src激酶在e.colik1侵襲人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞中的作用及其機制研究

1、中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文Src激酶在E.coli K1侵襲人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞中的作用及其機制研究姓名：劉巍申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：陳譽華20090501基因v ．S r c 具有致癌性，其同源的原癌基因e - S r c 是人或動物細(xì)胞中的正?；颍鼈兙幋a分子量為6 0 k D a 的非受體酪氨酸激酶。S r c 與細(xì)胞的生長、存活、分化、形態(tài)、遷移、信號傳導(dǎo)、細(xì)胞周期調(diào)控都密切相關(guān)。S r c 的功能是通過磷酸化

2、來實現(xiàn)的，底物蛋白直接或間接通過S r c 酪氨酸激酶磷酸化。S r e 底物最初發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)化細(xì)胞，多數(shù)位于粘著斑，是整合素介導(dǎo)的信號通路的重要成分。他們是與肌動蛋白和整合素綁定在一起的，例如：v i n c u l i n 、c o r t a c t i n 、t a l i n 、p a x i l l i n 、F A K 、t e n s i n 、e z r i n 和p 1 3 0 c a s 。此外，連接蛋白具有能通過S

3、r e 激酶酪氨酸磷酸化的主要位點，例如B ．和丫．e a t e n i n 、Z O ．1 、o c c l u d i n 、p 1 2 0 e t n 、e o r m e x i n 4 3 和l l e c t i l l 。本研究室的前期工作發(fā)現(xiàn)：P 1 3 K 是參與E ．c o l iK 1 侵襲H B M E C 的重要信號分子。P 1 3 K - - “ p - A k t - - - L I M K —C o f

4、 i l i 信號通路可以啟動細(xì)胞骨架的重排，增加E ．c o l iK 1 對H B M E 的侵襲，而P 1 3 K —R o c k —L I M K —p ．C o f i l i n 信號通路能抑制E ．c o l i K 1對H B M E C 的侵襲，但P 1 3 K 的上游信號通路還不清楚。近來研究表明，表皮生長因子刺激T 4 7 D 細(xì)胞導(dǎo)致S r c 蛋白酪氨酸激酶活化，S r e 活化后通過S r e _ c _

5、C b l—P 1 3 K - - * A k t 信號通路調(diào)節(jié)A k t 的活化。S r e 激酶還可以通過激活P 1 3 K 信號通路調(diào)節(jié)結(jié)腸癌細(xì)胞的失巢凋亡。因此我們探討S r e 家族激酶是否參與E ．c o l i K 1 對耶M E C 的侵襲并且是否是P 1 3 K ／A k t 的上游信號分子。本研究利用H B M E C 體外模擬血腦屏障，觀察E ．c o i l K I侵襲H B M E C 過程中細(xì)菌的侵襲和粘附能

6、力、侵襲后H B M E C 細(xì)胞骨架變化。本研究對E ．c o l i K 1 侵襲H B M E C 過程中S r c 家族蛋白酪氨酸激酶相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路進行了研究，為探討致病性大腸桿菌感染真核宿主細(xì)胞的分子機制提供了新的線索。方 法一、E ．c o l i K 1 侵襲人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞過程中S r c 激酶的活化1 ．細(xì)胞培養(yǎng)：H B M E C 細(xì)胞培養(yǎng)于含1 0 ％胎牛血清，1 0 ％N u 血清的R P M l l 6 4