福建省狂犬病流行病學(xué)及病毒學(xué)特征研究.pdf

1、目的: 近些年，我國人間狂犬病報告病例數(shù)呈遞增態(tài)勢，狂犬病已成為當(dāng)前重大的公共衛(wèi)生問題。我國關(guān)于狂犬病流行病學(xué)、病原學(xué)的深入研究較少，整體資料不全，福建省這方面的研究更是薄弱，尚不清楚我省狂犬病毒主要宿主的病毒攜帶情況和免疫情況，不清楚居民對狂犬病的認(rèn)知程度及養(yǎng)犬情況等；國內(nèi)狂犬病毒街毒株的分離報道較少，尚未見在福建省境內(nèi)分離出狂犬病毒的報道，對福建省境內(nèi)狂犬病毒的流行毒株及其特征尚不清楚。因此，為了更好地預(yù)防和控制狂犬病，非常

2、有必要開展系統(tǒng)的狂犬病流行病學(xué)研究，獲得狂犬病流行現(xiàn)狀的基礎(chǔ)資料，了解影響狂犬病發(fā)病率的主要因素；也很有必要進(jìn)行狂犬病毒流行毒株的分離鑒定、病原生物學(xué)和遺傳學(xué)特征的研究。因養(yǎng)犬?dāng)?shù)的增加導(dǎo)致犬傷患者也不斷增加，推進(jìn)和提高犬傷患者免疫后血清抗體及犬唾液帶毒的檢測方法也迫在眉捷。 方法: 1、針對狂犬病高發(fā)的實(shí)際情況，通過系統(tǒng)的流行病學(xué)調(diào)查研究，以獲得狂犬病流行現(xiàn)狀的基礎(chǔ)資料；從生態(tài)學(xué)角度收集影響狂犬病發(fā)病率有關(guān)因素的資料，通

3、過負(fù)二項回歸模型篩查出影響狂犬病發(fā)病率的主要因素。 2、運(yùn)用MIT和CIT法從疑似狂犬的腦組織中進(jìn)行狂犬病毒街毒株的分離與鑒定，采取分段RT-PCR的方法，對所分離的街毒株進(jìn)行序列擴(kuò)增、克隆、測序，拼接獲得全基因組序列，并運(yùn)用生物學(xué)軟件對基因組結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析與比較； 3、通過收集福建省不同時間、不同地區(qū)的犬腦組織，進(jìn)行實(shí)驗室檢測診斷，對陽性標(biāo)本進(jìn)行N基因全長的擴(kuò)增、克隆和測序，結(jié)合疫情資料進(jìn)行狂犬病的分子流行病學(xué)研究。

4、 4、選取CTN株狂犬病毒糖蛋白富集表位基因片段進(jìn)行克隆、表達(dá)和純化，人工獲得狂犬病毒糖蛋白抗原，為探索犬傷患者免疫后血清抗體及犬唾液帶毒檢測方法的提高奠定基礎(chǔ)。 結(jié)果： 1、從2000～2006年福建省每年均有人間狂犬病疫情發(fā)生，平均發(fā)病率為0.07/10萬。2002～2006年福建省人狂犬病報告病例，各地分布不一，夏秋季節(jié)發(fā)病相對較多，病例主要集中在30～60歲之間，男性多于女性，農(nóng)民發(fā)病人數(shù)最多。 2、

5、福建省3個調(diào)查地區(qū)的平均家庭養(yǎng)犬率約為46.67％，人均養(yǎng)犬?dāng)?shù)約為0.13只，每家養(yǎng)犬?dāng)?shù)約為0.63只。家犬平均免疫率為5.54％。 3、福建省普通群眾對狂犬病的認(rèn)知情況較差，狂犬病專業(yè)技術(shù)人員，總體對狂犬病犬傷情況處理的知識水平較高。 4、研究認(rèn)為狂犬病的發(fā)病率與犬的免疫率及普通群眾狂犬病知識認(rèn)知能力有關(guān)。犬免疫率每增加1％，5年累積發(fā)病率為原來的79％即下降了21％。普通群眾狂犬病知識認(rèn)知能力平均每增加0.1分，5年

6、累積發(fā)病率為原來的80％即下降了20％。 5、本研究通過RT-nested-PCR法從表觀健康犬腦組織中檢測出狂犬病毒，并經(jīng)基因測序證實(shí)表觀健康犬?dāng)y帶狂犬病毒，為狂犬病的預(yù)防和控制提供了有力的實(shí)驗證據(jù)。 6、首次在福建省成功分離出狂犬病毒街毒株(7株)，并完成其中兩株(FJ008、FJ009)的生物學(xué)特性和全基因組序列測定。 7、從福建省各地收集的犬腦組織標(biāo)本共89份，通過RT-nested-PCR擴(kuò)增、純化、克

7、隆，獲得19條包含N基因完整讀碼框的序列。根據(jù)核苷酸和推導(dǎo)的氨基酸的同源性高低，把19份含有RABV RNA的標(biāo)本分為三個群組，a群組包括：FJ001、FJ002、FJ003、FJ012、FJ013、FJ014；b群組包括：FJ008、FJ009、FJ010、FJ011、FJ015、FJ016、FJ017、FJ018、FJ019；c群組包括：FJ004、FJ005、FJ005、FJ007。各群組內(nèi)部RABV N基因的核苷酸同源性在99.

8、70～100％之間，群組間RABV N基因的核苷酸同源性在86.43～89.28％，各群組內(nèi)部RABV N基因的氨基酸同源性在98.86～100％之間，群組間RABV N基因的氨基酸同源性在95.33～98.44％。結(jié)合標(biāo)本來源地，證實(shí)福建省狂犬病具有顯著的地域分布特征。 8、福建省狂犬病的流行毒株與目前常用的各種疫苗株N基因序列比對同源性在86.47～98.89％之間，均屬于基因Ⅰ型，提示目前使用的疫苗能較好地保護(hù)福建省RAB

9、V流行毒株的感染。 9、完成了重組質(zhì)粒pHTb-624的高效表達(dá)和純化，獲得一批高純度的狂犬病毒糖蛋白重組抗原，應(yīng)用于犬傷患者免疫后血清抗體的檢測，與市場上主流試劑盒檢測結(jié)果沒有明顯差異，提示該重組抗原具有較好的應(yīng)用價值。 結(jié)論： 1、福建省近些年狂犬病高發(fā)，居民養(yǎng)犬眾多，犬免疫率低下，普通群眾狂犬病相關(guān)知識薄弱。犬免疫率低下及普通群眾狂犬病相關(guān)知識薄弱是福建省狂犬病高發(fā)的主要影響因素。 2、首次在福建省

10、成功分離出7株狂犬病毒街毒株，并完成其中兩株街毒株(FJ008、FJ009)的生物學(xué)特性和全基因組序列測定。 3、完成福建省狂犬病毒流行毒株的基因分型和分子流行病學(xué)研究。證實(shí)福建省存在表觀健康犬?dāng)y帶狂犬病毒的現(xiàn)象，為狂犬病的預(yù)防和控制提供了有力證據(jù)。雖然福建省狂犬病具有顯著的地域分布特征，本研究發(fā)現(xiàn)福建省狂犬病的流行毒株與目前使用的各種疫苗株N基因序列比對同源性在86.47～98.89％之間，均屬于基因Ⅰ型，目前使用的疫苗還是可