tatnlsnkx6.2融合蛋白功能的初步研究

1、分類(lèi)號(hào)： Q 7 8密 級(jí)：學(xué)位類(lèi)別： 科學(xué)學(xué)位囹 專(zhuān)業(yè)學(xué)位口O學(xué)校代碼：10 062學(xué) 號(hào)：2 0 1 1 6 0 2 0 2 1學(xué)科門(mén)類(lèi)：理學(xué)又蚌簣科袁母 T l A N J l N M E D I C A l - U 麓l V 囂l 噶1 1 愕碩士學(xué)位論文M A S T E R ’S D I S S E R T A T I O N論文題目：T A T - N L S —N k x 6 ．2 融合蛋白功能的初步研究T IT L E

2、 P r i m a r y r e s e a r c ho f T A T - N L S —N k x 6 ．2f u s i o np r o t e i n一級(jí)學(xué)科：生物學(xué)二級(jí)學(xué)科：生物化學(xué)與分子生物學(xué)論文作者：孫少飛指導(dǎo)教師：郭剛導(dǎo)師組成員：張瑞助理研究員王寶利研究員天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一四年五月天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要由同源盒基因N k x 6 ．2 編碼產(chǎn)生的同源結(jié)構(gòu)域N k x 6 ．2 作為一種反式作用因

3、子，在少突膠質(zhì)細(xì)胞特化、成熟及髓鞘形成過(guò)程中和中樞神經(jīng)系統(tǒng)( c e n t r a ln e r v o u s s y s t e m ，C N S ) 胚胎期神經(jīng)母細(xì)胞特化生，都發(fā)揮重要的調(diào)控作用。本實(shí)驗(yàn)室在前期研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，腦發(fā)育時(shí)期甲狀腺激素( t h y r o i dh o r m o n e ，T H )不足會(huì)造成C N S 內(nèi)重要神經(jīng)細(xì)胞異常，同時(shí)伴隨N k x 6 ．2 低表達(dá)。但是，由于T H 不足導(dǎo)致的腦發(fā)育遲

4、滯的病理過(guò)程中，轉(zhuǎn)錄因子N k x 6 ．2 參與的具體機(jī)制尚不明確。我們希望通過(guò)給予甲狀腺功能減低模型添加外源性N k x 6 ．2 的方法，可以有助于解決或部分解決這一問(wèn)題。本課題組前期工作將N k x 6 ．2 與核定位信號(hào)( n u c l e a rl o c a t i o n s e q u e n c e ，N L S ) 、T A T 蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)域( p r o t e i n t r a n s d u c t i o

5、 nd o m a i n ，P T D ) 一起構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒p E T - 2 8 a ．T N - N K x 6 ．2 。本文將該重組表達(dá)質(zhì)粒p E T - 2 8 a ．T N ．N K x 6 ．2 轉(zhuǎn)染神經(jīng)細(xì)胞并表達(dá)，細(xì)胞熒光免疫確定其表達(dá)產(chǎn)物可以進(jìn)入神經(jīng)細(xì)胞細(xì)胞核。之后對(duì)實(shí)驗(yàn)室前期獲得的純化T A T - N L S - N k x 6 ．2 融合蛋白，進(jìn)行熒光染料C y 7 ．N ．羥基琥珀酰亞胺酯( C y 7 ．

6、N - h y d r o x y s u c c i n i m i d e e s t e r ，C y 7N H S ) 的標(biāo)記。隨后向小鼠尾靜脈注射C y 7 ．T N ．N k x 6 ．2 ，應(yīng)用活體熒光成像系統(tǒng)監(jiān)測(cè)融合蛋白T N ．N k x 6 ．2 在小鼠腦部的動(dòng)態(tài)分布，結(jié)果證明該融合蛋白能夠通過(guò)血腦屏障( b l o o d ．b r a i nb a r r i e r ，B B B ) 進(jìn)而到達(dá)腦組織；同時(shí)通過(guò)免

7、疫熒光組化實(shí)驗(yàn)表明該融合蛋白可以?xún)?nèi)化進(jìn)入神經(jīng)細(xì)胞胞漿、胞核。最后向神經(jīng)干細(xì)胞中加入融合蛋白T N ．N k x 6 ．2 繼續(xù)培養(yǎng)，細(xì)胞熒光免疫反應(yīng)觀察不同培養(yǎng)不同時(shí)間段神經(jīng)細(xì)胞分化情況，發(fā)現(xiàn)融合蛋白T N ．N k x 6 ．2 可以促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的分化，尤其是促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞向少突膠質(zhì)細(xì)胞特化，促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的成熟。關(guān)鍵詞：同源盒基因N k x 6 ．2 p E T - 2 8 a 質(zhì)粒w 正．N L s - N l ( x 6 ．2