黃酮類化合物和抗生素類藥物的高效液相色譜檢測(cè)技術(shù)研究.pdf

1、化學(xué)發(fā)光(chemiluminescence，簡(jiǎn)稱CL)是化學(xué)反應(yīng)的反應(yīng)物或是生成物吸收了反應(yīng)過(guò)程中釋放的化學(xué)能，電子由基態(tài)躍遷至激發(fā)態(tài)，再由激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí)所產(chǎn)生的光輻射，根據(jù)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)在某一時(shí)刻的發(fā)光強(qiáng)度或發(fā)光總量來(lái)確定反應(yīng)中的響應(yīng)組分含量的分析方法叫做化學(xué)發(fā)光分析法。此法具有靈敏度高、線性范圍寬、儀器簡(jiǎn)單、分析快速等優(yōu)點(diǎn)。化學(xué)發(fā)光檢測(cè)亦可與高效的分離手段如：高效液相色譜、毛細(xì)管電泳等聯(lián)用，有效克服化學(xué)發(fā)光分析法固有的選則性差的缺

2、點(diǎn)，成為一種有效的痕量分析方法，在環(huán)境科學(xué)、藥物分析及生命科學(xué)等領(lǐng)域中具有廣泛的應(yīng)用前景。將具有高分離效率的高效液相色譜(HPLC)分離法與具有高靈敏度的化學(xué)發(fā)光分析法相結(jié)合己引起了國(guó)內(nèi)外分析化學(xué)家的極大關(guān)注，成為從上個(gè)世紀(jì)80年代末至今分析化學(xué)研究的一大熱點(diǎn)。毫無(wú)疑問(wèn)，高效液相色譜分離技術(shù)與化學(xué)發(fā)光檢測(cè)法的聯(lián)用將在生物、臨床醫(yī)學(xué)、環(huán)境檢測(cè)、藥物分析等領(lǐng)域得到愈來(lái)愈廣泛的應(yīng)用。 本文包括兩個(gè)部分。第一部分是綜述，這部分結(jié)合化學(xué)發(fā)

3、光分析法，評(píng)述了近十年高效液相色譜及其與化學(xué)發(fā)光柱后檢測(cè)技術(shù)在黃酮類化合物和抗生素類藥物中的應(yīng)用。 第二部分是研究報(bào)告。第一節(jié)是高效液相色譜化學(xué)發(fā)光檢測(cè)法在黃酮類化合物中的研究。詳細(xì)研究了在堿性條件下，鐵氰化鉀氧化魯米諾產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，而漆黃素能增強(qiáng)發(fā)光信號(hào)，從而建立了簡(jiǎn)單、靈敏、快速測(cè)定漆黃素高效液相色譜化學(xué)發(fā)光新方法。 第二節(jié)是高效液相色譜檢測(cè)技術(shù)在抗生素類藥物中的應(yīng)用。研究了在C18反相色譜柱，采用UV-VIS檢測(cè)器

4、，磷酸二氫鉀-磷酸(pH 4.0)緩沖液為流動(dòng)相于211 nm下檢測(cè)新型抗生素中間體S-AMOSA；并研究了FMOC柱前衍生法測(cè)定S-AMOSA，以9-氯甲酸芴甲酯(FMOC)為衍生劑，與S-AMOSA發(fā)生衍生反應(yīng)后，反相高效液相色譜法測(cè)定的方法。本法快速、簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確度高，適用于測(cè)定新型抗生素中間體S-AMOSA。 1.漆黃素的高效液相色譜化學(xué)發(fā)光檢測(cè)法研究 本文研究發(fā)現(xiàn)，漆黃素在堿性條件下能大大增強(qiáng)Luminol-K3

5、Fe(CN)6化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度，基于此，并結(jié)合HPLC分離技術(shù)，建立起漆黃素的HPLC-CL分析新方法。在C18反相鍵合相色譜柱，甲醇為流動(dòng)相的條件下，實(shí)現(xiàn)了對(duì)人體血清中的漆黃素的分離與測(cè)定，方法的線性范圍為7.7× 10-6～9.6×10-4 g/L，相關(guān)系數(shù)為r=0.9998，檢出限為2.7×10-7 g/L，RSD為2.41％(n=11)。實(shí)驗(yàn)表明該法快速、簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確度高，適用于漆黃素的測(cè)定。 2.RP-HPLC法測(cè)定新型抗

6、生素中間體S-AMOSA 建立快速、靈敏的反相高效液相色譜法測(cè)定新型抗生素中間體S-AMOSA的濃度。采用島津SPD-6AV檢測(cè)器，Hypersil C18(150 mm×4.6 mm，5.0μm)色譜柱，磷酸二氫鉀-磷酸(pH 4.0)緩沖液為流動(dòng)相，柱溫為室溫時(shí)，于211nm波長(zhǎng)處以外標(biāo)法測(cè)定。結(jié)果表明S-AMOSA在4.8～120μg/mL的范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=0.9999)。方法回收率為98.0％～103.0％。

7、實(shí)驗(yàn)表明該法簡(jiǎn)便、快速、有效，重現(xiàn)性好，首次用于抗生素中間體S-AMOSA的測(cè)定，取得了很好的結(jié)果。 3.FMOC柱前衍生-高效液相色譜法測(cè)定新型抗生素中間體S-AMOSA 建立FMOC柱前衍生測(cè)定新型抗生素中間體S-AMOSA的高效液相色譜方法。以9-氯甲酸芴甲酯(FMOC)為衍生劑，與S-AMOSA發(fā)生衍生反應(yīng)后，反相高效液相色譜法測(cè)定。以甲醇-水為流動(dòng)相，C18柱為分離柱，紫外可見檢測(cè)器(263 nm)檢測(cè)。結(jié)果表

8、明S-AMOSA在0.01125～0.36 g/L的范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=0.9996)。方法回收率為97.78％～102.33％。實(shí)驗(yàn)表明該法快速、簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確度高，適用于新型抗生素中間體S-AMOSA的測(cè)定。 4.RP-HPLC法分離測(cè)定動(dòng)物肝臟中多種維生素的含量 建立了一種同時(shí)測(cè)定4種水溶性維生素的高效液相色譜方法。采用Shimadzu VP-ODS(150mm×4.6 mm i.d.，5.0 μm)色譜柱，以