傳統(tǒng)發(fā)酵牦牛酸乳中改善腸道功能乳酸菌的篩選與評價.pdf

1、傳統(tǒng)發(fā)酵牦牛酸乳是我國青藏高原地區(qū)的傳統(tǒng)特色美食之一，經(jīng)過自然長期的選擇和馴化使其蘊含豐富的優(yōu)勢乳酸菌資源。但是，由于傳統(tǒng)工藝不斷被新技術所替代，使得傳統(tǒng)發(fā)酵牦牛酸乳中寶貴的乳酸菌資源逐漸消失。本研究以四川省紅原縣牧民家中自制的傳統(tǒng)發(fā)酵牦牛酸乳為對象，收集傳統(tǒng)發(fā)酵牦牛酸乳中的乳酸菌資源并對收集到的乳酸桿菌進行抗性篩選，確定出具有最佳抗性的乳酸桿菌，研究其對結(jié)腸炎和便秘的預防效果，為我國傳統(tǒng)發(fā)酵牦牛酸乳中乳酸菌資源的發(fā)掘、保藏及改善腸道功

2、能乳酸菌的研究奠定基礎。主要研究方法及結(jié)果如下：
　?。?）傳統(tǒng)發(fā)酵牦牛酸乳中乳酸菌的篩選與抗性評價
　　基于純培養(yǎng)技術篩選傳統(tǒng)發(fā)酵牦牛酸乳中的乳酸菌，并采用16S rDNA序列和系統(tǒng)發(fā)育樹分析所得乳酸菌的種屬關系，再通過pH3.0人工胃液和0.3％膽鹽中耐受性實驗對所得乳酸桿菌進行篩選，確定最佳抗性菌株，用于后續(xù)實驗。結(jié)果表明，12份傳統(tǒng)發(fā)酵牦牛酸乳中共分離出43株乳酸菌，其中干酪乳桿菌8株、發(fā)酵乳桿菌5株、植物乳桿菌4株

3、、耐久腸球菌9株、屎腸球菌7株、腸膜明串珠菌腸膜亞種4株、乳酸乳球菌乳酸亞種3株、乳酸乳球菌乳脂亞種2株、假腸膜明串珠菌1株，16S rDNA序列和系統(tǒng)發(fā)育樹分析結(jié)果一致；此外，耐久腸球菌、干酪乳桿菌和屎腸球菌為傳統(tǒng)發(fā)酵牦牛酸乳中的優(yōu)勢菌株。耐受性實驗表明，菌株編號為 MRSHY12-3的耐受能力最強， pH3.0人工胃液處理后的存活率高達103.73%，0.3%膽鹽中的生長效率為21.62%。16S rDNA序列和系統(tǒng)發(fā)育樹分析表明其

4、為 Lactobacillus fermentum，加之樣品采自紅原（ HY），因此將其命名為Lactobacillus fermentum HY01。
　　（2）Lactobacillus fermentum HY01對結(jié)腸炎的預防作用
　　通過用不同濃度的Lactobacillus fermentum HY01干預DSS誘導的結(jié)腸炎小鼠（低濃度為109 CFU/kg·BW、高濃度為1010 CFU/kg·BW），以結(jié)腸炎

5、小鼠的結(jié)腸長度、結(jié)腸重量與長度的比值、結(jié)腸病理學變化、血清中促炎因子IL-6、IL-12、IFN-γ和TNF-α的水平和炎癥相關基因IκBα、NF-κB p65、iNOS和COX-2的蛋白水平為指標，評價Lactobacillus fermentum HY01對小鼠結(jié)腸炎的預防效果。結(jié)果表明，與模型組相比，Lactobacillus fermentum HY01處理能夠有效抑制結(jié)腸縮短和降低結(jié)腸重量與長度的比值；減少結(jié)腸水腫、炎性細胞浸

6、潤、粘膜損傷和明顯降低促炎因子 IL-6、IL-12、IFN-γ和 TNF-α的水平。此外，在蛋白水平上，Lactobacillus fermentum HY01處理能有效防止 IκBα降解，抑制 NF-κB p65蛋白的磷酸化和iNOS和 COX-2蛋白水平的提高，表現(xiàn)出很好的抗炎作用。但是，不同濃度處理間有所差異，高濃度處理對預防DSS誘導小鼠結(jié)腸炎的效果最顯著。
　?。?）Lactobacillus fermentum HY

7、01對便秘的預防作用
　　通過用不同濃度的Lactobacillus fermentum HY01干預活性炭冰水誘導的便秘小鼠（低濃度為108 CFU/kg·BW、高濃度為109 CFU/kg·BW），以便秘小鼠的的體重變化、糞便含水率、小腸活性炭推進率、初次排出黑便的時間、小腸病理學觀察和血清中 MTL、GT、ET、AchE、SP、SST和 VIP的水平為評價指標，評價Lactobacillus fermentum HY01對小

8、鼠便秘的預防效果。結(jié)果表明，與模型組相比， Lactobacillus fermentum HY01處理能夠顯著增加便秘小鼠的糞便含水率；提高小腸活性炭推進率和縮短便秘小鼠的初次排出黑便的時間；減輕小腸絨毛的損傷程度，從而促進腸道蠕動。此外，在血清水平上，Lactobacillus fermentum HY01處理能夠提高血清中MTL、GT、ET、AchE、SP、VIP的水平和降低血清中SST的水平，從而預防便秘。但是，不同濃度處理間有