shù)檢測(cè)組織中的病毒RNA，敏感度高。5預(yù)防與控制應(yīng)及時(shí)撲滅狂犬病患畜。對(duì)家養(yǎng)犬、貓進(jìn)行弱毒疫苗免疫接種。（1）形狀20面體（2）核衣殼類(lèi)型20面體（3）抵抗力熱、光及脂溶劑敏感；耐干燥、不耐酸；（4）基因組線狀雙股DNA，125KB235KB。（5）有囊膜，糖蛋白纖突四皰疹病毒科HERPESRIVIDAE一、主要特征皰疹病毒構(gòu)造模擬圖細(xì)胞介導(dǎo)的單純皰疹病毒內(nèi)吞作用二、病毒的復(fù)制與感染1、偽狂犬病病毒豬為病毒原始宿主，成年豬多為隱性感染，懷孕母豬50％可發(fā)生流產(chǎn)、死胎或木乃伊胎?；蚬こ桃呙缬糜陬A(yù)防。三、主要的皰疹病毒2、馬立克病病毒MDV是雞的重要的傳染病病原，具有致腫瘤特性?？蔀樯窠?jīng)淋巴瘤病，出現(xiàn)麻痹等癥狀。疫苗預(yù)防。3、禽傳染性喉氣管炎病毒各年齡段雞均易感，以418周齡雞易感性高，表現(xiàn)為咳嗽、咳血。三、主要的皰疹病毒4、鴨瘟病毒鴨等多種水禽均易感，有弱毒疫苗。三、主要的皰疹病毒主要特征有囊膜，E2纖突重要，20面體對(duì)稱(chēng)，基因組線性單股正鏈RNA，黃病毒屬以VERO細(xì)胞培養(yǎng)。瘟病毒屬以原動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，多無(wú)CPE，抵抗力差。五黃病毒科重要的動(dòng)物病毒（1）日本乙型腦炎病毒人畜共患，多種動(dòng)物感染，使幼駒表現(xiàn)神經(jīng)癥狀，孕豬繁殖障礙，以三喙庫(kù)蚊傳播，弱毒和滅活苗預(yù)防（2）牛病毒性腹瀉病毒分CPE和非CPE兩型，可致?tīng)倥！⒀?、鹿腹瀉。豬也可感染，牛黏膜病，引起綿羊抑制，經(jīng)胎盤(pán)傳播。（3）豬瘟病毒主要特征感染豬有典型和非典型豬瘟，使孕豬繁殖障礙。預(yù)防控制Ⅰ垃圾飼料注意消毒Ⅱ撲殺有效，疫苗接種六痘病毒科（POXVIRIDAE）英國(guó)醫(yī)生JENNER1798開(kāi)創(chuàng)用牛痘病毒預(yù)防人天花，是病毒免疫的里程碑。目前痘苗病毒被作為基因工程疫苗載體廣泛應(yīng)用，雞痘、綿羊痘及羊口瘡為害較嚴(yán)重。一、主要特征（1）形狀磚狀（2）核衣殼類(lèi)型復(fù)合對(duì)稱(chēng)。（3）抵抗力熱差、冷強(qiáng)、耐干燥、不耐酸；（4）基因組線狀雙股DNA，130KB375KB（5）復(fù)制與釋放胞漿內(nèi)復(fù)制，胞吐釋放。二、傳播方式傳播途徑皮膚傷口感染、呼吸道、昆蟲(chóng)叮咬感染。痘病毒感染宿主譜較窄。三、培養(yǎng)特點(diǎn)痘病毒可在雞胚絨毛尿囊膜上生長(zhǎng)，多數(shù)可在膜上形成痘斑。痘斑的形態(tài)等因痘病毒的種類(lèi)而異。可根據(jù)痘斑特征，對(duì)病毒作出初步鑒定。四、主要的痘病毒1痘苗病毒痘苗病毒一直作為痘病毒的模型，同時(shí)廣泛用作疫苗預(yù)防天花。該病毒分布廣泛，而且宿主譜寬，在自然條件下能引致牛乳頭感染。2綿羊痘病毒只感染綿羊，可致全身性皰疹，傷口、呼吸道感染。疫苗預(yù)防。3雞痘病毒禽痘病毒屬的代表種為雞痘病毒。所有禽痘病毒均以吸血昆蟲(chóng)為機(jī)械傳播媒介有皮膚型及黏膜型兩種形式，黏膜型雞痘又稱(chēng)雞白喉，死亡率較高。七套式病毒目1冠狀病毒科病毒顆粒為球形，直徑80220NM，核衣殼螺旋對(duì)稱(chēng)有囊膜及長(zhǎng)達(dá)20NM的棒狀纖突?；蚪M為單分子線狀正股單股RNA。豬傳染性胃腸炎病毒TGEV已報(bào)道4種冠狀病毒能感染豬豬血凝性腦脊髓炎病毒豬流行性腹瀉病毒豬傳染性胃腸炎病毒豬呼吸道冠狀病毒PRCV。致病TGEV在世界各地均有發(fā)現(xiàn)，引致仔豬腹瀉，伴有嘔吐，3周齡以下的仔者有較高死亡率。但有時(shí)成年豬也有高死亡率，母豬表現(xiàn)為厭食、發(fā)熱、腹瀉及無(wú)乳等。防制仔豬可通過(guò)初乳及奶液獲得母源IGA抗體，產(chǎn)生被動(dòng)免疫。二、動(dòng)脈炎病毒科主要特征20面體對(duì)稱(chēng)，有囊膜，核酸為單股正鏈RNA復(fù)制和釋放方式與冠狀病毒相似。套式病毒目豬呼吸與繁殖綜合征病毒分為歐洲株和美洲株、我國(guó)美洲株。母豬感染流產(chǎn)，仔豬感染呼吸困難。病毒可能來(lái)源于小鼠乳酸脫氫酶病毒。病毒感染單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生免疫抑制。冬季流行。分離病毒可用肺巨噬細(xì)胞或MA104MAC145細(xì)胞?；蛉笔绾蜏缁蠲珙A(yù)防。（1）病毒無(wú)囊膜，球狀，直徑1722NM；（2）基因組為單分子單股DNA，環(huán)狀，在細(xì)胞核復(fù)制；（3）60℃30MIN，PH39。十圓環(huán)病毒科CIRCOVIRIDAE一、主要特征二、主要成員包括豬、禽及植物的圓環(huán)病毒，是目前已知最小的動(dòng)植物病毒雞貧血病毒CAV1979年在日本發(fā)現(xiàn)，曾稱(chēng)雞傳染性貧血因子CAA，現(xiàn)已是養(yǎng)禽業(yè)的世界性問(wèn)題。除雞以外不感染其他禽，只有一個(gè)血清型。雛雞表現(xiàn)為急性免疫抑制性疾病。由于紅細(xì)胞生成減少造成貧血，血液可成水樣，凝結(jié)緩慢。常發(fā)生繼發(fā)性細(xì)菌感染。本病毒通過(guò)直接接觸傳遞，亦可經(jīng)卵垂直傳遞。大多數(shù)雞群均攜帶本病毒。豬圓環(huán)病毒（PCV）能引起仔豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征（僵豬綜合征）。雙股RNA病毒呼腸孤病毒科和雙RNA病毒核酸類(lèi)型為雙股RNA，核酸是分節(jié)段的，常常具有較高的變異率。屬于該類(lèi)的動(dòng)物較為重要的病毒有藍(lán)舌病毒、輪狀病毒、傳染性囊病病毒。雞的傳染性法氏囊炎是臨床上常見(jiàn)多發(fā)病，對(duì)我國(guó)乃至世界養(yǎng)禽業(yè)危害極大。1、主要特征有囊膜，線性雙股RNA，分節(jié)段，三層衣殼，每層均為20面體對(duì)稱(chēng)。（1）藍(lán)舌病毒綿羊藍(lán)舌病，吸血昆蟲(chóng)傳播（2）輪狀病毒幼齡動(dòng)物易感發(fā)病，激發(fā)大腸桿菌病情加重一、呼腸孤病毒科1主要特征雙股RNA，無(wú)囊膜，20面體對(duì)稱(chēng)，基因組分2節(jié)段，對(duì)熱穩(wěn)定。雞傳染性法氏囊炎病毒（1）主要特征2個(gè)血清型，1型有致病性，2型無(wú)致病性，兩者抗原交叉性差，流行過(guò)程中毒力可變強(qiáng)，主要感染25－65日齡雞。（2）微生物學(xué)診斷①制備觸片②瓊擴(kuò)③雞胚接種④雞源細(xì)胞培養(yǎng)⑤ELISA（3）預(yù)防與控制疫苗的效果不盡如人意。雙股RNA病毒科主要特征無(wú)囊膜，20面體對(duì)稱(chēng)，32個(gè)杯狀殼粒，核酸單股正鏈RNA。兔出血熱病毒（兔瘟）家兔野兔出血性敗血癥，2月齡一下幼兔，急性或亞急性敗血癥，死亡率100％，病毒有血凝性，尚未分離到病毒，組織苗可用于預(yù)防。兔出血熱病毒嵌杯病毒科副粘病毒科（PARAMYXOVIRIDAE）病毒多形性，有時(shí)呈長(zhǎng)絲狀，有囊膜，表面有血凝性和或神經(jīng)氨酸酶纖突，使細(xì)胞融合，負(fù)股RNA。人副粘病毒電鏡照片人副粘病毒電鏡照片動(dòng)物的副粘病毒電鏡照片新城疫病毒NDV引致雞、火雞、鵝、鴿、鸚鵡等新城疫，已成為世界養(yǎng)禽業(yè)最重要的疾病之一。1病癥感染雞呼吸道、循環(huán)系統(tǒng)、胃腸道紊亂及神經(jīng)癥狀都很明顯，蛋雞可有突發(fā)，生產(chǎn)蛋下降、產(chǎn)薄殼蛋或雞蛋白蛋白減少?；痣u等與雞類(lèi)似，有呼吸道及神經(jīng)系統(tǒng)癥，最常見(jiàn)氣囊炎。鴨鵝多為隱性感染。人類(lèi)亦可感染。2致病機(jī)理感染病毒首先在呼吸道及腸道黏膜上皮復(fù)制，借助血流擴(kuò)散到脾及骨髓，產(chǎn)生二次病毒血癥，從而感染肺、腸及中樞神經(jīng)系統(tǒng)。血清型NDV只有一個(gè)血清型，但毒株毒力有較大差異?？煞殖?個(gè)類(lèi)型強(qiáng)毒型、中毒型和弱毒型。強(qiáng)毒型又名嗜內(nèi)臟型，致死率可達(dá)100％，引致廣泛的出血性損傷。天然弱毒株已作為疫苗使用。傳播病毒通過(guò)氣霧、污染的食物及飲水傳播。3診斷必須作病毒分離及血清學(xué)試驗(yàn)?？扇∑?、腦或肺勻漿，接種10日齡雞胚尿囊腔分離病毒。病毒能凝集雞、人及小鼠等紅細(xì)胞，再作HI試驗(yàn)鑒別。4預(yù)防與控制新城疫是OIE規(guī)定的A類(lèi)疫病，許多國(guó)家都有相應(yīng)的立法?？刂拼胧┌嗔己眯l(wèi)生及免疫。通常采用由天然弱毒活毒苗及強(qiáng)毒株的油乳劑滅活苗。朊病毒PRION是動(dòng)物與人傳染性海綿狀腦病TSE的病原，實(shí)質(zhì)上不是傳統(tǒng)意義上的病毒。它沒(méi)有核酸，只有傳染性的蛋白質(zhì)顆粒。早在15世紀(jì)發(fā)現(xiàn)的綿羊的癢病就是由朊病毒所致，1986年在英國(guó)發(fā)現(xiàn)的“瘋牛病”牛海綿狀腦病，嚴(yán)重打擊了養(yǎng)牛業(yè)，并危及人類(lèi)健康，震驚全世界，至今余波未平。朊病毒（PRION）“瘋牛病”牛海綿狀腦病病原也是朊病毒。美國(guó)科學(xué)家PRUSINER獲1997年諾貝爾醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)，就是為了表彰其在研究朊病毒的性質(zhì)及其所致的TSE的致病機(jī)理所取得的突破性進(jìn)展。朊病毒蛋白的一張快照表明該蛋白喜歡彼此配對(duì)存在性質(zhì)朊病毒是細(xì)胞正常蛋白經(jīng)變構(gòu)后而獲得致病性。這種正常的細(xì)胞蛋白名為PRPC。大多數(shù)哺乳動(dòng)物的基因組均編碼，并在許多組織尤其是神經(jīng)元及淋巴內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)。PRPC與PRPSCPRP是朊病毒蛋白PRIONPROTEIN的縮寫(xiě)。PRPC是正常細(xì)胞的一種糖蛋白，分子量2700030000，稱(chēng)為PRP2730。PRP2730是PRP3335蛋白酶K不完全消化的產(chǎn)物。朊病毒的特性具有反轉(zhuǎn)錄過(guò)程的病毒有反轉(zhuǎn)錄病毒科和嗜肝病毒科；嗜肝病毒科在動(dòng)物疾病方面重要性較差。反轉(zhuǎn)錄病毒科在動(dòng)物疾病方面的主要特點(diǎn)是多數(shù)病毒具有致腫瘤作用，潛伏期較長(zhǎng)。比較重要的動(dòng)物反轉(zhuǎn)錄病毒有牛白血病病毒、梅迪維斯納病毒和馬傳染性貧血病毒。反轉(zhuǎn)錄病毒科反轉(zhuǎn)錄病毒科（1）形狀球形，有囊膜；（2）衣殼對(duì)稱(chēng)性二十面體對(duì)稱(chēng)；（3）基因組為二倍體，由兩個(gè)線狀正股單鏈RNA組成；3’端聚A尾；多聚A5’端有帽子結(jié)構(gòu)；能編碼反轉(zhuǎn)錄酶基因；（4）具有三層結(jié)構(gòu)，最內(nèi)層為基因組核蛋白復(fù)合物，包含反轉(zhuǎn)錄酶，螺旋對(duì)稱(chēng)。一、主要特征1可引致腫瘤的病毒甲乙丙丁戊型反錄病毒屬如禽白血?。饬霾《?、貓白血病病毒、牛白血病病毒等。2可引起免疫缺陷的多種病毒二、主要成員慢病毒屬如人免疫缺陷病毒1型和2型、牛、猴、貓免疫缺陷病毒、馬傳染性貧血病毒等。腺病毒科ADENOVIRIDAE二、主要特征（1）形狀五鄰體（2）核衣殼類(lèi)型20面體對(duì)稱(chēng)，有纖絲，具血凝性；（3）抵抗力熱差、冷強(qiáng)、耐干燥、不耐酸；（4）基因組線狀雙股DNA，無(wú)囊膜；（5）核內(nèi)組裝，細(xì)胞崩解釋放。犬傳染性肝炎病毒、減蛋綜合征病毒等。一、成員腺病毒電鏡彩色照片腺病毒結(jié)構(gòu)模擬圖腺病毒標(biāo)本模擬圖1、犬傳染性肝炎病毒致犬傳染性肝炎，犬狐易感染；病毒經(jīng)鼻咽、口及黏膜途徑進(jìn)入體內(nèi)，最初感染扁桃體、產(chǎn)生病毒血癥，后感染實(shí)質(zhì)組織，導(dǎo)致出血及壞死，感染犬通過(guò)尿、糞及唾液排毒。三、重要的腺病毒2、減蛋綜合征病毒EDSV多發(fā)于產(chǎn)蛋高峰時(shí)的雞，除雞以外，鴨及鵝也發(fā)病。感染禽產(chǎn)蛋下降6080，產(chǎn)褪色蛋、軟殼蛋或無(wú)殼蛋。滅活疫苗效果好。EDSV病毒電鏡照片細(xì)小病毒科PARVOVIRIDAE（1）形狀球形（2）核衣殼類(lèi)型20面體對(duì)稱(chēng)（3）細(xì)胞核內(nèi)復(fù)制（4）基因組線狀單股DNA，無(wú)囊膜。一、主要特征1、豬細(xì)小病毒豬細(xì)小病毒病，病豬表現(xiàn)繁殖障礙、呼吸道癥狀，嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)。易感豬群發(fā)病率非常高。目前只發(fā)現(xiàn)一個(gè)血清型。病毒高度穩(wěn)定，在環(huán)境中能存活多月。用滅活苗或弱毒苗免疫預(yù)防。2、犬細(xì)小病毒所有犬科均易感，犬出血性腹瀉，有血凝性。3、鵝細(xì)小病毒又名小鵝瘟，高免血清與弱毒苗混合用。

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簡(jiǎn)介：目的近些年，我國(guó)人間狂犬病報(bào)告病例數(shù)呈遞增態(tài)勢(shì)，狂犬病已成為當(dāng)前重大的公共衛(wèi)生問(wèn)題。我國(guó)關(guān)于狂犬病流行病學(xué)、病原學(xué)的深入研究較少，整體資料不全，福建省這方面的研究更是薄弱，尚不清楚我省狂犬病毒主要宿主的病毒攜帶情況和免疫情況，不清楚居民對(duì)狂犬病的認(rèn)知程度及養(yǎng)犬情況等；國(guó)內(nèi)狂犬病毒街毒株的分離報(bào)道較少，尚未見(jiàn)在福建省境內(nèi)分離出狂犬病毒的報(bào)道，對(duì)福建省境內(nèi)狂犬病毒的流行毒株及其特征尚不清楚。因此，為了更好地預(yù)防和控制狂犬病，非常有必要開(kāi)展系統(tǒng)的狂犬病流行病學(xué)研究，獲得狂犬病流行現(xiàn)狀的基礎(chǔ)資料，了解影響狂犬病發(fā)病率的主要因素；也很有必要進(jìn)行狂犬病毒流行毒株的分離鑒定、病原生物學(xué)和遺傳學(xué)特征的研究。因養(yǎng)犬?dāng)?shù)的增加導(dǎo)致犬傷患者也不斷增加，推進(jìn)和提高犬傷患者免疫后血清抗體及犬唾液帶毒的檢測(cè)方法也迫在眉捷。方法1、針對(duì)狂犬病高發(fā)的實(shí)際情況，通過(guò)系統(tǒng)的流行病學(xué)調(diào)查研究，以獲得狂犬病流行現(xiàn)狀的基礎(chǔ)資料；從生態(tài)學(xué)角度收集影響狂犬病發(fā)病率有關(guān)因素的資料，通過(guò)負(fù)二項(xiàng)回歸模型篩查出影響狂犬病發(fā)病率的主要因素。2、運(yùn)用MIT和CIT法從疑似狂犬的腦組織中進(jìn)行狂犬病毒街毒株的分離與鑒定，采取分段RTPCR的方法，對(duì)所分離的街毒株進(jìn)行序列擴(kuò)增、克隆、測(cè)序，拼接獲得全基因組序列，并運(yùn)用生物學(xué)軟件對(duì)基因組結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析與比較；3、通過(guò)收集福建省不同時(shí)間、不同地區(qū)的犬腦組織，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)診斷，對(duì)陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行N基因全長(zhǎng)的擴(kuò)增、克隆和測(cè)序，結(jié)合疫情資料進(jìn)行狂犬病的分子流行病學(xué)研究。4、選取CTN株狂犬病毒糖蛋白富集表位基因片段進(jìn)行克隆、表達(dá)和純化，人工獲得狂犬病毒糖蛋白抗原，為探索犬傷患者免疫后血清抗體及犬唾液帶毒檢測(cè)方法的提高奠定基礎(chǔ)。結(jié)果1、從2000～2006年福建省每年均有人間狂犬病疫情發(fā)生，平均發(fā)病率為00710萬(wàn)。2002～2006年福建省人狂犬病報(bào)告病例，各地分布不一，夏秋季節(jié)發(fā)病相對(duì)較多，病例主要集中在30～60歲之間，男性多于女性，農(nóng)民發(fā)病人數(shù)最多。2、福建省3個(gè)調(diào)查地區(qū)的平均家庭養(yǎng)犬率約為4667％，人均養(yǎng)犬?dāng)?shù)約為013只，每家養(yǎng)犬?dāng)?shù)約為063只。家犬平均免疫率為554％。3、福建省普通群眾對(duì)狂犬病的認(rèn)知情況較差，狂犬病專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員，總體對(duì)狂犬病犬傷情況處理的知識(shí)水平較高。4、研究認(rèn)為狂犬病的發(fā)病率與犬的免疫率及普通群眾狂犬病知識(shí)認(rèn)知能力有關(guān)。犬免疫率每增加1％，5年累積發(fā)病率為原來(lái)的79％即下降了21％。普通群眾狂犬病知識(shí)認(rèn)知能力平均每增加01分，5年累積發(fā)病率為原來(lái)的80％即下降了20％。5、本研究通過(guò)RTNESTEDPCR法從表觀健康犬腦組織中檢測(cè)出狂犬病毒，并經(jīng)基因測(cè)序證實(shí)表觀健康犬?dāng)y帶狂犬病毒，為狂犬病的預(yù)防和控制提供了有力的實(shí)驗(yàn)證據(jù)。6、首次在福建省成功分離出狂犬病毒街毒株7株，并完成其中兩株FJ008、FJ009的生物學(xué)特性和全基因組序列測(cè)定。7、從福建省各地收集的犬腦組織標(biāo)本共89份，通過(guò)RTNESTEDPCR擴(kuò)增、純化、克隆，獲得19條包含N基因完整讀碼框的序列。根據(jù)核苷酸和推導(dǎo)的氨基酸的同源性高低，把19份含有RABVRNA的標(biāo)本分為三個(gè)群組，A群組包括FJ001、FJ002、FJ003、FJ012、FJ013、FJ014；B群組包括FJ008、FJ009、FJ010、FJ011、FJ015、FJ016、FJ017、FJ018、FJ019；C群組包括FJ004、FJ005、FJ005、FJ007。各群組內(nèi)部RABVN基因的核苷酸同源性在9970～100％之間，群組間RABVN基因的核苷酸同源性在8643～8928％，各群組內(nèi)部RABVN基因的氨基酸同源性在9886～100％之間，群組間RABVN基因的氨基酸同源性在9533～9844％。結(jié)合標(biāo)本來(lái)源地，證實(shí)福建省狂犬病具有顯著的地域分布特征。8、福建省狂犬病的流行毒株與目前常用的各種疫苗株N基因序列比對(duì)同源性在8647～9889％之間，均屬于基因Ⅰ型，提示目前使用的疫苗能較好地保護(hù)福建省RABV流行毒株的感染。9、完成了重組質(zhì)粒PHTB624的高效表達(dá)和純化，獲得一批高純度的狂犬病毒糖蛋白重組抗原，應(yīng)用于犬傷患者免疫后血清抗體的檢測(cè)，與市場(chǎng)上主流試劑盒檢測(cè)結(jié)果沒(méi)有明顯差異，提示該重組抗原具有較好的應(yīng)用價(jià)值。結(jié)論1、福建省近些年狂犬病高發(fā)，居民養(yǎng)犬眾多，犬免疫率低下，普通群眾狂犬病相關(guān)知識(shí)薄弱。犬免疫率低下及普通群眾狂犬病相關(guān)知識(shí)薄弱是福建省狂犬病高發(fā)的主要影響因素。2、首次在福建省成功分離出7株狂犬病毒街毒株，并完成其中兩株街毒株FJ008、FJ009的生物學(xué)特性和全基因組序列測(cè)定。3、完成福建省狂犬病毒流行毒株的基因分型和分子流行病學(xué)研究。證實(shí)福建省存在表觀健康犬?dāng)y帶狂犬病毒的現(xiàn)象，為狂犬病的預(yù)防和控制提供了有力證據(jù)。雖然福建省狂犬病具有顯著的地域分布特征，本研究發(fā)現(xiàn)福建省狂犬病的流行毒株與目前使用的各種疫苗株N基因序列比對(duì)同源性在8647～9889％之間，均屬于基因Ⅰ型，目前使用的疫苗還是可以較好地保護(hù)福建省流行毒株的感染。4、完成了重組質(zhì)粒PHTB624的高效表達(dá)和純化，獲得一批高純度的狂犬病毒糖蛋白重組抗原，應(yīng)用于犬傷患者免疫后血清抗體的檢測(cè)與市場(chǎng)上主流試劑盒檢測(cè)結(jié)果沒(méi)有明顯差異，提示該重組抗原具有較好的應(yīng)用價(jià)值。

簡(jiǎn)介：我國(guó)有9300萬(wàn)慢性乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUSHBV感染人群慢性HBV感染可引起慢性乙型肝炎、肝硬化、肝衰竭和肝細(xì)胞癌我國(guó)每年死于HBV感染相關(guān)疾病的患者約35萬(wàn)人。抗HBV治療是慢性乙型肝炎治療及阻斷其向肝硬化、肝衰竭和肝細(xì)胞癌發(fā)展的重要手段核苷酸類(lèi)似物NUCLEOSTIDEANALOGSNAS是抗HBV治療的主要藥物但隨用藥時(shí)間的延長(zhǎng)病毒的耐藥問(wèn)題已成為臨床抗HBV治療的棘手問(wèn)題。1998年上市的拉米夫定LAMVIUDINELAM在我國(guó)有長(zhǎng)達(dá)13年的臨床抗HBV治療史超過(guò)120萬(wàn)慢性乙型肝炎患者曾經(jīng)應(yīng)用LAM進(jìn)行抗病毒治療由于該藥服用方便、安全治療費(fèi)用相對(duì)低等優(yōu)點(diǎn)目前仍有大量患者在服用該藥。HBV多聚酶缺乏校對(duì)活性因此在病毒復(fù)制過(guò)程中容易產(chǎn)生錯(cuò)配產(chǎn)生大量序列多樣性的病毒株形成病毒準(zhǔn)種。在藥物選擇壓力下對(duì)藥物適應(yīng)性強(qiáng)的病毒變異株可演變?yōu)閮?yōu)勢(shì)株引起病毒耐藥。NAS的作用靶位在HBV多聚酶的逆轉(zhuǎn)錄酶REVERSETRANASERT區(qū)抑制病毒的復(fù)制。引起病毒耐藥的基因變異分為原發(fā)耐藥變異PRIMARYRESISTANCEMUTATION和補(bǔ)償變異COMPENSATYMUTATION前者直接引起病毒對(duì)藥物敏感性的下降主要是RTM204V和RTM204I又被稱(chēng)為YMDD基序的YVDD和YIDD變異后者補(bǔ)償出現(xiàn)原發(fā)耐藥變異病毒株下降的病毒復(fù)制力主要是RTV173L和RTL180M常于RTM204V聯(lián)合出現(xiàn)RTL80I常于RTM204I聯(lián)合出現(xiàn)。HBV對(duì)LAM的耐藥發(fā)生率高單獨(dú)用LAM治療14年病毒耐藥變異發(fā)生率分別為17％、40、55和67。隨著用藥時(shí)間的延長(zhǎng)用藥人群的不斷擴(kuò)大以及在許多病例中的不合理用藥方式出現(xiàn)新的或潛在LAM耐藥HBV變異株的可能性在增加。除經(jīng)典的RTM204I和RTM204V變異外出現(xiàn)其他LAM耐藥相關(guān)變異的可能性也較大。近年LAM治療應(yīng)答不佳或無(wú)應(yīng)答的患者出現(xiàn)新的YSDD和YKDD變異株的臨床研究報(bào)道已引起學(xué)者的關(guān)注。因此在臨床抗病毒治療過(guò)程中除檢測(cè)經(jīng)典耐藥變異外發(fā)現(xiàn)與鑒定潛在HBV耐藥相關(guān)變異對(duì)于全面認(rèn)識(shí)病毒耐藥與指導(dǎo)臨床合理調(diào)整抗HBV治療方案具有重要意義。目的研究臨床LAM長(zhǎng)期治療失敗的慢乙肝患者HBVRT區(qū)YMDD基序新變異RTM204Q的病毒學(xué)特點(diǎn)鑒定其與LAM耐藥的相關(guān)性。方法1、從解放軍第三〇二醫(yī)院病毒性肝炎研究室完成的大樣本HBVRT基因測(cè)定序列中結(jié)合患者用藥、病毒學(xué)和生化應(yīng)答等臨床信息篩選分析經(jīng)典耐藥變異以外的可能與LAM耐藥相關(guān)的潛在新的耐藥變異形式。2、在篩選出的10例檢出HBVYQDD變異的服用LAM患者中選取1例代表性接受LAM長(zhǎng)期治療卻失敗的慢乙肝患者樣本PCR產(chǎn)物直接測(cè)序法檢出其耐藥變異形式為RTL180MRTM204IQ提取血清HBVDNA采用巢式PCR擴(kuò)增HBV全長(zhǎng)RT區(qū)基因PCR產(chǎn)物直接克隆到PGEMTEASY載體中隨機(jī)挑選40個(gè)克隆進(jìn)行DNA序列測(cè)定并分析耐藥相關(guān)變異。3、采用定點(diǎn)突變方法將HBV11倍的PTRIEX載體下游的SPHI酶切位點(diǎn)封閉再用XHOISPHI雙酶切獲得改建后的PTRIEX11HBV載體。將XHOISPHI雙酶切后的RT片段與載體連接成含HBV11倍基因組長(zhǎng)度的重組質(zhì)粒。4、將構(gòu)建的含野生株和變異株的重組質(zhì)粒經(jīng)FUGENEHD轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞系HEPG2細(xì)胞。轉(zhuǎn)染4小時(shí)后加入不同濃度的核苷酸類(lèi)藥物隔天換藥藥物連續(xù)作用4天后收集細(xì)胞上清采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)不同藥物濃度下HBVDNA的復(fù)制水平分析變異株對(duì)藥物的敏感性。進(jìn)行三次獨(dú)立重復(fù)實(shí)驗(yàn)以便驗(yàn)證。結(jié)果1、共有10例慢乙肝患者檢出YQDD變異進(jìn)一步研究的這例典型病例在LAM治療1年后出現(xiàn)病毒學(xué)突破HBVDNA載量從陰性增加到188106IUML丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ALT從正常水平增加到126UL。對(duì)其HBVRT區(qū)分別進(jìn)行直接測(cè)序與克隆測(cè)序顯示兩種檢測(cè)方法的結(jié)果一致在獲得的37個(gè)克隆中13個(gè)351為野生型11個(gè)297為RTM204Q變異型2個(gè)54為RTM204I變異型10個(gè)270為RTA181T變異型1個(gè)27為RTA181TRTM204Q變異型。2、定點(diǎn)突變成功改建PTRIEX11HBV載體獲得目的載體片段。XHOISPHI雙酶切HBVRT區(qū)五種變異的片段及改建的載體將兩者相連接。制備轉(zhuǎn)染級(jí)質(zhì)粒。3、分別將構(gòu)建的11倍HBV野生型和RTM204Q相關(guān)變異的四種變異型重組載體轉(zhuǎn)染入HEPG2細(xì)胞檢測(cè)它們的復(fù)制力水平野生病毒株的復(fù)制力為600±0096106IUMLRTM204Q變異株、RTM204I變異株、RTA181T變異株和RTA181TRTM204Q變異株與野生株比較均有不同程度下降分別是野生株病毒復(fù)制力的8995、4628、5577和3444。4、在四種不同濃度的NAS藥物作用下評(píng)價(jià)RTM204IQ在體外細(xì)胞中表型耐藥特點(diǎn)。三次獨(dú)立重復(fù)表型耐藥實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示RTM204Q和RTM204I變異株對(duì)阿德福韋ADV、恩替卡韋ETV和替諾福韋TDF敏感但對(duì)LAM出現(xiàn)不同程度的耐藥現(xiàn)象通過(guò)測(cè)定比較藥物的半數(shù)有效抑制濃度IC50RTM204Q、RTM204I株對(duì)LAM的敏感性較野生株分別下降了757倍和1395倍。結(jié)論1、在10例LAM用藥患者樣本的YMDD基序中檢出了與LAM耐藥高度相關(guān)的YQDD變異其中部分患者臨床表現(xiàn)出耐藥提示該變異與LAM治療和耐藥存在一定的關(guān)聯(lián)。2、病毒復(fù)制力測(cè)定表明RTM204Q變異病毒株的病毒復(fù)制力雖然較野生株有所下降但明顯高于經(jīng)典的RTM204ILAM耐藥病毒株。3、表型耐藥分析表明RTM204Q變異病毒株對(duì)LAM具有一定的抗藥性但程度低于RTM204I耐藥變異株RTM204Q和RTM204I變異株對(duì)ADV、ETV和TDF三種藥物均敏感。4、綜上結(jié)果表明RTM204Q是一種以往國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)報(bào)道新的LAM耐藥相關(guān)變異RTM204Q變異株可以與經(jīng)典LAM耐藥變異株同時(shí)在LAM耐藥患者中出現(xiàn)。該研究更全面地認(rèn)識(shí)HBV耐藥、幫助臨床合理治療LAM耐藥HBV感染提供了有價(jià)值的數(shù)據(jù)。

簡(jiǎn)介：根據(jù)2006年全國(guó)范圍內(nèi)的血清流行病學(xué)調(diào)查資料，我國(guó)1～59歲人群中乙型肝炎表面抗原（HEPATITISBSURFACEANTIGEN，HBSAG）攜帶率已從1992年的975降至718，盡管HBSAG攜帶率降到8以下，但由于我國(guó)人口基數(shù)龐大，按目前HBSAG攜帶率推算，我國(guó)仍然有HBSAG攜帶者約9300萬(wàn)人，約占全世界慢性HBV感染者的14。其中慢性乙型肝炎（CHRONICHEPATITISB，CHB）約為2000萬(wàn)～3000萬(wàn)例，全國(guó)每年死于乙肝相關(guān)肝病約30余萬(wàn)例。所以對(duì)慢性HBV感染者特別是對(duì)處于非活動(dòng)性HBSAG攜帶者（INACTIVEHBSAGCARRIER，HBSAGIAC）狀態(tài)的感染者的管理是一項(xiàng)重要而艱巨的任務(wù)。HBV感染者可以打破免疫耐受清除乙型肝炎病毒E抗原（HEPATITISBEANTIGEN，HBEAG），產(chǎn)生乙型肝炎病毒E抗體（HEPATITISBEANTIBODY，ANTIHBE），即發(fā)生HBEAG血清學(xué)轉(zhuǎn)換，發(fā)生HBEAG血清學(xué)轉(zhuǎn)換的群體中有67?的人可以保持低水平的HBVDNA或HBVDNA檢測(cè)不到、ALT水平正常和輕度或不伴有肝組織壞死性炎癥的狀態(tài)，這種被狀態(tài)定義為HBSAGIAC狀態(tài)。HBSAGIAC狀態(tài)可以是自發(fā)病情緩解而達(dá)到，也可以是核苷（酸）類(lèi)似物（NA）或Α干擾素抗病毒治療達(dá)到完全應(yīng)答后病情得以緩解和穩(wěn)定而達(dá)到，不管HBSAGIAC狀態(tài)經(jīng)歷何種過(guò)程預(yù)后通常較好，是HBV感染者比較理想的維持狀態(tài)。然而，即使長(zhǎng)期保持穩(wěn)定攜帶狀態(tài)，由于肝細(xì)胞核內(nèi)的共價(jià)閉合環(huán)狀DNA（COVALENTLYCLOSEDCIRCULARDNA，CCCDNA）很難被徹底清除，所以當(dāng)機(jī)體處于免疫虛損或免疫抑制狀態(tài)時(shí)或在病毒變異的情況下，病毒就會(huì)重新活動(dòng)、復(fù)制，肝組織內(nèi)再次出現(xiàn)炎癥活動(dòng)。曾有研究報(bào)道超過(guò)20的HBSAGIACS進(jìn)展為HBEAG陰性CHBHBEAGNEGATIVECHRONICHEPATITISB，HBEAG（）CHB，而后者存在肝臟疾病反復(fù)活動(dòng)、進(jìn)展、發(fā)生肝硬化和肝細(xì)胞癌的風(fēng)險(xiǎn)，約有23和4的HBEAG（）CHB分別進(jìn)展為肝硬化和肝癌。為了阻止HBSAGIACS向HBEAG（）CHB發(fā)展的進(jìn)程，首先弄清HBSAGIACS和HBEAG（）CHB宿主和病毒學(xué)特征有無(wú)差異是很重要的。利用NA對(duì)HBEAG陽(yáng)性慢性乙型肝炎HBEAGPOSITIVECHRONICHEPATITISB，HBEAG（）CHB進(jìn)行抗病毒治療，在藥物和機(jī)體免疫力的共同作用下HBV水平逐漸降低、HBEAG逐漸被清除，其中有相當(dāng)一部分人可以達(dá)到HBSAGIAC狀態(tài)，HBEAG（）CHB經(jīng)NA治療達(dá)到完全應(yīng)答的患者（NCRECHB）可以實(shí)現(xiàn)并藥物維持HBSAGIAC狀態(tài)，與自發(fā)形成HBSAGIAC狀態(tài)的過(guò)程不同，為了發(fā)現(xiàn)NA抗病毒治療的療效與宿主和病毒的關(guān)系，認(rèn)識(shí)兩組人群的基本特征和各自的病毒學(xué)特點(diǎn)也很重要。就以上兩個(gè)問(wèn)題我們進(jìn)行了以下兩項(xiàng)臨床研究一非活動(dòng)性HBSAG攜帶者與HBEAG陰性慢性乙型肝炎患者病毒學(xué)特征的比較11研究目的為了探索HBSAGIACS向HBEAG（）CHB進(jìn)展的危險(xiǎn)因素，對(duì)自然轉(zhuǎn)歸的HBSAGIACS和HBEAG（）CHB兩組人群的HBV基因型、PC的G1896和BCP的A1762G1764變異等病毒學(xué)特征分別進(jìn)行比較。12研究方法按照2005年慢性乙型肝炎防治指南診斷標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行HBSAGIACS和HBEAG（）CHB患者的血清收集。采用QIAGENBLOODDNA檢測(cè)試劑盒（QIAGEN，德國(guó)）分別對(duì)187例HBSAGIACS血清、99例HBEAG（）CHB血清進(jìn)行HBVDNA提取，然后利用半巢式PCR進(jìn)行CX片段（NT1643NT1974）擴(kuò)增，半巢式PCR的第一輪引物分別為P9和P35，第二輪引物為P9和CSP，用CSP引物作測(cè)序引物，使用ABI3730測(cè)序儀（APPLIEDBIOSYSTEMS，美國(guó)）直接測(cè)序。HBV基因組第1762A1764T以及第1896G核苷酸變異的判斷采用CLUSTERⅩ進(jìn)行序列排列和人工確認(rèn)。基因型判斷采用PCR限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（PCRRFLP）方法，用PCRRFLP方法判定不出基因型的標(biāo)本采用直接測(cè)序方法判斷（同研究二中基因型確定的方法）。13研究結(jié)果187例HBSAGIACS組中113例HBSAGIACS血清HBVDNA經(jīng)PCR擴(kuò)增陽(yáng)性，其中103份完成CX片段（NT1643NT1974）測(cè)序，HBEAG（）CHB組中99份血清全部HBVDNAPC擴(kuò)增陽(yáng)性，全部完成CX片段（NT1643NT1974）測(cè)序。HBSAGIACS組中HBV基因B型比例高于HBEAG（）CHB組（84113VS4699，743VS465，P0000）；HBSAGIACS組的G1896A變異比例高于HBEAG（）CHB組（69103VS3999，670VS394，P0000），但A1762TG1764A變異株比例低于后者（38103VS6399，369VS636P0000）。經(jīng)二分類(lèi)LOGISTIC回歸分析得出男性（7519，95CI269320995，P0000）、年齡超過(guò)40歲（25369，95CI5323120913，P0000）以及基因C型感染（2309，95CI10285186，P0043）是與HBEAG（）CHB相關(guān)的危險(xiǎn)因素的結(jié)論，并未發(fā)現(xiàn)A1762TG1764A變異（2017，95CI09584247，P0065）與G1896A變異（0565，95CI02651205，P0140）有明顯的獨(dú)立預(yù)測(cè)HBEAG（）CHB的作用。14研究結(jié)論HBSAGIAC在病毒學(xué)特征上與HBEAG（）CHB明顯不同；HBV基因C型（HBVC）感染、年齡大的男性HBSAGIACS相對(duì)容易向HBEAG（）CHB發(fā)展。二NA治療HBEAG（）CHB完全應(yīng)答患者的病毒學(xué)特點(diǎn)21研究目的為了認(rèn)識(shí)NCRECHB和HBSAGIAC兩組人群HBSAGIAC狀態(tài)的穩(wěn)定性的差異、影響NA療效的因素，對(duì)NCRECHB和HBSAGIAC兩組人群的宿主基本特征及HBV的基因型、PC的G1896A和BCP的A1762TG1764A變異等病毒學(xué)特征方面進(jìn)行比較。22研究方法首先按照2005年慢性乙型肝炎防治指南診斷標(biāo)準(zhǔn)，收集NCRECHB（治療組）和HBSAGIACS（對(duì)照組）的血清收集。采用QIAGENBLOODDNA檢測(cè)試劑盒（QIAGEN，德國(guó)）分別對(duì)117例NCRECHB和58例HBSAGIACS進(jìn)行HBVDNA提取，然后以BS1和POL2為外引物、YS1和YS2為內(nèi)引物行巢式PCR對(duì)S區(qū)進(jìn)行擴(kuò)增，對(duì)HBVDNAS區(qū)擴(kuò)增陽(yáng)性的標(biāo)本的PCR產(chǎn)物利用RFLP法進(jìn)行內(nèi)切酶酶切、電泳、觀察條帶基因分型，基因分型不明確的再進(jìn)行測(cè)序鑒定基因型。再利用巢式PCR對(duì)117例NCRECHB和58例HBSAGIACS進(jìn)行PC和BCP區(qū)兩個(gè)片段的擴(kuò)增以P9、CSP為第一輪引物，再分別以P9、P11和CE、CSP為第二輪引物，共用第一輪PCR產(chǎn)物進(jìn)行BCP和PC區(qū)兩個(gè)片段的PCR擴(kuò)增，再利用錯(cuò)配PCRRFLP方法對(duì)擴(kuò)增陽(yáng)性的標(biāo)本的第二輪PCR產(chǎn)物進(jìn)行酶切確定變異情況，不能酶切的標(biāo)本再行研究一所述的半巢式PCR對(duì)CX片段（NT1643NT1974）進(jìn)行擴(kuò)增，對(duì)CX片段（NT1643NT1974）陽(yáng)性的PCR產(chǎn)物進(jìn)行直接測(cè)序，測(cè)序結(jié)果采用CLUSTERX進(jìn)行序列排列和人工確認(rèn)以對(duì)G1896A和A1762TG1764A進(jìn)行檢測(cè)。23研究結(jié)果NCRECHB組男性比例高于HBSAGIAC組（778VS586，P0008），NCRECHB組的平均年齡大于HBSAGIAC組（T2267，P0025），NCRECHB組中血清HBVDNAS區(qū)擴(kuò)增陽(yáng)性率低于HBSAGIAC組中血清HBVDNAS區(qū)擴(kuò)增陽(yáng)性率（521VS793，P0001），經(jīng)PCRRFLP和測(cè)序的方法分析得出NCRECHB組中1例A型、44例B型、16例C型，HBSAGIAC組中33例B型、10例C型、2例D型、1例基因型不明，兩組的主要基因型構(gòu)成比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（X20154，P0694）；使用酶切和部分PCR產(chǎn)物直接測(cè)序的方法總計(jì)得出NCRECHB組BCP區(qū)A1762TG1764A檢出率顯著低于HBSAGIAC組（98VS414，P0002），PC區(qū)G1896A檢出率亦明顯低于HBSAGIAC組（140VS724，P0000）。24研究結(jié)論NCRECHB人群的潛在病毒水平較HBSAGIAC的低。兩組人群中感染的主要HBV基因型構(gòu)成比沒(méi)有明顯差異，都是以B基因型為主。NCRECHB患者G1896A和A1762TG1764A變異檢出率分別低于HBSAGIAC的以上兩區(qū)域的變異檢出率。

簡(jiǎn)介：1HBEAG陰性慢性乙型肝炎的流行率為359﹪與HBEAG陽(yáng)性組比較HBEAG陰性組CHB的HBVDNA水平顯著降低而肝組織病理的炎癥分級(jí)、纖維化分期偏重的比例均顯著增高HBEAG陰性組CHB隨HBVDNA水平升高ALT水平、肝組織炎癥分級(jí)和纖維分期均相應(yīng)增高而HBEAG陽(yáng)性組CHB隨HBVDNA水平升高ALT水平、肝組織炎癥分級(jí)與纖維化分期均相應(yīng)較低2HBEAG陰性的HBV感染者中X基因因插入、缺失、點(diǎn)突變等變異所致的X蛋白的截短與HBV低水平復(fù)制及肝炎靜息的無(wú)癥狀攜帶臨床現(xiàn)象密切相關(guān)3采用分子克隆、人工定點(diǎn)突變等技術(shù)成功地構(gòu)建了20DP38Ⅰ、21DP38Ⅰ、20DA1896P38Ⅰ、21DA1896P38Ⅰ四株含12拷貝HBV全基因的突變載體4HBVCP2021BPNT174717481767缺失株及同時(shí)存在的A點(diǎn)變異株的病毒抗原表達(dá)、病毒復(fù)制及轉(zhuǎn)錄水平均較野毒株顯著下降可解釋HBEAG陰性的HBV低水平復(fù)制的臨床現(xiàn)象520BP與21BP缺失的CP其啟動(dòng)子活性順式調(diào)節(jié)作用均較野毒株型顯著下降20BP與21BP缺失株X蛋白分別表現(xiàn)為無(wú)和微弱的轉(zhuǎn)式激活作用因而可從理論上闡明CP2O21BP缺失變異株生物學(xué)活性低下的特點(diǎn)

簡(jiǎn)介：目的本研究通過(guò)山東省自2000年實(shí)現(xiàn)無(wú)脊灰目標(biāo)后開(kāi)展脊灰病毒學(xué)監(jiān)測(cè)，對(duì)山東省AFP及其病毒學(xué)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)的敏感性、及時(shí)性、準(zhǔn)確性和完整性進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，監(jiān)測(cè)AFP病例脊灰病毒PV及其人類(lèi)腸道病毒HEV的攜帶狀態(tài)，分析PV株的變異情況，并對(duì)疫苗變異株P(guān)V進(jìn)行分子流行病學(xué)研究，探索其規(guī)律和特點(diǎn)，進(jìn)一步證實(shí)山東省維持無(wú)脊灰狀態(tài)的成果。通過(guò)2007年山東省首次發(fā)現(xiàn)的疑似VDPV病例開(kāi)展深入的調(diào)查和處理，對(duì)所采取的應(yīng)急處置措施及其效果進(jìn)行全面分析、評(píng)價(jià)和總結(jié)，為國(guó)家制訂和完善針對(duì)VDPV事件的應(yīng)急處置技術(shù)方案提供科學(xué)的依據(jù)。第一部分山東省實(shí)現(xiàn)無(wú)脊髓灰質(zhì)炎目標(biāo)后病毒學(xué)監(jiān)測(cè)分析方法通過(guò)全省AFP監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，對(duì)2000～2007年報(bào)告的AFP病例采集糞便標(biāo)本進(jìn)行病毒分離。病毒分離、型別鑒定以及血清中和抗體試驗(yàn)，采用WHO脊髓灰質(zhì)炎實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)規(guī)定的方法。對(duì)分離到的PV陽(yáng)性株，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA和多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)一限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析PCRRFLP方法進(jìn)行型內(nèi)鑒定，型內(nèi)鑒定陽(yáng)性的病毒株測(cè)定其VP1基因全長(zhǎng)，采用SEQUENCHER、DNASTAR等軟件進(jìn)行結(jié)果分析。結(jié)論山東省AFP及其病毒學(xué)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)具有較高的敏感性、及時(shí)性、完整性和準(zhǔn)確性，未再發(fā)現(xiàn)脊灰野病毒株，掌握了山東省疫苗株脊灰病毒的分布特征和疫苗變異株脊灰病毒的分子生物學(xué)特征。建議在提高疫苗接種率的同時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)AFP病例的病毒學(xué)監(jiān)測(cè)工作，密切關(guān)注疫苗株脊灰病毒的變異情況，及早發(fā)現(xiàn)輸入性野毒株脊灰病毒和疫苗衍生株脊灰病毒，迅速采取應(yīng)急措施阻斷病毒的傳播，繼續(xù)維持無(wú)脊灰狀態(tài)直至全球?qū)崿F(xiàn)消滅脊灰的目標(biāo)。第二部分山東省首次發(fā)現(xiàn)脊髓灰質(zhì)炎疫苗衍生病毒事件的應(yīng)急處置及其評(píng)價(jià)方法對(duì)2007年4月山東省首次發(fā)現(xiàn)的VDPV事件，運(yùn)用現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)爆發(fā)調(diào)查、快速評(píng)價(jià)與主動(dòng)監(jiān)測(cè)、病例管理、病毒學(xué)和血清學(xué)監(jiān)測(cè)、應(yīng)急免疫干預(yù)等方法進(jìn)行綜合處置，并對(duì)調(diào)查結(jié)果和應(yīng)急處置效果進(jìn)行綜合分析評(píng)價(jià)。結(jié)論山東省兩例VDPV病例是相互獨(dú)立的，沒(méi)有形成CVDPVS；針對(duì)本次VDPV事件采取的一系列應(yīng)急處置措施，明確了病例診斷，確定VDPV的屬性，阻斷了VDPV傳播擴(kuò)散，取得了良好的效果，為今后我國(guó)規(guī)范處置此類(lèi)應(yīng)急事件積累了經(jīng)驗(yàn)，為免疫策略調(diào)整提供了科學(xué)依據(jù)。

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簡(jiǎn)介：急性上呼吸道感染是指鼻腔、咽或喉部急性炎癥的概稱(chēng)，是呼吸道最常見(jiàn)的一種傳染病。本病約有70～80％由病毒引起，主要有流感病毒甲、乙、丙、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒、?？刹《尽⒖滤_奇病毒、麻疹病毒、風(fēng)疹病毒等，成人以鼻病毒為主，兒童則以副流感病毒和呼吸道合胞病毒為主。本病在祖國(guó)醫(yī)學(xué)中歸屬于“外感發(fā)熱”、“傷風(fēng)感冒”范疇。內(nèi)經(jīng)、傷寒論、及后世醫(yī)家，如劉完素、葉天士、吳鞠通等都本病有詳細(xì)的論述，并已形成較為完備的外感熱病理論體系。一般認(rèn)為，該病的病因?yàn)椤傲保础帮L(fēng)、寒、暑、濕、燥、火”，八綱病機(jī)、臟腑病機(jī)、六經(jīng)病機(jī)、衛(wèi)氣營(yíng)血病機(jī)、三焦病機(jī)對(duì)此皆有詳實(shí)的記載。本課題通過(guò)對(duì)急性病毒性上呼吸道感染患者的中醫(yī)四診證候、發(fā)病節(jié)氣、結(jié)合血常規(guī)和血清病毒抗體檢測(cè)，探討中醫(yī)證候分型與血常規(guī)、病毒種類(lèi)的相關(guān)性。目的運(yùn)用臨床流行病學(xué)、數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)，結(jié)合地域、季節(jié)、年齡等多因素，探討急性病毒性上呼吸道感染的中醫(yī)證候，為特定病毒感染的中醫(yī)急性上呼吸道感染辨證論治提供客觀、相對(duì)定量的診斷標(biāo)準(zhǔn)。為中醫(yī)外感熱病的系統(tǒng)研究、中醫(yī)防治急性上呼吸道感染的流行、治療、預(yù)后提供客觀依據(jù)。方法采用前瞻性研究方法，對(duì)20069至20072前來(lái)我院急診門(mén)診和留觀的急性上呼吸道感染的病人進(jìn)行中醫(yī)四診辨證登記、病毒檢查以及隨訪。病毒檢查采用歐蒙試劑盒，免疫熒光法進(jìn)行。結(jié)果179例納入病例根據(jù)中醫(yī)四診證候，通過(guò)聚類(lèi)分析，可得出聚Ⅳ類(lèi)風(fēng)寒證，風(fēng)熱證、風(fēng)寒夾濕證、風(fēng)熱夾濕證型。279例納入病例當(dāng)中的64例進(jìn)行血常規(guī)檢查，分析聚類(lèi)證型與白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比的關(guān)系，提示聚類(lèi)Ⅳ風(fēng)熱夾濕證組與細(xì)菌感染相關(guān)；通過(guò)根據(jù)急性病毒性上呼吸道感染的癥狀學(xué)研究，針對(duì)性進(jìn)行血清流感AB，柯薩奇病毒、副流感病毒等抗體檢測(cè)。探討血清病毒抗體與聚類(lèi)證型之間的關(guān)系，結(jié)果，血清流感病毒AB，柯薩奇病毒以及副流感病毒抗體在聚四類(lèi)證型之間無(wú)相關(guān)性。結(jié)論1本課題收集的79例急性上呼吸道感染可聚類(lèi)分為風(fēng)寒證，風(fēng)熱證、風(fēng)寒夾濕證、風(fēng)熱夾濕證。其中，風(fēng)熱夾濕證與白細(xì)胞總數(shù)、中性粒百分比升高相關(guān)。2血清流感AB，柯薩奇病毒、副流感病抗體在聚四類(lèi)證型之間無(wú)相關(guān)性。

簡(jiǎn)介：乙型肝炎病毒HBV基因組全長(zhǎng)僅為3200個(gè)堿基，包括4個(gè)相互重疊的讀框前CC基因、P基因、S基因和X基因。依據(jù)核苷酸序列異質(zhì)性≥8％可將HBV毒株分成不同的基因型。到目前為止一共發(fā)現(xiàn)了8個(gè)HBV基因型基因型A、B、C、D、E、F、G和H。E型主要分布于非洲撒哈拉沙漠地帶且與基因型D有類(lèi)似的基因特征，異質(zhì)性最為明顯的F型主要分布于南美及中美洲。HBV幾個(gè)主要的基因型中均發(fā)現(xiàn)基因亞型現(xiàn)象的存在。其中基因型A可分為A1A33個(gè)亞型；基因型B可分為B1B44個(gè)亞型；基因型C可分為C1C44個(gè)亞型；基因型D分為D1D44個(gè)亞型；基因型F可分為F1、F2兩個(gè)亞型。結(jié)果發(fā)現(xiàn)HBVC1、HBVC2是中國(guó)地區(qū)最普遍的HBVC亞型，其中是HBVC1占71％393512，HBVC2占27％112512此外，在對(duì)全國(guó)血清樣本進(jìn)行基因分型的過(guò)程中，我們?nèi)我膺x取PCRRFLP分型鑒定的基因型B、C、D樣本各3份進(jìn)行了全序列的測(cè)定以判斷該分型方法的準(zhǔn)確性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，以PCRRFLP分型鑒定為基因型D的部分樣本測(cè)序后比較證實(shí)為基因型C，后來(lái)的研究顯示該種毒株在S區(qū)與基因型D相同，暫時(shí)命名為HBVCD重組體。并根據(jù)其序列特征建立了該重組體的初步篩選方法。以初步篩選方法對(duì)來(lái)自甘肅的HBV血清樣本進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)了7例該種重組體；選取其中部分樣本進(jìn)行HBV全基因序列的測(cè)定，測(cè)序結(jié)果證實(shí)重組的存在。這種亞型均為HBV基因型C與基因D毒株的重組體。因此，在中國(guó)大陸地區(qū)至少存在3種HBVC基因亞型HBVC1、HBVC2、及HBVCD。如同基因型呈地域性分布的特點(diǎn)一樣，基因型C亞型在我國(guó)不同地區(qū)的分布也有很大差異。在北方地區(qū)，98％以上基因型C毒株均屬于C2亞型，C1亞型罕見(jiàn)；而在南方地區(qū)，55％基因型C毒株為C1亞型，C2占較小比例。HBVC1亞型與C2亞型在各省的分布情況為北京2％154與98％5354；山東1％1100與99％99100；云南13％538與87％3338；湖南19％316與81％1316；廣東63％4775與37％2875；海南79％5367與21％1467。在東南地區(qū)的福建省，C1與C2的亞型的比例分別為1％172與99％7172。在中國(guó)西部HBV慢性感染人群中，基因型C亞型的情況與其它地區(qū)不同。在甘肅地區(qū)，C亞型的分布比例C1為1％190，C2為91％8290，CD重組體為8％790。本研究中還比較了兩種主要C基因亞型C1與C2感染者之間的臨床差異。人口學(xué)資料比較發(fā)現(xiàn)，C1亞型感染者年齡較C2亞型感染者小316±124VS344±120，P003。盡管C1亞型感染者較C2亞型感染者有較高的HBEAG陽(yáng)性率，兩者之間并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。兩組病例在性別比率、肝功能檢查ALT水平及總膽紅素水平及臨床診斷方面未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。因此，HBV基因亞型存在的現(xiàn)象對(duì)于疾病發(fā)生發(fā)展的影響尚有待進(jìn)一步研究。在本研究的第二部分，為研究HBV基因型功能學(xué)的差異，使用了腺病毒載體將目的HBV基因?qū)胝婧思?xì)胞，對(duì)不同HBV基因型毒株的表達(dá)與復(fù)制進(jìn)行了比較研究。腺病毒ADENOVIRUS，AD分布廣泛，在許多哺乳動(dòng)物和禽類(lèi)中都發(fā)現(xiàn)其存在。其中人的腺病毒有50種以上，但通常都較溫和，很少危及生命。腺病毒對(duì)于研究真核細(xì)胞DNA的復(fù)制、轉(zhuǎn)錄，RNA剪接加工，蛋白質(zhì)的合成以及細(xì)胞轉(zhuǎn)化做出過(guò)重要的貢獻(xiàn)。腺病毒還具有高滴度、高穩(wěn)定性、高轉(zhuǎn)染效率、非致癌性等特點(diǎn)。此外，對(duì)野生型腺病毒進(jìn)行基因工程改造而制作的重組病毒載體系統(tǒng)，作為哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體、重組疫苗和基因治療載體也得到了廣泛應(yīng)用。本研究運(yùn)用了一種新的重組病毒構(gòu)建方法ADEASYTM系統(tǒng)，在體外模型中研究不同基因型HBV病毒復(fù)制活性差異。首先，我們構(gòu)建了13拷貝HBVB、HBVC全基因組，在其5’末端包含增強(qiáng)子Ⅰ及增強(qiáng)子Ⅱ，復(fù)制起點(diǎn)，X及前C啟動(dòng)子基因，前基因RNA轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)，特異多腺苷酸化位點(diǎn)以及完整的X開(kāi)放讀框。這種結(jié)構(gòu)已被證明能在肝臟細(xì)胞及轉(zhuǎn)基因小鼠中進(jìn)行有效的復(fù)制。隨后，將13拷貝HBV全基因插入到重組病毒穿梭載體PADTRACK的多克隆位點(diǎn)中，該位點(diǎn)位于CMV啟動(dòng)子及綠色熒光蛋白GFP位點(diǎn)上游，利用該系統(tǒng)，一方面可通過(guò)表達(dá)的GFP在熒光顯微鏡下觀察重組病毒感染情況，另一方面，構(gòu)建的13拷貝HBV全基因能夠利用病毒自身的調(diào)控序列啟動(dòng)HBV的復(fù)制，避免了載體上的外源啟動(dòng)子對(duì)HBV復(fù)制及表達(dá)的影響。將重組穿梭質(zhì)粒與腺病毒骨架載體PADEASY1共轉(zhuǎn)化ECOLIBJ5183細(xì)菌使之內(nèi)重組。在細(xì)菌中發(fā)生同源重組后，選出重組質(zhì)粒并酶切鑒定，將鑒定出的重組質(zhì)粒經(jīng)PACⅠ線性化后使用脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染293細(xì)胞，通過(guò)GFP可以監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)染效率和病毒的產(chǎn)生。得到重組腺病毒之后，進(jìn)行純化和擴(kuò)增，再使用兩種不同基因型HBV重組腺病毒感染HEPG2細(xì)胞。使用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞及培養(yǎng)上清中的HBSAG及HBEAG的表達(dá)情況，用美國(guó)雅培公司的化學(xué)發(fā)光全自動(dòng)免疫分析儀對(duì)細(xì)胞及培養(yǎng)上清中的HBSAG及HBEAG進(jìn)行檢測(cè)并進(jìn)行定量分析；熒光定量法檢測(cè)細(xì)胞及培養(yǎng)上清中HBV的滴度；免疫組化檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)HBSAG及HBCAG的表達(dá)情況。結(jié)果表明，從我國(guó)慢性乙肝病毒感染者血清中獲得的HBV基因型B和C毒株，并經(jīng)過(guò)全序列的測(cè)定確定其基因型。通過(guò)酶切與連接成功構(gòu)建了兩種基因型的13拷貝HBVDNA，克隆篩選后進(jìn)行序列測(cè)定，證實(shí)了兩種基因型13拷貝HBVDNA序列正確無(wú)誤。為確保所構(gòu)建的有復(fù)制能力的13拷貝HBVDNA在病毒復(fù)制過(guò)程中不受這些重要位點(diǎn)的影響，對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行仔細(xì)核對(duì)，并與多株參考序列進(jìn)行比對(duì)，排除了有插入、缺失及重要位點(diǎn)突變的克隆。13拷貝HBVDNA序列經(jīng)雙酶切，瓊脂糖凝膠電泳回收后，與腺病毒穿梭載體PADTRACK進(jìn)行連接，連接物轉(zhuǎn)化JM109細(xì)菌，隨機(jī)挑取克隆，雙酶切法初步驗(yàn)證插入序列片段大小的正確性。重組穿梭載體再用YS1YS2進(jìn)PCR擴(kuò)增后，NDEⅠ內(nèi)切酶消化，驗(yàn)證插入序列基因型的正確性。兩種基因型的重組穿梭載體分別被命名為ADTRACKHBVB和ADTRACKHBVC；轉(zhuǎn)化感染受態(tài)細(xì)菌ADEASIER1感受態(tài)細(xì)胞得到兩種基因型的腺病毒重組體PADEASIERB和PADEASIERC，PACⅠ酶切鑒定其正確性。大量提取的重組腺病毒質(zhì)粒PADEASIERB和PADEASIERC用PACⅠ酶切線性化后，用脂質(zhì)體LIPOFECTAMINE2000轉(zhuǎn)染293細(xì)胞轉(zhuǎn)染710天后，即可在熒光顯微鏡下看見(jiàn)明顯的GFP熒光，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，熒光斑點(diǎn)數(shù)也隨之增多，在普通顯微鏡下可見(jiàn)明顯的病毒蝕斑，293細(xì)胞也出現(xiàn)固縮、變圓、脫落、裂解等明顯的細(xì)胞病變現(xiàn)象，結(jié)果證明了重組病毒的形成和擴(kuò)增。收獲轉(zhuǎn)染10天后的293細(xì)胞及上清液，反復(fù)凍融裂解后，再重新感染293細(xì)胞。感染2天后細(xì)胞即可看到GFP的表達(dá)，細(xì)胞也出現(xiàn)變圓、脫落、裂解等明顯的細(xì)胞病變現(xiàn)象。收獲二次感染的細(xì)胞及上清液，反復(fù)凍融裂解后，取上清再次感染293細(xì)胞，進(jìn)行病毒的大量擴(kuò)增，使兩種基因型的重組腺病毒滴度約為109ML。研究表明，兩種重組病毒的包裝是成功的，并且均具有很高的滴度，能夠有效的感染293細(xì)胞，并有很強(qiáng)的GFP表達(dá)。按感染復(fù)數(shù)為5的標(biāo)準(zhǔn)，兩種基因型的腺病毒重組體分別感染HEPG2細(xì)胞。當(dāng)感染細(xì)胞培養(yǎng)至第5天時(shí)收集感染細(xì)胞及上清，細(xì)胞內(nèi)HBCAG及HBSAG經(jīng)免疫組織化學(xué)法檢測(cè)，均有蛋白表達(dá)。細(xì)胞及上清中的HBEAG和HBSAG用ELISA法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果可明確檢測(cè)到HBEAG及HBSAG的表達(dá)；上清及細(xì)胞內(nèi)病毒顆粒經(jīng)定量檢測(cè)后有明確的上升，說(shuō)明我們所構(gòu)建的13拷貝HBVDNA能夠在HEPG2細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行表達(dá)和復(fù)制。分別用兩種不同HBV基因型的重組腺病毒感染HEPG2細(xì)胞，以后隔日收集感染細(xì)胞及清，并分別對(duì)上清中的病毒顆粒、HBEAG及HBSAG進(jìn)行定性及定量檢測(cè)。感染第2天時(shí)，上清中即可檢測(cè)到病毒顆粒、HBEAG及HBSAG。感染第4天時(shí)上清中HBEAG及HBSAG的表達(dá)量最高，以后隨著細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，HBEAG及HBSAG的表達(dá)量呈下降趨勢(shì)，HBEAG及HBSAG的表達(dá)量C基因型明顯高于B基因型。上清中病毒顆粒的量在第2天時(shí)即達(dá)最高值，然后隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)呈緩慢下降趨勢(shì)，但兩種基因型間病毒定量無(wú)差別。在本研究中，我們證明了腺病毒載體能夠?qū)⒕哂袕?fù)制能力的HBV基因轉(zhuǎn)導(dǎo)入肝細(xì)胞系，并能啟動(dòng)HBV復(fù)制導(dǎo)致完整的具有感染能力的HBV顆粒的產(chǎn)生，這說(shuō)明導(dǎo)入的HBVDNA能在被轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中復(fù)制。腺病毒介導(dǎo)的HBV轉(zhuǎn)染成功將為我們進(jìn)一步研究病毒在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制能力，比較不同的病毒株復(fù)制能力的差異，以及各病毒蛋白在病毒生活周期中的作用提供新的可靠途徑。本研究利用新型腺病毒系統(tǒng)在HBV基因型體外功能學(xué)研究方面的進(jìn)行了初步嘗試。研究結(jié)果證明，腺病毒系統(tǒng)能作為HBV體外功能學(xué)研究和毒株之間比較研究的非常有效的工具。研究的初步結(jié)果顯示，B基因型和C基因型在體外復(fù)制過(guò)程中其抗原表達(dá)有差異，基因型C明顯高于基因型B，但病毒復(fù)制水平未見(jiàn)明顯差異。由于本研究只是比較了兩種基因型之間單一毒株的差異，這種初步結(jié)果有待進(jìn)一步更深入的研究加以證實(shí)。