傳統(tǒng)乳制品中產(chǎn)γ-氨基丁酸乳酸菌的篩選、鑒定及發(fā)酵條件優(yōu)化.pdf

1、采用薄層層析法和高效液相色譜法，從分離自傳統(tǒng)發(fā)酵乳制品中的180株乳酸菌中篩選得到9株具有生成γ-氨基丁酸能力的菌株，分別為WHl1-1(2.477g/L)、M10-4-3(1.405g/L)、WZ20-2(1.132g/L)、M11-3(1.115g/L)、WZ1-2(1.006g/L)、S1-1(0.581g/L)、M5-1-1(0.310g/L)、M11-2-1(0.225g/L)和M11-1(0.211g/L)。 經(jīng)傳統(tǒng)

2、的形態(tài)學(xué)、生理生化特性及化學(xué)特性等分類(lèi)方法，確定WHl1-1、M10-4-3、M1-2、M11-3和WZ20-2等5株菌為乳酸乳球菌乳酸亞種(L.lactis subspLactis)，S1-1、M5-1-l和M11-2-1等3株為植物乳桿菌(L.plantarum)，M11-1為短乳桿菌(L.salivarius)。 在傳統(tǒng)鑒定的基礎(chǔ)上，利用分子生物學(xué)的方法對(duì)菌株WHl1-1和M10-4-3進(jìn)行了16S rDNA基因序列的擴(kuò)增

3、與測(cè)序，并將結(jié)果與乳酸球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的16S rRNA/DNA基因序列作同源性分析，建立系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。結(jié)果表明，菌株WHl1-1與標(biāo)準(zhǔn)菌株三。lactis subsp Lactis NCDO604的同源性為99.1％；M10-4-3與標(biāo)準(zhǔn)菌株L.lactis subspLactis NCD0604的同源性為100％。結(jié)合生理生化等傳統(tǒng)鑒定結(jié)果及系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，可將菌株WHl1-1和M10-4-3均判定為L(zhǎng).lactis subsp Lactis

4、。 試驗(yàn)探討了培養(yǎng)條件(接種量、起始pH值、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間)、培養(yǎng)基組成以及外源谷氨酸鈉濃度對(duì)Llactis subsp Lact/s WHl1-1生成γ-氨基丁酸能力的影響。通過(guò)單因素試驗(yàn)、響應(yīng)面試驗(yàn)及正交試驗(yàn)得出其生成γ-氨基丁酸的最佳培養(yǎng)條件為:接種量4.5％，培養(yǎng)時(shí)間96h，培養(yǎng)溫度為32℃，初始pH值為6.0；最佳培養(yǎng)基組成為:復(fù)合碳源質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2％(葡萄糖與糊精質(zhì)量比為3:1)，復(fù)合氮源中蛋白胨與酵母膏的質(zhì)量比為