炭疽桿菌莢膜表面寡糖抗原的合成研究.pdf

1、炭疽是由炭疽桿菌引起的致死性人畜共患傳染病。據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)計(jì)，全年平均炭疽發(fā)病人數(shù)為20000-100000例。同時(shí)，炭疽孢子由于具有重量輕、少量吸入即可致命的特點(diǎn)，可以制成生物武器，用于戰(zhàn)爭(zhēng)以及生物恐怖襲擊。炭疽感染早期治療首選抗生素，但對(duì)于中后期的炭疽毒血癥治療價(jià)值極其有限。而且，抗生素的廣泛使用所致的耐藥菌株不斷出現(xiàn)也給治療帶來了前所未有的挑戰(zhàn)。因此，做好炭疽感染的預(yù)防措施非常重要。而在各種預(yù)防手段中，免疫接種是防控人

2、類傳染病最有效且經(jīng)濟(jì)的方法。傳統(tǒng)的炭疽疫苗主要有減毒活炭疽桿菌疫苗，AVA（Anthrax Vaccine Absorbed）以及AVP(Anthrax VaccinePrecipitated)疫苗。這些疫苗都存在成分不明確、產(chǎn)量不穩(wěn)定，免疫效果差、劑量難以掌控和不良反應(yīng)發(fā)生率高等缺陷。因此，研發(fā)新型炭疽疫苗具有很大的臨床意義及市場(chǎng)需求。
　　炭疽感染依賴于炭疽桿菌的兩大毒力因子:炭疽毒素以及莢膜。在炭疽感染的發(fā)生與發(fā)展過程中，炭

3、疽莢膜都發(fā)揮著決定性作用，如屏障作用，粘附作用，耐藥作用，抵抗極端環(huán)境威脅等。因此，炭疽莢膜表面的多種特異性結(jié)構(gòu)便成為了炭疽診斷與疫苗研發(fā)的熱點(diǎn)靶標(biāo)。近年炭疽莢膜表面一個(gè)特異性寡糖分子結(jié)構(gòu)的闡明，又為發(fā)展炭疽疫苗提供了新的靶標(biāo)抗原和分子基礎(chǔ)。然而，單純寡糖疫苗免疫原性較差，T-細(xì)胞非依賴性的抗體免疫反應(yīng)發(fā)生率高。將糖抗原和載體蛋白結(jié)合，不僅可以提高糖類抗原的免疫原性還能夠?qū)⑺鼈冝D(zhuǎn)化成T-細(xì)胞依賴性的免疫抗原。近年來，具有免疫原性的糖蛋白

4、綴合物己逐漸成為新型疫苗的研發(fā)熱點(diǎn)，目前已有數(shù)十種糖蛋白疫苗用于臨床。
　　本課題以常見的葡萄糖，半乳糖和氨基葡萄糖鹽酸鹽為起始原料，采用乙酰基、芐基和對(duì)甲苯氧基等保護(hù)策略得到:單糖供體3、11和17及單糖受體5和7。經(jīng)過連續(xù)的硫苷糖基化得到了四個(gè)炭疽寡糖化合物片段，包括:氨乙基-β-D-吡喃半乳糖基-(α1→3）-2-脫氧-2-乙酰氨基-β-D-吡喃葡萄糖苷(23)，氨乙基-β-D-吡喃半乳糖基-(α1→6）-（β-D-吡喃半乳

5、糖基）-(α1→3）-2-脫氧-2-乙酰氨基-β-D-吡喃葡萄糖苷(28)，氨乙基-2-脫氧-2-乙酰氨基-β-吡喃葡萄糖基-(α1→6）-（β-D-吡喃半乳糖基）-(α1→3）-2-脫氧-2-乙酰氨基-β-D-吡喃葡萄糖苷(31)，氨乙基β-D-吡喃葡萄糖基-(β1→4)-（β-D-吡喃半乳糖基）(α1→3）-2-脫氧-2-乙酰氨基β-D-吡喃葡萄糖苷(34)。而后，采用戊二醛法將上述寡糖片段偶聯(lián)至血藍(lán)蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(B