豬口蹄疫亞洲Ⅰ型病毒分離鑒定、VP1基因和疫苗免疫研究.pdf

1、本研究從規(guī)?；i場分離到一株豬源病毒，通過細(xì)胞培養(yǎng)、電鏡觀察、乳鼠血清中和實驗，以及送中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所口蹄疫國家參考實驗室鑒定為口蹄疫亞洲Ⅰ型病毒。對病變細(xì)胞進(jìn)行超速離心，電鏡負(fù)染可見大小約25-30nm的病毒粒子；血清中和實驗，F(xiàn)MDVAsiaI標(biāo)準(zhǔn)血清組乳鼠存活，其余FMDV標(biāo)準(zhǔn)血清組、對照組乳鼠死亡。 根據(jù)GenBank中的FMDVAsiaI的全基因序列，在VP1基因兩端設(shè)計一對引物，擴(kuò)增出1012bp的VP1

2、衣殼蛋白的完整片段。通過對病毒VP1基因的測序顯示：本次分離株VP1cDNA全長633bp，GC含量為59.56％。該毒株與中國報道株的同源性在82.0％-99.2％之間，與國外報道序列的同源性在82:9％-98.4％之間。同源性比較顯示本次分離毒株不屬于2001年報道口蹄疫亞洲Ⅰ型的4個基因型。結(jié)果顯示我國口蹄疫亞洲Ⅰ型病毒為兩個不同基因性的流行，即06年以前以Gansu1、Yunnan株為代表的GenotypesⅣ，還有06年后報道

3、的和本次分離株的新基因型。比較顯示本次分離株在149突變?yōu)楦彼?Pro)和154位突變?yōu)樘於彼?Asp)，該兩處的氨基酸突變在其他報道序列中未見報道。 本試驗選擇母豬70頭，小豬70頭，隨機(jī)均分為7組，每組母豬10頭，小豬10頭，分別編為1-7組(1-3組采用口蹄疫AsiaI-0二價疫苗，4-6組采用口蹄疫AsiaI單價疫苗，7組為正常免疫0型疫苗組)，分別按正常免疫劑量、1.5倍劑量、正常免疫劑量免疫后15日加強(qiáng)一次共三個

4、劑量組進(jìn)行肌肉注射免疫。各組均正常飼養(yǎng)，于免疫后0、7、15、30、60、90、120日時耳靜脈采血并分離血清。采用國際獸疫局推薦的液相阻斷酶聯(lián)免疫反應(yīng)(LPB-ELISA)檢測口蹄疫抗體效價。注射劑量比較表明，母豬采用1.5倍劑量、仔豬采用加強(qiáng)免疫其免疫抗體滴度水平高于另外兩種方法；不同疫苗產(chǎn)生抗體滴度比較表明，采用口蹄疫AsiaI型單價滅活疫苗免疫后所產(chǎn)生的抗體滴度高于使用口蹄疫AsiaI-0型雙價滅活疫苗試驗組；口蹄疫0型抗體滴度

5、的比較表明，采用口蹄疫AsiaI-0型雙價滅活疫苗進(jìn)行免疫時，0型抗體和采用單價苗免疫結(jié)果差異不顯著：對免疫后抗體滴度達(dá)到保護(hù)的豬只數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計，結(jié)果顯示采用AsiaI-0型二價疫苗組免疫后抗體滴度能達(dá)到保護(hù)的母豬有70％、小豬有60％：AsiaI單價苗免疫后抗體滴度能達(dá)到保護(hù)的母豬有83％、小豬有73％： 對試驗豬抗體監(jiān)測結(jié)果顯示，豬群在免疫后15日左右出現(xiàn)最高抗體滴度，隨后逐漸減弱。同時通過加強(qiáng)免疫組監(jiān)測結(jié)果顯示，抗體滴度l