莨菪烷類抗膽堿藥物分析

1、第十三章 莨菪烷類抗膽堿藥物的分析,學(xué)習(xí)要求,掌握莨菪烷類抗膽堿藥物的結(jié)構(gòu)特征、理化性質(zhì)與分析方法之間的關(guān)系,4,1,2,3,了解其他分析方法在莨菪烷類藥物分析中的應(yīng)用,第一節(jié) 莨菪烷類藥物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì),顛茄生物堿的來源：從茄科植物，如顛茄、莨菪和曼陀羅等中提取的生物堿，由莨菪醇與不同有機(jī)酸所成的酯。,作用：具有對M受體阻斷作用,（一）典型藥物的結(jié)構(gòu) 硫酸阿托品

2、 氫溴酸東莨菪堿 （atropine sulfate） ( Scopolamine hydrobromide）,第一節(jié) 莨菪烷類藥物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì),第一節(jié) 莨菪烷類藥物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì),氫溴酸山莨菪堿( Anisodamine hydrobromide）,

3、氫溴酸后馬托品( Hormatropine hydrobromide）,第一節(jié) 莨菪烷類藥物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì),樟柳堿 ( Anisodine ）,甲溴東莨菪堿( Methscopolamin Bromide ）,第一節(jié) 莨菪烷類藥物的結(jié)構(gòu)和性質(zhì),（二）主要化學(xué)性質(zhì)1. 水解性 阿托品和東莨菪堿分子結(jié)構(gòu)中，具有酯的結(jié)構(gòu)，易水解。以阿托品為例，水解生成莨菪醇(Ⅰ)和莨菪酸(Ⅱ)，其反應(yīng)結(jié)構(gòu)式: 2. 堿性 阿托

4、品和東莨菪堿結(jié)構(gòu)中，五原脂環(huán)含有叔胺氮原子，較強(qiáng)的堿性，易于酸成鹽，如阿托品pKb1為4.353. 旋光性 氫溴酸東莨菪堿含有不對稱碳原子，左旋體比旋度為-24°至-27°。阿托品雖然含有不對稱碳原子，但外消旋化，無旋光性,,第二節(jié) 鑒別反應(yīng),,,,,,,,鑒別反應(yīng),1,2,3,4,5,托烷生物堿的鑒別反應(yīng)（Vitaili反應(yīng)）,與硫酸-重鉻酸鉀的反應(yīng),與生物堿顯色劑和沉淀劑的反應(yīng),色譜法,光譜鑒別法,,,,

5、,,,阿托品、莨菪堿等托烷類生物堿水解后生成莨菪酸，均可發(fā)生Vitaili反應(yīng),生成具有共軛結(jié)構(gòu)的陰離子而顯深紫色,與發(fā)煙硝酸共熱，得到黃色三硝基衍生物，放冷，加醇制氫氧化鉀少許，即脫羧,一、托烷生物堿的鑒別反應(yīng)（Vitaili反應(yīng)）,第二節(jié) 鑒別反應(yīng),第二節(jié) 鑒別反應(yīng),氫溴酸山莨菪堿的鑒別 取本品約10mg，加發(fā)煙硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黃色殘?jiān)爬?，加乙?~3滴濕潤，加固體氫氧化鉀一小粒，即顯深紫色。,,第二節(jié) 鑒別反應(yīng)

6、,,二、與硫酸-重鉻酸鉀的反應(yīng),三、與生物堿顯色劑和沉淀劑的反應(yīng),阿托品＋氯化汞醇試液→黃色沉淀東莨菪堿＋氯化汞醇→白色復(fù)鹽沉淀,,氫溴酸東莨菪堿的鑒別,,即生成白色沉淀（與阿托品及后馬托品的區(qū)別）,,,取本品約10mg，加水1ml溶解后，置分液漏斗中,,,分取三氯甲烷液，置水浴上蒸干，殘?jiān)屑佣然囊掖既芤?.5ml,,,加氨試液使成堿性后，加三氯甲烷5ml，搖勻,第二節(jié) 鑒別反應(yīng)（例2）,第二節(jié) 鑒別反應(yīng),表13-2 常

7、用的生物堿沉淀試劑及反應(yīng)Tab. 13-2 The precipitation reagents and reaction for testing alkaloids,第二節(jié) 鑒別反應(yīng),四、光譜鑒別法,,,通過比較λmax、λmin或吸收光譜的一致性進(jìn)行鑒別，也可比較其吸光度或吸收系數(shù)的比值來鑒別,絕大多數(shù)生物堿原料藥都采用IR法鑒別,,,UV,IR,四、光譜鑒別法,氫溴酸東莨菪紅外光譜The infrared spectrum

8、of Scopolamine Hydrobromide,第二節(jié) 鑒別反應(yīng),第二節(jié) 鑒別反應(yīng)c,,,色譜法一般用于已知生物堿的鑒別,,,,,TLC,HPLC,GC,PC,五、色譜法,,Ch.P氫溴酸山莨菪堿注射液TLC鑒別 取本品1ml，置水浴上蒸干。取殘?jiān)c消旋山莨菪堿對照品，分別加甲醇制成10mg /ml的溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10µl，分別點(diǎn)于同一氧化鋁（中性，活度Ⅱ-Ⅲ級(jí)）薄層板上，以三氯甲烷-無

9、水乙醇（95∶5）為展開劑，展開，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液-碘化鉀碘試液（1∶1）。供試品溶液所顯主斑點(diǎn)位置和顏色，應(yīng)與對照品溶液的主斑點(diǎn)相同。,第二節(jié) 鑒別反應(yīng),第三節(jié) 特殊雜質(zhì)與檢查,氫溴酸東莨菪堿中特殊雜質(zhì)檢查,氫溴酸東莨菪堿來源： 茄科植物顛茄、白曼陀羅、莨菪中等提?。ㄎ覈茁恿_的干燥品：洋金花中提取東莨菪堿，制成氫溴酸鹽） 制備方法：,,第三節(jié) 特殊雜質(zhì)與檢查,,,特殊雜質(zhì)與檢查,取本

10、品0.50g，加水10ml溶解后，依法測定（附錄Ⅵ H），pH值應(yīng)為4.0～5.5。－強(qiáng)酸弱堿,取本品0.15g,加水5ml溶解后，在15～20℃加高錳酸鉀滴定液(0.02mol/L)0.05ml，10分鐘內(nèi)紅色不得完全消失。－阿撲東莨菪堿、其他含有不飽和雙鍵的有機(jī)物質(zhì),取本品0.10g ，加水2ml 溶解后，分成兩等份：一份中加氨試液2～3滴，不得發(fā)生渾濁；另一份中加氫氧化鉀試液數(shù)滴，只許發(fā)生瞬即消失的類白色渾濁。－阿撲阿托品、顛茄堿

11、,,酸度,,易氧化物,,其他生物堿,一、酸性染料比色法的基本原理,,UV,,第四節(jié) 含量測定,應(yīng)用示例,硫酸阿托品片的含量測定,精密量取對照品溶液和供試品溶液各2ml，分別置預(yù)先精密加入三氯甲烷10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚綠溶液4ml，振搖提取后，靜置使分層；分取三氯甲烷液，照紫外-可見分光光度法，在420nm波長處分別測定吸光度，計(jì)算，即得。,第四節(jié) 含量測定,第四節(jié) 含量測定,有機(jī)試劑的選擇,水分的影響,水相最佳pH值的選

12、擇,酸性染料的選擇及其濃度,酸性染料中雜質(zhì)的影響,酸性染料比色法的影響因素,水性最佳pH值：使得BH+和In-最多 酸性染料及其濃度：定量結(jié)合；對離子對的溶解性好；有較高的吸收度；足夠量即可 有機(jī)溶劑的選擇：提取效率高，氯仿最理想 水分的影響：影響結(jié)果，脫水劑或?yàn)V紙除去水分 酸性染料中的有色雜質(zhì)：有機(jī)溶劑萃取除去,第四節(jié) 含量測定,第四節(jié) 含量測定,測定法 精密量取對照品溶液和供試品溶液各2ml，分別置預(yù)先精密加入三氯甲烷1

13、0ml的分液漏斗中，各加溴甲酚綠2.0ml，振搖提取兩分鐘后，靜止分層，分取澄清的三氯甲烷液，在420nm波長處分別測定吸光度，計(jì)算，并將結(jié)果與1.027相乘，即得本品（C17H23NO3）2·H2SO4·H2O相當(dāng)標(biāo)示量的百分含量。,百分標(biāo)示量,式中Ax、AS分別為供試品和對照品溶液的吸光度； CS為對照品溶液的濃度mg/ml； m為樣品質(zhì)量；為平均片重。1.027為（C17H23NO3）2·H2SO4&

14、#183;H2O與（C17H23NO3）2·H2SO4·H2O的質(zhì)量換算系數(shù)。,Fig. 13-2 The UV-spectrum of atropine sulfate with BTB ions1.離子對 2.染料空白（對照品平行測定，空白吸收可被扣除）3.阿托品（水溶液在420nm附近無吸收）,第四節(jié) 含量測定,一、非水溶液滴定法,當(dāng)HA酸性較強(qiáng)時(shí)，反應(yīng)不能定量完成，必須除去或降低HA的酸性，使反應(yīng)順利地完

15、成。,,游離堿類鹽,,被置換出的弱酸,,第四節(jié) 含量測定,供試品,+,冰醋酸,10ml~30ml,,若供試品為氫鹵酸鹽再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml~5ml,,,結(jié)果,,HClO4滴定,,空白試驗(yàn)校正,指示劑,,堿性溶液pKb>10，冰醋酸中滴定突躍不明顯，需加入醋酐，使堿性增強(qiáng)，突躍更明顯,第四節(jié) 含量測定,,,,適用范圍廣,分離模式多樣,檢測手段多樣靈敏,選擇和專屬性強(qiáng),分離速度快,重復(fù)性好,,HPLC優(yōu)點(diǎn),各國藥典中采

16、用HPLC法對莨菪類生物堿的含量和有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行直接分析測定的比例不斷增加。,第四節(jié) 含量測定,,,,色譜保留常常較弱，從而影響到它們的含量或有關(guān)物質(zhì)HPLC測定的專屬性和準(zhǔn)確度。,采用離子對高效液相色譜法，可以改善它們的色譜保留行為，并實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確測定。,在反相液相色譜條件下呈離子狀態(tài)的藥物，如有機(jī)堿類、有機(jī)酸類等,調(diào)整流動(dòng)相的pH，抑制它們的解離，以改變色譜保留行為。但并不都能獲得滿意的結(jié)果。,第四節(jié) 含量測定,,,,了解藥物在體內(nèi)數(shù)

17、量與質(zhì)量的變化,獲得藥代參數(shù)和藥物轉(zhuǎn)化、代謝的方式、途徑等信息,有助于對所研究的藥物作出綜合評(píng)價(jià),,概念：研究生物機(jī)體中藥物及其代謝物和內(nèi)源性物質(zhì)的質(zhì)與量變化規(guī)律的分析方法學(xué),體內(nèi)藥物分析,通過分析手段,第五節(jié) 體內(nèi)藥物分析,,,,,,,,,,,,,,,,,,,去除蛋白質(zhì),綴合物的水解,液-液提取,固相提取,化學(xué)衍生化,,,,,,,,,,,,,,,1,2,3,4,5,生物樣品組成復(fù)雜，干擾雜質(zhì)多，一般需經(jīng)分離、純化，排除干擾后才能進(jìn)行測

18、定,第五節(jié) 體內(nèi)藥物分析,存在問題,解決辦法,,,,第五節(jié) 體內(nèi)藥物分析,,,,,,,復(fù)雜生物樣品中微量藥物定量測定專屬有效的方法,,色譜與光譜聯(lián)用技術(shù),,集色譜的高分離效能和光譜的高專屬性與高靈敏度于一體,特點(diǎn),作用,藥物代謝物定性鑒定和含量測定常用的方法,第五節(jié) 體內(nèi)藥物分析,第五節(jié) 體內(nèi)藥物分析,,,,,,,人血漿和皮下脂肪組織中東莨菪堿的測定,介紹莨菪烷類藥物的液-質(zhì)聯(lián)用測定法,介紹生物樣品在體取樣的微透析技術(shù),例,,實(shí)驗(yàn)步

19、驟如下,第五節(jié) 體內(nèi)藥物分析,,,,,,FIRST,,SECOND,,THIRD,,FOURTH,,,,,受試者靜脈滴注氫溴酸東莨菪堿,15min后分不同時(shí)間點(diǎn)取血,精密量取0.2ml血漿并加入內(nèi)標(biāo),加入蛋白沉淀劑并調(diào)節(jié)pH值,,,,FIFTH,渦旋混勻后通過固相萃取,,,SIXTH,進(jìn)樣,,,,,,,血漿中東莨菪堿的測定,第五節(jié) 體內(nèi)藥物分析,,皮下脂肪中東莨菪堿的測定,,微透析探針包埋在皮下脂肪組織的間隙內(nèi)，每間隔20分鐘獲取一次