檢測丙二醛的熒光探針的構(gòu)建及應用研究.pdf

1、丙二醛，是脂質(zhì)過氧化的標志性產(chǎn)物之一，在生物體內(nèi)的含量可以直接反映生物體被氧化的程度或損傷的程度，很多疾病的檢測都將其含量作為判斷的標準之一。到目前，已有很多的檢測方法應用在丙二醛的檢測中，但這些檢測方法大多由于檢測條件苛刻而僅能應用在體外樣品中的丙二醛檢測，在檢測過程中還需要依賴于高效的分離手段，才能獲得良好的檢測效果。而利用小分子熒探針對丙二醛進行檢測則可以很好的避免上述問題，并且分子熒光探針與熒光成像技術(shù)的連用可以直接監(jiān)測細胞及活

2、體內(nèi)的丙二醛。但選擇性檢測丙二醛的熒光探針的發(fā)展情況并不理想。因此設計合成針對檢測丙二醛的熒光探針是非常有必要的。
　　丙二醛分子有兩個醛基，可以與肼中的兩個氨基依次發(fā)生反應，生成五元環(huán)狀的吡唑類化合物。我們利用肼與丙二醛的反應的特異性，產(chǎn)物結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，設計合成了兩種高選擇性檢測丙二醛的熒光探針。本論文分為三章，主要內(nèi)容如下:
　　第一章 緒論。主要介紹檢測醛類化合物的熒光衍生化試劑，以及熒光探針的發(fā)展。在此基礎(chǔ)上提出的本

3、論文的思路。
　　第二章 本章中，我們構(gòu)建了一種羅丹明酰肼類熒光探針RB4-1，有機的將苯酰肼與丙二醛的專一反應和羅丹明螺酰胺類化合物的螺環(huán)開環(huán)反應結(jié)合起來，實現(xiàn)了對細胞內(nèi)丙二醛的專一檢測。探針RB4-1利用苯酰肼作為識別基團，在弱酸性環(huán)境下與丙二醛反應生成羅丹明-吡唑類化合物，探針分子內(nèi)的螺環(huán)結(jié)構(gòu)被打破，羅丹明的大共軛π鍵體系恢復，紫外吸收在575 nm處與熒光強度在600 nm處均顯著增強。探針RB4-1在檢測丙二醛的實驗條件

4、下，對常見的金屬離子、其他小分子醛類以及生物體內(nèi)的常見的物質(zhì)均無響應，對丙二醛的選擇性非常好。應用該探針分子，我們成功實現(xiàn)了對細胞內(nèi)丙二醛的檢測，測試條件改變后還可以應用于體外樣品中丙二醛的檢測，表明該探針分子可以應用于不同生物體系中丙二醛的檢測，具有良好的應用前景。
　　第三章 本章中，我們以4-肼-7-硝基-苯并呋咱(NBDH)作為熒光探針實現(xiàn)了對丙二醛高靈敏高選擇性的檢測。探針NBDH以苯肼作為識別基團，與丙二醛反應后生成化

5、合物NBD-P1，NBD-P1的最大吸收波長在474 nm處，相比NBDH紅移100 nm，摩爾吸光系數(shù)為3.09×104 L·mol-1·cm-1，在水中的熒光量子產(chǎn)率高達0.105，本次實驗利用NBD-P1這些優(yōu)異的光物理性質(zhì)以及苯肼與丙二醛反應的特異性，通過選擇合適的測試條件，僅利用熒光分析法實現(xiàn)了對丙二醛的檢測，檢出限為7.2 nM。我們已經(jīng)成功的將NBDH應用于胎牛血清環(huán)境中的丙二醛檢測，檢測的準確度可達到98％，表明NBDH