高效液相色譜柱后化學(xué)發(fā)光檢測(cè)技術(shù)在植物的羥基酸和黃酮類(lèi)藥物分析中的應(yīng)用.pdf

1、化學(xué)發(fā)光(Chemiluminescence,簡(jiǎn)稱(chēng)CL)是化學(xué)反應(yīng)的反應(yīng)物或生成物吸收了反應(yīng)釋放的化學(xué)能，電子由基態(tài)躍遷至激發(fā)態(tài)，再由激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí)所產(chǎn)生的光輻射。根據(jù)化學(xué)反應(yīng)在某一時(shí)刻的發(fā)光強(qiáng)度來(lái)確定物質(zhì)組成含量的分析方法叫化學(xué)發(fā)光分析方法?；瘜W(xué)發(fā)光分析方法具有靈敏度高、儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、線(xiàn)性范圍寬、分析速度快以及不需外加光源和單色器，沒(méi)有散射光等干擾，容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，但選擇性差。高效液相色譜(HPLC)法由于在各種干擾物質(zhì)中對(duì)分

2、析物具有極高的分離效率已成為最有效的分離方法之一。將具有高靈敏度的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)分析法與具有高分離效率的高效液相色譜(HPLC)分離法相結(jié)合已引起了國(guó)內(nèi)外分析化學(xué)家的極大興趣，成為從上個(gè)世紀(jì)80年代末至今分析化學(xué)研究的一大熱點(diǎn)。毫無(wú)疑問(wèn)，高效液相色譜分離技術(shù)與化學(xué)發(fā)光檢測(cè)法的聯(lián)用將在環(huán)境科學(xué)、生命科學(xué)、藥物科學(xué)及臨床醫(yī)學(xué)上得到愈來(lái)愈廣泛的應(yīng)用。 本文包括兩個(gè)部分。第一部分是綜述，這部分結(jié)合化學(xué)發(fā)光分析法，評(píng)述了近十年高效液相色譜及

3、其與化學(xué)發(fā)光柱后檢測(cè)技術(shù)在藥物分析的應(yīng)用。 第二部分是研究報(bào)告。第一節(jié)是高效液相色譜化學(xué)發(fā)光柱后檢測(cè)技術(shù)在植物中羥基酸的分析應(yīng)用。研究了高錳酸鉀直接氧化酒石酸、蘋(píng)果酸和莽草酸的高效液相色譜-化學(xué)發(fā)光體系的發(fā)光行為，建立了簡(jiǎn)單、靈敏、快捷測(cè)定酒石酸、蘋(píng)果酸和莽草酸的HPLC-CL方法，并應(yīng)用于藥物分析中。第二節(jié)是高效液相色譜化學(xué)發(fā)光柱后檢測(cè)技術(shù)在植物黃酮類(lèi)藥物分析中的應(yīng)用。研究了在堿性介質(zhì)中，銅氨絡(luò)離子的催化作用下，石吊蘭素對(duì)乙腈

4、-H2O2化學(xué)發(fā)光體系有強(qiáng)烈的增敏作用，建立了HPLC-CL方法對(duì)吊石苣苔中石吊蘭素含量的測(cè)定；并研究了在NaOH堿性介質(zhì)中，鐵氰化鉀可以直接氧化蘆丁和槲皮素產(chǎn)生強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光這一現(xiàn)象，建立了測(cè)定蘆丁和槲皮素的HPLC-CL方法。該法簡(jiǎn)單、靈敏度高、選擇性好，可用于同時(shí)檢測(cè)紅花中的蘆丁和槲皮素。 1.HPLC-CL柱后同時(shí)檢測(cè)杉科植物根系中的羥基酸 基于在酸性介質(zhì)中高錳酸鉀直接氧化酒石酸、蘋(píng)果酸和莽草酸產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，而鹽酸

5、氨基脲能夠顯著增強(qiáng)該體系的發(fā)光強(qiáng)度，建立了反相高效液相色譜分離柱后化學(xué)發(fā)光檢測(cè)酒石酸、蘋(píng)果酸和莽草酸的新方法，并成功應(yīng)用于杉科植物中羥基酸的測(cè)定。該方法測(cè)定酒石酸、蘋(píng)果酸和莽草酸的線(xiàn)性范圍分別為8.6×10-7～2.6×10-4g/mL，9.6×10-8～3×10-4g/mL和2.2×10-7～3.5×10-3g/mL，檢出限分別為3.54×10-8g/mL，2.24×10-9g/mL和2.02×10-8g/mL。對(duì)5.0×10-6g/

6、mL酒石酸、蘋(píng)果酸、莽草酸溶液連續(xù)11次測(cè)定的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.4％，0.9％和2.8％。 2.HPLC-CL測(cè)定吊石苣苔中石吊蘭素的含量 在堿性介質(zhì)中，銅氨絡(luò)離子的催化作用下，石吊蘭素對(duì)乙腈-H2O2化學(xué)發(fā)光體系有強(qiáng)烈的增敏作用。在HypersilODS色譜柱上，以乙腈-N,N-二甲基甲酰胺-0.01mol/L草酸(體積比27∶6∶67)為流動(dòng)相的條件下，實(shí)現(xiàn)了對(duì)石吊蘭素的分離測(cè)定，建立了測(cè)定石吊蘭素的方法。發(fā)光強(qiáng)

7、度與石吊蘭素的含量分別在0.02～50μg/mL范圍內(nèi)呈線(xiàn)性關(guān)系。檢出限(3σ)為0.01μg/mL。5次平行測(cè)定的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.46％～1.87％。回收率為99.87％～101.37％。應(yīng)用于吊石苣苔中石吊蘭素的測(cè)定，結(jié)果滿(mǎn)意。 3.反相高效液相色譜化學(xué)發(fā)光法同時(shí)測(cè)定紅花中蘆丁和槲皮素的含量基于在NaOH堿性介質(zhì)中，鐵氰化鉀可以直接氧化蘆丁和槲皮素產(chǎn)生強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光這一現(xiàn)象，在HypersilODS色譜柱上，以乙醇-0.

8、01％醋酸胺(體積比)=2∶1為流動(dòng)相的條件下，實(shí)現(xiàn)了對(duì)蘆丁和槲皮素的分離測(cè)定，建立了測(cè)定蘆丁和槲皮素的方法。該法簡(jiǎn)單、靈敏度高、選擇性好，可用于檢測(cè)紅花中的蘆丁和槲皮素。蘆丁和槲皮素濃度在2.0×10-7g/mL～2.5×10-5g/mL和5.1×10-7g/mL～1.3×10-4g/mL范圍內(nèi)與化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，檢出限(3σ)為1.20×10-8g/mL和2.50×10-8g/mL。對(duì)濃度為5.0×10-6g/mL的蘆丁