不同血清分型鏈球菌莢膜多糖的提取分離與結(jié)構(gòu)組成初步分析.pdf

1、鏈球菌為兼性厭氧的革蘭氏染色陽性菌,其可引起豬及人類的多種疾病。莢膜多糖有抗吞噬活性,在豬鏈球菌致病過程中發(fā)揮重要作用,因此,不少學(xué)者正努力探索預(yù)防這些疾病的途徑,以莢膜多糖為基礎(chǔ)的疫苗研制工作正在展開。本文對(duì)1型、1／2型和14型豬鏈球菌莢膜多糖進(jìn)行提取分離,通過多種提取和分離技術(shù)及免疫檢測(cè)手段,獲得了成分較為均一的具有免疫活性的各型莢膜多糖組分T1、T1／2和T14,然后對(duì)各個(gè)組分糖含量、蛋白含量、唾液酸含量、單糖組成、相對(duì)分子質(zhì)量

2、等理化性質(zhì)進(jìn)行分析,并采用多種化學(xué)分析及現(xiàn)代儀器分析技術(shù),初步確定了1／2型和14型豬鏈球菌莢膜多糖化學(xué)結(jié)構(gòu)。
　　 采用不同酶解法和鈣鹽分步沉淀法依次對(duì)靜置培養(yǎng)的1型、1／2型和14型豬鏈球菌菌體進(jìn)行提取,對(duì)提取得到的莢膜粗多糖組分CPS1、CPS1／2和CPS14分別進(jìn)行了初步的理化性質(zhì)研究。對(duì)CPS1、CPS1／2和CPS14分別采用Q Sepharose FastFlow離子交換層析柱和Sepharcryl S-300凝

3、膠滲透層析柱進(jìn)一步純化,其中得到的組分T1、T1／2和T14經(jīng)斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Dot-ELISA)證明分別為1型、1／2型和14型豬鏈球菌莢膜多糖。經(jīng)測(cè)定莢膜多糖T1、T1／2和T14相對(duì)分子質(zhì)量分別為262.5 kD、512.7 kD和487.4 kD,糖含量分別為29.3％、96.6％和53.5％,蛋白含量分別為3.1％、4_3％和0.5％,唾液酸含量之比分別為1:2.67:0.19。經(jīng)PMP柱前衍生高效液相色譜法分析,T1單

4、糖組成摩爾數(shù)比為Gal:GlcN:Glc:Rha:GalN=1:1.46:0.79:2.13:0.27,T1／2單糖組成摩爾數(shù)比為Gal:GlcN:GIc:Rha:GalN=1:0.63:0.6:0.43:0.56,T14單糖組成摩爾數(shù)比為Gal:GleN:GIc:Rha=1:0.46:0.34:0.08。在對(duì)各型莢膜多糖組分基本理化性質(zhì)進(jìn)行研究的基礎(chǔ)上,對(duì)組分T1／2和T14進(jìn)行紅外光譜和核磁共振波譜分析,對(duì)其相應(yīng)脫唾液酸后的產(chǎn)物DT

5、1／2和DT14進(jìn)行核磁共振波譜分析和氣相質(zhì)譜分析,通過多種化學(xué)分析方法和現(xiàn)代儀器分析技術(shù)對(duì)莢膜多糖T1／2和T14的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究。結(jié)果表明,T1／2主要含有→3,4)Gal-(1→,Gal-(1→,→3,4)Rha-(1→,→3)Glc-(1→這四種結(jié)構(gòu)單元,同時(shí)含有少量的→2,3)Rha-(1→,→4)Rha-(1→等分支點(diǎn)；T14主要含有Gal-(1→,→3,6)Gal-(1→,→3)Glc-(1→這三種結(jié)構(gòu)單元,同時(shí)

6、含有少量的→2,4)Rha-(1→分支點(diǎn)。另外,本實(shí)驗(yàn)中還得到T1-1、T1／2-B、T14-B和T14-C多糖組分,并對(duì)其糖含量、蛋白含量、唾液酸含量、單糖組成、相對(duì)分子質(zhì)量等理化性質(zhì)進(jìn)行了研究。
　　 目前對(duì)豬鏈球菌莢膜多糖的研究主要集中在血清2型上,對(duì)其它具有致病性的1型、1／2型和14型豬鏈球菌的研究并不多,特別是對(duì)其分離純化和結(jié)構(gòu)分析方面的研究報(bào)道尚不多見。本文對(duì)1型、1／2型和14型豬鏈球菌莢膜多糖(T1、T1／2和