口蹄疫疫苗制備工藝

1、口蹄疫疫苗制備工藝口蹄疫疫苗制備工藝豬口蹄疫是由口蹄疫病毒（FootMouthDiseaseVirus，F(xiàn)MDV）引起的豬等偶蹄動物多發(fā)的一種急性、熱性和傳播極為迅速的接觸性傳染病。該病早在14世紀(jì)的意大利學(xué)者第1次描述了FMDV。1898年，Loeffler和Frosch等證明了口蹄疫的病原體為濾過性病毒。本病廣泛分布于世界各地，目前除有少數(shù)國家已經(jīng)撲滅本病外，至今仍有70多個國家還時有發(fā)生。該病的發(fā)病率幾乎達100%，但病程一般呈良

2、性經(jīng)過，死亡率只有2%～3%，仔豬呈惡性病型，死亡率可達50%～70%，該病除導(dǎo)致豬死亡造成直接經(jīng)濟損失外，最為嚴(yán)重的是由于其傳染性極強和引起大規(guī)模流行，并影響一個國家的畜產(chǎn)品進出口貿(mào)易，造成巨大經(jīng)濟損失和政治影響，所以國際獸疫局將該病列為A類家畜傳染病之首，并列入世界范圍內(nèi)重要傳染病研究行列?？谔阋卟《緦儆谖⒑颂呛怂岵《究瓶谔阋卟《緦?。其最大顆粒直徑為23納米，最小顆粒直徑為7—8納米。目前已知口蹄疫病毒在全世界有七個主型cA、O、C

3、、南非1、南非2、南非3和亞洲1型，以及65個以上亞型。O型口蹄疫為全世界流行最廣的一個血清型，我國流行的口蹄疫主要為O、A、C三型及ZB型(云南保山型)。據(jù)觀察，一個地區(qū)的牛群經(jīng)過有效的口蹄疫疫苗注射之后，1—2月內(nèi)又會流行，這往往懷疑是另一型或亞型病毒所致。這是因為該病毒易發(fā)生變異。該病毒對外界環(huán)境的抵抗力很強，在冰凍情況下，血液及糞便中的病毒可存活120—170天。陽光直射下60分鐘即可殺死；加溫85℃15分鐘、煮沸3分鐘即可死亡

4、。對酸堿之作用敏感，故1%一2%氫氧化鈉、30%熱草木灰、1%一2%甲醛等都是良好的消毒液。1材料材料11主要設(shè)備生物反應(yīng)器、細(xì)胞計數(shù)儀。12BHK21細(xì)胞懸浮適應(yīng)株13口蹄疫種毒OJMS／2000株為現(xiàn)行?？谔阋唠p價疫苗制苗毒株，每02mL含有的LD50為107.0，亞洲I型為Asia1／JSL／GSZY／06株，每02mL含有的LD50為107.5動物衛(wèi)生組織(OIE)向各國推薦使用1mmolLBEI兩次滅活法即2037℃滅活24h

5、后再加一次BEI滅活24h經(jīng)多年應(yīng)用效果較好。2006年OIE又推薦了3mmolLBEI兩次滅活法BEI用量增加到3mmolL26℃分兩次共滅活48h滅活劑用量加大使疫苗安全性更高溫度降低有利于保持病毒粒子146S完整性。研究表明乙烯亞胺類衍生物與甲醛相比不僅毒性大而且滅活后病毒穩(wěn)定性差甲醛滅活的弗氏佐劑疫苗有效期可達10年而BEI滅活的同類疫苗有效期僅2年左右。另有研究表明SAT2型FMDV經(jīng)乙烯亞胺類衍生物滅活后再經(jīng)甲醛處理穩(wěn)定性明

6、顯提高。甲醛與BEI協(xié)同作用可將滅活效力提高100倍并且縮短了滅活時間既改善了疫苗的安全性又保護了抗原完整性因此這種方法值得在生產(chǎn)中推廣。滅活終止后應(yīng)立即在抗原中加入阻斷劑中和多余的乙烯亞胺類衍生物常用的阻斷劑為硫代硫酸鈉或焦亞硫酸鈉溶液。2.52.5乳化乳化早期的FMD疫苗都采用氫氧化鋁作為佐劑人們發(fā)現(xiàn)氫氧化鋁佐劑疫苗的不足之處在于:對牛效果較好而對豬效果差。只能增強TH1型免疫反應(yīng)而不能增強細(xì)胞介導(dǎo)免疫(CMI)。注射局部有紅斑、腫

7、脹和硬結(jié)。現(xiàn)在多使用的油佐劑疫苗對豬、牛都具有免疫效力主要誘導(dǎo)產(chǎn)生Th2型反應(yīng)。油佐劑在使用時一般預(yù)先將乳化劑(如山梨醇苷單油酸脂)和液狀石蠟混合加入水相抗原經(jīng)乳化制成油包水型乳劑再加入含聚山梨脂的水相抗原進行乳化制成較復(fù)雜的雙相(水包油包水型)乳劑疫苗。實驗證明雙相油佐劑疫苗黏稠度低效果較好而且能夠用于所有的動物。油佐劑的主要缺點是副作用較強特別是皮下注射有時會在注射部位引起炎癥甚至潰瘍和肉芽腫。2.62.6安全性檢驗安全性檢驗滅活完

8、成后每批滅活抗原樣品應(yīng)通過敏感單層細(xì)胞傳代或乳鼠接種試驗以判定滅活抗原的安全性。敏感單層細(xì)胞傳代時通常傳23代應(yīng)無細(xì)胞病變(CFU)。樣品接種乳鼠后連續(xù)觀察7日應(yīng)全部健康。歐洲藥典規(guī)定牛FMDV滅活疫苗制苗病毒液滅活安檢時用至少6月齡健康易感牛按2mL頭的劑量分別于舌部皮下注射3頭牛聯(lián)續(xù)觀察6日應(yīng)均不引起典型癥狀。豬FMDV滅活疫苗制苗病毒液滅活安檢時用3040日齡健康易感仔豬按2mL頭的劑量分別于耳后肌肉注射3頭仔豬連續(xù)觀察14日應(yīng)均