Flt-1在小細(xì)胞肺癌細(xì)胞穿過人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞單層中的作用及機制研究.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文Flt1在小細(xì)胞肺癌細(xì)胞穿過人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞單層中的作用及機制研究姓名：趙曉云申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：陳譽華20080501導(dǎo)其跨過人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HBMEC)單層遷移【74】，但有關(guān)其穿過HBMEC單層的詳細(xì)機制尚未清楚。血管內(nèi)皮生長因子(Vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)又稱為血管滲透因子，其蛋白家族包括VEGF—A，B，C，D和胎盤生長因子(

2、Placentalgrowthfactor，PIGF)。P1GF為分泌的糖蛋白，與VEGF在氨基酸序列殘基上有53％的同源性，且其生物學(xué)功能與VEGF也有相似之處，如刺激內(nèi)皮細(xì)胞生長等n卜161。血管內(nèi)皮生長因子受體1(VascularendothelialgrowthfactorreceperVEGFR1，又稱為Fmsliketyrosinekinase1，F(xiàn)it1)，為P1GF在細(xì)胞膜上的專一受體，屬于受體酪氨酸激酶家族成員，由七個

3、免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)的胞外區(qū)、跨膜區(qū)、近膜區(qū)、激酶插入?yún)^(qū)和C末端構(gòu)成。PIGF與Fit1的胞外區(qū)結(jié)合后，可活化受體的酪氨酸激酶，活化的酪氨酸激酶在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的傳遞和生物學(xué)功能的發(fā)揮中起到重要的作用。本實驗室通過免疫組化技術(shù)檢測到小細(xì)胞肺癌細(xì)胞高表達(dá)P1GF，并證實P1GF在小細(xì)胞肺癌細(xì)胞跨人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞單層遷移過程中發(fā)揮作用，但有關(guān)PIGF的受體Flt1在這一過程中所發(fā)揮的作用及機制尚不清楚，本研究試圖回答該問題。方法一、探討Fit1受體

4、在小細(xì)胞肺癌細(xì)胞跨人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞單層遷移中的作用l、細(xì)胞培養(yǎng)(1)HBMEC細(xì)胞培養(yǎng)于含10％胎牛血清和10％Nu血清的RPMll640培養(yǎng)液(2)NCIH209細(xì)胞培養(yǎng)于含10％新生牛血清的RPMll640培養(yǎng)液2、免疫熒光技術(shù)觀察NCIH209細(xì)胞與HBMEC單層共培養(yǎng)后內(nèi)皮細(xì)胞間TJ結(jié)構(gòu)改變3、蛋白抽提和Westernblot方法分析NCIH209細(xì)胞與HBMEC單層共培養(yǎng)后TJ蛋白o(hù)ccludin的可溶性片段和不可溶性片段的