大腸桿菌O36和多噬伯克霍爾德菌C1576相關(guān)寡糖抗原的合成.pdf

1、糖類是一類具有鮮明結(jié)構(gòu)特點的生物分子，主要以糖綴合物的形式存在，與蛋白質(zhì)和脂類綴合分別形成糖蛋白和糖脂。聚糖和蛋白質(zhì)結(jié)合時根據(jù)其綴合方式的差異可以分為N-聚糖和O-聚糖。由于在生物體內(nèi)的糖綴合物中有生物活性的寡糖的含量較少，且其分離純化產(chǎn)率較低，無法滿足生物學(xué)研究的需求，因而寡糖的合成有著重要的意義。
　　利用酶的專一性進行生物法合成是一種有效的寡糖合成手段，現(xiàn)階段可利用的酶主要有糖苷酶和糖基轉(zhuǎn)移酶。糖苷酶主要是促進糖苷鍵的水解，

2、但若糖基供體的濃度過高時，其也可以催化反應(yīng)逆向進行;而糖基轉(zhuǎn)移酶在催化糖鏈的形成過程中，將核苷化的單糖當(dāng)做反應(yīng)底物，具有高選擇性、通常情況下產(chǎn)率較高。
　　寡糖化學(xué)合成法在收率重復(fù)性等方面，均比傳統(tǒng)提取分離法表現(xiàn)出了明顯優(yōu)勢。由于糖環(huán)上各羥基活性差異并不太大，為實現(xiàn)糖苷鍵構(gòu)型及位點的選擇性，需要借助合適的保護基團，并且要將糖基供體的異頭羥基活化，引入易于離去的取代基來合成所需要的糖苷鍵構(gòu)型。
　　糖抗原只能和B細胞作用，無法

3、誘導(dǎo)T細胞應(yīng)答，引起無免疫記憶的IgM抗體應(yīng)答。當(dāng)糖抗原與載體蛋白（如TT、KLH、CRM197）等連接后，可以使糖抗原轉(zhuǎn)化為T細胞依賴的抗原，這也是目前糖蛋白綴合物疫苗研究最為廣泛存在的形式。由于天然細菌體內(nèi)的糖鏈長短不同，影響著糖蛋白綴合物的均一性，而糖鏈的長度影響著疫苗的免疫效果，所以通過化學(xué)合成方法可以獲得結(jié)構(gòu)單一穩(wěn)定的化合物，能夠更有效地證實其免疫活性的高低。
　　本論文內(nèi)容主要介紹大腸桿菌O36的脂多糖(LPS) O-

4、抗原以及多噬伯克霍爾德菌C1576菌株的脂多糖(LPS)與胞外多糖(EPS)的重復(fù)片段及其衍生物的化學(xué)合成。主要包括以下四章內(nèi)容:
　　第一章簡要介紹了細菌表面的脂多糖與胞外多糖的結(jié)構(gòu)和功能，特別是其在糖類疫苗研發(fā)方面的應(yīng)用以及糖疫苗的發(fā)展現(xiàn)狀。
　　第二章是有關(guān)大腸桿菌O36 LPS的O-抗原五糖重復(fù)片段的合成。它是由D-氨基葡萄糖、L-鼠李糖、L-巖藻糖以及D-甘露糖組成的五糖重復(fù)片段。根據(jù)目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)，我們設(shè)計了三

5、糖模塊3和二糖模塊2,擬采取“3+2”的合成策略來合成全保護的五糖目標(biāo)化合物。三糖供體3先由異丙硫苷供體8和甘露糖受體9組裝合成二糖受體片段7,再和鼠李糖三氯乙酰亞胺酯供體6進行糖苷化反應(yīng)獲得;而二糖受體模塊2是由巖藻糖供體4和氨基葡萄糖受體5偶聯(lián)組裝合成獲得?；衔?和化合物3在TMSOTf的催化作用下偶聯(lián)即可得到目標(biāo)化合物1。
　　第三章是有關(guān)多噬伯克霍爾德菌C1576菌株LPS的O-抗原三糖重復(fù)片段及其二聚體、三聚體的合成。

6、根據(jù)目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)，我們設(shè)計了三糖模塊30，采取“3+3”和“3+3+3”的合成策略來合成目標(biāo)化合物27-29。之所以選擇這一三糖模塊作為重要的中間體，是因為它以硫苷為還原端可以作為糖基供體，除此之外，當(dāng)它和3-疊氮基-1-丙醇15偶聯(lián)，當(dāng)脫除C-2"位乙?；螅挚梢宰鳛槿鞘荏w來進一步合成目標(biāo)化合物六糖和九糖。三糖硫苷供體30可由D-鼠李糖三氯乙酰亞胺酯供體32和硫苷單糖受體33以及甘露糖三氯乙酰亞胺酯供體31進行糖苷化反應(yīng)得到。

7、將全保護的化合物50、52、54脫除?；?、芐基等保護基團，即可獲得還原端糖基異頭碳上均連接有一個自由丙基氨基的目標(biāo)化合物27-29。
　　第四章是有關(guān)多噬伯克霍爾德菌C1576菌株EPS四糖重復(fù)片段的合成。根據(jù)目標(biāo)化合物的結(jié)構(gòu)，我們設(shè)計了甘露糖二糖供體模塊56和鼠李糖二糖受體57,采取“2+2”的合成策略來合成目標(biāo)化合物55。將C-3位含有甲基的D-鼠李糖三氯乙酰亞胺酯供體58和D-鼠李糖受體59偶聯(lián)得到化合物71,進而將其與3-