副雞禽桿菌莢膜多糖提取分析及免疫原性研究.pdf

1、副雞禽桿菌(Apg)可引起雞傳染性鼻炎，該病是以雞頭和眼瞼腫脹為主要癥狀的急性呼吸道傳染病，主要引起育成雞生長發(fā)育受阻和淘汰率增加，且造成蛋雞產(chǎn)蛋量明顯下降，給我國養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大損失。
　　2012年12月，我國南方某些蛋雞養(yǎng)殖場出現(xiàn)了大量疑似雞傳染性鼻炎的病例，本研究對送檢病雞樣品進(jìn)行了細(xì)菌學(xué)檢測。通過細(xì)菌分離、PCR、平板凝集試驗，鑒定出4株副雞禽桿菌，人工感染試驗雞能復(fù)制出與臨床表現(xiàn)一致的病例。采用血凝和血凝抑制試驗對分離

2、菌株進(jìn)行血清學(xué)分型，最終確認(rèn)引起該病的病原體是B型副雞禽桿菌。
　　為了探討以莢膜多糖(CPS)為抗原成份研發(fā)該病新型疫苗的可行性，本研究用乙醇沉淀法在副雞禽桿菌培養(yǎng)液上清中提取莢膜多糖，以苯酚-硫酸法測定其含量，并利用高效液相色譜(HPLC)分析多糖組分及分子量大小。結(jié)果顯示，每升菌液可以抽提得到莢膜多糖85mg，含量為62％，該多糖主要由L-鼠李糖、D-木糖、D-葡萄糖等單糖組成，分子量約為209Ku。
　　通過動物實驗

3、，分別研究了莢膜多糖和血凝素(HA)成份單獨接種或混合免疫的免疫保護(hù)效果。用HA、C按PS和CPS+HA分別免疫SPF雞后進(jìn)行攻毒試驗，在首免、二免后分別采血，利用ELISA方法檢測血清抗體效價并計算各試驗組雞只的保護(hù)率。結(jié)果顯示在免疫劑量和免疫途徑相同時，CPS+HA聯(lián)合免疫組抗體水平高于HA、CPS單獨免疫組;與肌肉注射相比，眶下竇注射免疫可顯著提高血清抗體水平和保護(hù)率。表明B型副雞禽桿菌莢膜多糖具有一定的免疫原性，且與HA結(jié)合后免