口蹄疫疫苗保存技術(shù)研究.pdf

1、保護劑在動物疫苗中具有重要的作用，直接影響疫苗的質(zhì)量。目前，動物疫苗中，滅活疫苗占相當大的比例，國內(nèi)外廣泛使用的口蹄疫（FMD）疫苗均系油乳劑滅活疫苗。國內(nèi)常用的保護劑主要為牛奶、蔗糖、明膠等，組方簡單，保護功能差。加上國外對疫苗保護劑研究的保密，使成品疫苗的保存和運輸受到一定限制。為延長FMD疫苗的有效保護期，提高疫苗的免疫效力，本研究對FMD滅活疫苗保存技術(shù)進行了初步探討。主要的研究內(nèi)容和結(jié)果如下： 1．用三因素、三水平、雙

2、重復(fù)正交試驗篩選出了對口蹄疫病毒（FMDV）抗原保護效果最好的4#保護劑配方，通過方差分析4#保護劑保存病毒在37℃靜置40hr和50hr測得TCID50極顯著的高于1、3、5、6、7、8號，顯著高于2、9。其中最主要的三種保護劑：海藻糖、山梨醇、PVP配方比例為8：5：4，保護劑與病毒配比為1：6時即可達到最佳保護效果。經(jīng)146s抗原含量測定，加4#保護劑的病毒分別于-20℃和4℃下保存150d，37℃下保存40hr，測得結(jié)果分別為1

3、．116μg/ml、0．896μg/ml、0．888μg/ml，進一步驗證了4#保護劑對病毒具有良好的保護效果。 2．將加入4#保護劑O/NX/99其細胞毒，在20℃放置30d后，使用RT-PCR擴增和核苷酸序列分析技術(shù)，分析了VP1基因，并與未加保護劑的對照病毒進行了比較，結(jié)果保護劑不會使病毒基因發(fā)生突變。 3．由于篩選的4#保護劑配方中主要組分海藻糖、山梨醇、PVP的含量會影響疫苗乳劑的穩(wěn)定性，本試驗對該保護劑配方進

4、行了優(yōu)化。通過對疫苗乳液的物理性狀評價，三種主要的保護劑海藻糖、山梨醇、PVP的含量對疫苗乳液的穩(wěn)定性都有極顯著的影響，PVP（聚乙烯吡咯烷酮）隨含量的增加疫苗乳液的穩(wěn)定性降低，海藻糖和山梨醇對疫苗乳液的穩(wěn)定性影響較小，通過正交試驗和相關(guān)數(shù)據(jù)的分析，優(yōu)化后的復(fù)配比例為海藻糖：山梨醇：PVP=4：5：1。將優(yōu)化后的保護劑加入病毒抗原后配制疫苗，并將該疫苗在20℃下放置15d后，免疫豚鼠。經(jīng)微量細胞中和試驗測定，豚鼠于免疫后14d、28d、