葡萄病毒A多克隆抗體的制備及檢測效果分析.pdf

1、葡萄病毒A（Grapevine virus A，GVA）是葡萄上普遍發(fā)生的一種病毒，在世界各地的葡萄種植園區(qū)都有分布，侵染葡萄后在木質(zhì)部上形成莖溝槽，造成產(chǎn)量下降，品質(zhì)降低，成熟延遲，樹勢衰退，經(jīng)濟(jì)壽命縮短。由于目前尚無理想的化學(xué)藥劑來防治病毒病，因此栽培無病毒苗木是防治病毒病的有效途徑，而病毒檢測能夠為培育和繁殖無病毒苗木提供良好的技術(shù)支撐。本研究主要是利用意大利提供的GVA毒源材料在本氏煙上進(jìn)行擴(kuò)繁，進(jìn)而利用擴(kuò)繁得到的材料提取病毒粒

2、子，最后將提取的病毒粒子通過免疫大耳白兔獲得葡萄病毒A多克隆抗血清。
　　 取得的主要研究成果如下：
　　 1、通過汁液摩擦接種法將GVA毒源材料接種到草本寄主本氏煙上，然后利用活化了的毒源材料進(jìn)行轉(zhuǎn)接，轉(zhuǎn)接5－7d后可在本氏煙葉片上產(chǎn)生明顯的褪綠、皺縮、畸形等癥狀。利用擴(kuò)繁得到的材料提取病毒粒子，采用的方法主要是差速離心結(jié)合蔗糖密度梯度離心，將病毒提純液經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測后，結(jié)果表明其在23KDa處產(chǎn)生明顯的蛋

3、白質(zhì)分子條帶。
　　 2、將得到的病毒提純液經(jīng)磷鎢酸負(fù)染后進(jìn)行電鏡觀察，結(jié)果表明在電鏡下可看到大量線狀病毒粒子的存在，大小約為800nm。使用市售GVA的多克隆抗體對病毒提純液進(jìn)行Western blot分析，結(jié)果表明在23KDa處市售GVA的多克隆抗體與病毒提純液產(chǎn)生信號較強(qiáng)的特異性反應(yīng)。通過將得到的病毒提純液免疫大耳白兔，獲得了效價為1：6400的多克隆抗血清。
　　 3、對所制備的多克隆抗血清進(jìn)行Western b