SERS及其結(jié)合免疫技術(shù)檢測雙酚A和丙肝抗體的方法建立與評價.pdf

1、由于表面增強拉曼光譜技術(shù)(SERS)的高靈敏檢測水平和“指紋”圖譜的特點，使得SERS技術(shù)在環(huán)境檢測和醫(yī)學(xué)早期診斷等領(lǐng)域有著非常廣泛的應(yīng)用。本論文基于金、銀納米粒子作為SERS活性基底，并結(jié)合現(xiàn)代免疫分析技術(shù)，建立了對環(huán)境有機小分子污染物雙酚A(BPA)和丙型肝炎病毒抗體(HCV-Ab)的高靈敏、高選擇性的快速分析方法。
　　論文主要開展以下幾個方面的研究工作:
　　第一部分基于納米銀顆粒作為SERS活性增強基底，建立了對B

2、PA的SERS免標記檢測方法。
　　(1)以納米銀(AgNPs)溶膠聚集體作為SERS基底，以NaC1作為絮凝劑，建立了基于AgNPs聚集體的SERS免標記技術(shù)檢測BPA的方法。通過優(yōu)化實驗條件，確定了銀溶膠pH值為3，添加0.4 mol/L NaCl溶液作為絮凝劑，當BPA溶液與銀溶膠體積比為1∶1時，AgNPs聚集體對BPA的SERS檢測限為0.5μg/mL。該方法操作簡單，能夠?qū)崿F(xiàn)對BPA的快速定性檢測。
　　(2)構(gòu)

3、建了AgNPs負載的微孔濾膜作為固相SERS增強基底，該基底具有良好的均勻性、穩(wěn)定性和檢測靈敏度。以巰基乙胺鹽酸鹽(Cys)作為鏈接劑，通過靜電吸附作用將BPA富集濃縮至AgNPs負載的濾膜SERS基底表面，建立了Cys輔助SERS技術(shù)檢測BPA的高靈敏分析方法。結(jié)果表明，10 mM的Cys在pH為3的條件下預(yù)先與BPA靜電結(jié)合，再通過-SH吸附至AgNPs表面，從而達到了SERS免標記技術(shù)檢測BPA的目的。對BPA的最低檢測限達到0.

4、005 ng/mL，加標檢測在1-10 ng/mL范圍內(nèi)具有良好的回收率，回收率為90.2％-121.1％。該法將AgNPs顆粒固定在濾膜表面得到固相SERS基底，成本低廉，制備簡便，方便攜帶，能用于水中超痕量BPA的高通量分析檢測。
　　第二部分主要基于SERS標記（聯(lián)合）免疫分析技術(shù)建立檢測BPA的新方法。
　　(1)基于SERS標記免疫分析方法（SERSIA）的“三明治”結(jié)構(gòu)理論模型，以金/銀核殼復(fù)合納米粒子(Au/A

5、g NPs)作為SERS增強基底，建立了檢測BPA的高靈敏分析方法。結(jié)果表明，該法檢測BPA的線性范圍為10μg/mL-1 ng/mL，最低檢測限為1 ng/mL，對BPA的結(jié)構(gòu)類似物不存在交叉反應(yīng)，對實際水樣的添加回收率為78％-123％。
　　(2)基于SRES聯(lián)合膠體金免疫層析法(SERS-GICA)建立了檢測BPA的快速、定量分析方法。以20 nm左右的膠體金作為示蹤物和SERS增強基底，組裝SERS-GICA試紙條，經(jīng)過

6、15 min的免疫層析反應(yīng)，檢測試紙條NC膜T線區(qū)域拉曼探針分子的SERS信號，從而達到對BPA的快速定量檢測。該方法對BPA的最低檢出限為0.1ng/mL，比基于該試紙條的目測法靈敏度高300倍，該方法特別適合于環(huán)境小分子污染物的現(xiàn)場、快速、高靈敏分析檢測。
　　第三部分基于SERS聯(lián)合酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)建立了檢測HCV-Ab的超高靈敏度分析方法。以雙抗原夾心免疫法為構(gòu)建原理，以辣根過氧化物酶(HRP)對TMB的催化產(chǎn)

7、物為檢測對象，以AgNPs為SERS增強基底，研究酶促產(chǎn)物的SERS信號與HCV-Ab的濃度之間的關(guān)系。在最佳實驗條件下，該SERS-ELISA法對HCV-Ab試劑盒檢測的線性范圍為0.625～10 pg/mL，檢測靈敏度高達0.625 pg/mL，高于傳統(tǒng)ELISA法的檢測靈敏度2.5 pg/mL。該方法與其他SERS標記免疫檢測技術(shù)相比，靈敏度更高，通過直接檢測反應(yīng)產(chǎn)物的SERS信號，而不引入其他的拉曼探針分子，操作更為簡便，對環(huán)境