EcN莢膜多糖合成基因kfiA的功能研究.pdf

1、大腸桿菌Nissle1917(EcN)是一種腸道益生菌，血清型為O6∶K5∶H1。在腸道中，EcN可以通過胞外的莢膜多糖抑制病原菌的定殖。此外，EcN莢膜多糖的主要成分是抗凝血藥物肝素的前體物質(zhì)，因此研究EcN莢膜多糖的合成途徑具有重要的意義。
　　本課題主要利用分子生物學(xué)技術(shù)，研究EcN菌株的莢膜多糖合成基因kfiA的功能，分析莢膜多糖的生物合成機(jī)理。提取、純化EcN莢膜多糖，并通過1H核磁共振檢測。確定了莢膜多糖的特征峰的化學(xué)

2、位移約為2ppm。其次，通過λ-red重組系統(tǒng)成功構(gòu)建kfiA突變株，對突變株的生長曲線進(jìn)行測定發(fā)現(xiàn)kfiA基因的缺失并未明顯影響菌體的生長。利用1H核磁共振檢測EcN和EcN△kfiA的莢膜多糖，發(fā)現(xiàn)kfiA缺失株不能合成莢膜多糖。
　　為了對該結(jié)論進(jìn)行進(jìn)一步驗(yàn)證，我們又對kfiA突變株進(jìn)行基因回補(bǔ)。再次利用核磁共振檢測EcN、EcN△kfiA、EcN△kfiAIntΦ80∷pAH162-KpsMP-kfiA以及EcN△kfiA