鏈格孢酚多克隆抗體的制備及其免疫分析方法的研究.pdf

1、鏈格孢酚（AOH）屬于真菌毒素，是鏈格孢霉產(chǎn)生的有毒次級代謝產(chǎn)物之一，具有致癌、致畸和致突變作用。近年來，在大量谷物、果蔬及其制品的真菌毒素含量的檢測中均發(fā)現(xiàn)了鏈格孢酚的殘留，鏈格孢酚已經(jīng)嚴(yán)重危害到人類的健康，因此加強(qiáng)對農(nóng)產(chǎn)品中鏈格孢酚的檢測監(jiān)控十分重要。目前鏈格孢酚的分析方法主要是液相-質(zhì)譜法，該方法準(zhǔn)確可靠，常作為確證方法，但存在設(shè)備昂貴、需要專業(yè)人員、前處理繁瑣耗時(shí)、樣品通量低等不足。免疫檢測技術(shù)具有靈敏、快速、速高通量等特點(diǎn)，可

2、與色譜、質(zhì)譜等儀器確證技術(shù)搭配應(yīng)對量大面寬的農(nóng)產(chǎn)品、食品安全快速篩查需求，近年來已成為研究熱點(diǎn)。本文以鏈格孢酚為對象，設(shè)計(jì)合成了多個(gè)半抗原并制備了AOH多克隆抗體，建立了鏈格孢酚間接競爭酶聯(lián)免疫分析法和間接競爭化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫分析法，研究內(nèi)容如下：
　?。?）設(shè)計(jì)并合成了AOH毒素及4種相關(guān)的半抗原，通過活潑酯法、N,N-羰基二咪唑法、曼尼希法偶聯(lián)載體蛋白獲得四種免疫原 AH1-BSA、AH2-BSA、AM-BSA、AC-BSA，

3、經(jīng)鑒定，抗血清AH2、AC均非為特異性吸附，抗血清AH1、AM的效價(jià)分別為1：32000和1:128000，對1μg/mL的AOH毒素抑制率為89.5％，37.4%，基于此制備了針對AOH毒素的高特異性多克隆抗體。
　　（2）建立了AOH間接競爭ELISA（AOH-icELISA），方法的檢測限為0.31μg/L，IC50為2.62μg/L，線性檢測范圍為0.46~15.08μg/L；與其余鏈格孢酚毒素及結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)率均<0

4、.1%，方法特異性好，批內(nèi)批間的變異系數(shù)均<15%，方法精密度高，谷物、果汁樣品經(jīng)前處理優(yōu)化和倍比稀釋法消除基質(zhì)效應(yīng)，平均添加回收率在77.20~115.37%之間，表明方法適用于實(shí)際樣品的檢測。
　　（3）建立了AOH間接競爭CLEIA（AOH-icCLEIA），方法的檢測限為0.068μg/L，IC50為0.37μg/L，線性檢測范圍為0.11~1.23μg/L；與其余鏈格孢酚毒素及結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)率均<0.1%，方法特異性