楊愛平腸道腺病毒檢測及臨床意義

1、1,一、定義及血清型,2,腸道感染病毒 主要包括腸道病毒和急性胃腸炎病毒 腸道病毒 (小RNA病毒科) 輪狀病毒 腸道腺病毒 呼腸病毒科 杯狀病毒 星狀病毒,,3,腺病毒起源,20世紀50年代初期，一位科學家對手術切除的人扁桃體增殖腺小塊進行細胞培養(yǎng)時意外發(fā)現在培養(yǎng)的腺樣組織內潛伏著一種未知的病毒，這種病毒可引起培養(yǎng)的單層細胞發(fā)生病變。由于這種病毒被首先發(fā)現于腺樣組織中，1956年國際病毒命名委員會將這類病

2、毒命名為腺病毒，1962年正式命名為腺病毒科,4,腺病毒血清型,目前，已經發(fā)現有100多種類型的腺病毒可以感染人、哺乳動物和禽類，其中能感染人類的腺病毒（人腺病毒）就有50多型，把人腺病毒的41個血清型分為A-F 6個組：A-E組：各型病毒均能在人的組織細胞 (如腎細胞) 常規(guī)培養(yǎng)中增殖，稱為普通腺病毒；F組（40和41型）：是從糞便中發(fā)現，用常規(guī)細胞培養(yǎng)不能增殖的腺病毒，僅在選擇性細胞上生長，稱為腸道腺病毒。,5,流行性腺病毒胃

3、腸炎廣泛分布于世界各地，在小兒，發(fā)病情況僅次于輪狀病毒性腸炎。最小發(fā)病年齡為1月，絕大多數發(fā)生于3歲以下的嬰幼兒。Ad-40主要感染1歲左右嬰兒，Ad-41則感染稍大的幼兒，全年均可發(fā)病，但腺病毒性胃腸炎一般呈散發(fā)性。,6,腸道腺病毒通過消化道傳播，主要原因是因為樹突狀細胞缺乏腺病毒受體，不能感染附近淋巴結。,流行性,7,腺病毒胃腸炎的潛伏期約10天，主要表現為腹瀉，量少或多，呈水樣便或稀便，少數可排出粘液，病程4-8天，常伴嘔吐。部分

4、患者有呼吸道癥狀，少數患者發(fā)熱，病程多自限，排毒時間約1周。某些患者失水較嚴重，個別重度失水者可死亡。,流行性,8,各型腺病毒所致腹瀉持續(xù)時間不等，以腸腺病毒胃腸炎腹瀉時間最長，大多患者有嘔吐，持續(xù)1-2天，少數有發(fā)熱。非腸型腺病毒腹瀉患者發(fā)熱較多。約20％腺病毒腸炎患者有呼吸道癥狀。,流行性,9,二、生物學性狀,10,雙鏈DNA病毒，二十面體立體對稱，無包膜。引起嬰兒病毒性腹瀉。,,,腺病毒電鏡圖,腺病毒模式圖,11,培養(yǎng)特性：人類

5、腺病毒無敏感動物，也不能在雞胚中生長。但能在來源于人的多種細胞培養(yǎng)中增殖，引起明顯CPE：細胞腫脹變圓、集聚成葡萄串狀，并可在感染的細胞核內形成嗜堿性包涵體。,,生物學性狀,12,抵抗力,腺病毒外膜無類脂質包膜，故能耐乙醚和氯仿等脂溶劑；并能耐受蛋白酶及膽汁的作用。但不耐熱在室溫中可存活10d以上，56℃30min滅活。,生物學性狀,13,腺病毒的復制----嚴格按照日程表復制的病毒,突出小結和六鄰體都必須插入細胞表面的受體分子，病毒才

6、能被細胞攝入，被內體包裹。在內體的酸性環(huán)境中降解，進入細胞質，將DNA釋放到細胞核內。腺病毒利用自身的DNA聚合酶進行復制，先對一條親代鏈進行互補復制，取代第二條親代鏈，然后DNA聚合酶再對第二條親代鏈進行復制，因此，病毒 DNA的兩條鏈都是連續(xù)的。,14,三、致病性與免疫性,15,對宿主防御的逃逸,因為腺病毒復制緩慢，感染細胞容易受到宿主防御系統的攻擊，因此腺病毒有1/4的基因組用來對付宿主的防御系統。 通過釋放兩種E1B蛋白

7、來抑制細胞的凋亡，使受感染的細胞能支持到病毒完成復制。,致病性和免疫性,16,感染后期病毒復制組裝完成時，腺病毒產生病毒死亡蛋白給細胞致命一擊徹底釋放病毒。腺病毒制造VARNA來免遭干擾素的破壞，通過結合PKR，使之失活，使病毒蛋白質合成。,17,阻止MHC-I類分子在病毒感染細胞上表達以阻止CTL的攻擊。腺病毒合成RID蛋白結合病毒感染細胞的死亡受體以逃避天然殺傷細胞的攻擊。病毒利用自身的聚合酶進行基因組復制，增加了抗原漂

8、移的機會。,18,腺病毒對呼吸道、胃腸道、尿道和膀胱、眼、肝臟等均可感染，人腺病毒約1/3的已知血清型通常與人類疾病相關，但一種血清型可引起不同的臨床疾患；相反，不同血清型也可引起同一種疾患。,19,呼吸道感染,呼吸道感染的典型癥狀是咳嗽、鼻塞和咽炎，同時伴有發(fā)熱、寒戰(zhàn)、頭痛和肌肉 痛等，包括以下4種不同的綜合征：1．急性發(fā)熱性咽喉炎由C組病毒引起，出現咳嗽，鼻塞、發(fā)熱和咽喉部潰瘍等癥狀，這些表現難以與其他病毒引起的輕型呼吸道感染鑒別

9、2．咽結膜熱多由B組腺病毒3和7型所致，愈后尚好，一般無后遺癥。 3．急性呼吸道疾病 多由腺病毒4、7型引起，也可見于3型4、肺炎 腺病毒肺炎約占兒童期肺炎的10%，多由腺病毒3、7型引起；在青年人腺病毒肺炎的病死率為8%～10%,20,眼部感染,腺病毒致輕型眼部感染是呼吸道感染和咽喉炎的并發(fā)癥。濾泡性結膜炎可由許多型腺病毒引起，類似于衣原體性結膜炎，而且為自限性。由腺病毒8、19和37型引起的角結膜炎為重型感染，具高傳染性，以急

10、性結膜炎開始，擴至耳前淋巴結，隨后發(fā)生角膜炎。 胃腸炎　　許多腺病毒在腸道細胞中復制，隨糞便排出，但大多血清型與胃腸道疾病無關。而40型和41型腺病毒可引起嬰幼兒與年少（4歲以下）兒童的胃腸炎，致腹痛、腹瀉。C組腺病毒能引起某些嬰幼兒腸套疊。,21,其它疾病,腺病毒11、12型能引起兒童急性出血性膀胱炎，尿中出現病毒。37型可引起女性宮頸炎和男性尿道炎，常由性傳播感染。在免疫功能低下者可引起偶發(fā)或嚴重的病毒感染，尤其在器官移植病人中

11、發(fā)生嚴重呼吸道感染和病毒性肝炎，多由1、5和7型腺病毒引起。艾滋病患者可感染多種血清型腺病毒，并能出現抗原性介于中間的雜合型毒株，而且常為致死性腺病毒感染。主要原因是腺病毒的E1A蛋白可反式激活HIV的轉錄，加速HIV的復制。臨床發(fā)現37%的艾滋病患者病毒性腹瀉是由腺病毒所致。,22,免疫性腺病毒感染后，產生特異性抗體，對同型病毒的感染有保護作用，免疫力持久。,致病性和免疫性,23,四、腸道腺病毒診斷,24,傳統方法,病原分離培養(yǎng)后,

12、 應用亞屬特異的免疫熒光測定法、放射免疫測定、ELISA、DNA雜交等進行腺病毒亞屬的鑒定。再應用型特異性血清進行中和試驗。缺點：不僅費時費力, 結果也不夠理想,25,病毒分離：標本（患者咽喉、眼分泌物、糞便等） 敏感細胞 CPE 分離株為抗原，用抗病毒診斷血清作CF試驗，確定是否為腺病毒；用已知腺病毒型特異性免疫血清做NT試驗可定型。 亦可用直接或間接免疫熒光方法，檢測臨床診斷疑為腺病毒肺炎的嬰幼兒鼻

13、咽部脫落細胞中的腺病毒抗原。,,,,微生物學檢查法,26,血清學診斷,采取患者早期和恢復期雙份血清做CF試驗、HI試驗及NT試驗?；謴推谘蹇贵w滴度比早期增長4倍以上有診斷意義。其中CF試驗最為常用。,微生物學檢查法,27,ELISA方法,檢測ADV抗原、抗體操作簡單、快速、特異性強，有助于臨床對疾病的早期明確診斷，結果判定用簡單的分光光度計，客觀準確，3 ～ 4h即可出結果，可大批檢測，陽性率遠優(yōu)于病毒分離，亦優(yōu)于血清學技術，適用于流

14、行病學調查。IgM產生早于IgG，有利于早期診斷，IgG產生稍晚，雖不能早期診斷，但相當一部分在7一14天內檢測單份血IgG陽性再結合臨床也可診斷。,28,胸部X線及CT影像表現,肺內表現以多肺葉受累的肺實變?yōu)橹饕卣鳎渲袌F簇狀影尤為突出，此類團簇狀影有較明顯的特征性，常密度較高、邊緣模糊、強化均勻。肺外表現以胸膜增厚和少量胸腔積液為主，少數患者出現縱隔氣腫或氣胸。小氣道改變多見。,29,分子生物學,Alland 和 Saitoh-I

15、nagawa 在六鄰體基因的β- 管狀物形成 P1區(qū)設計了一對引物，應用 PCR 結合 RFLP, 即將腺病毒的特定序列用 PCR 擴增后, 其產物再用限制性內切酶進行酶切圖譜分析優(yōu)點：法分辨率高、重復性好、簡單快速,30,浙江蕭山醫(yī)院目前檢測方法,腺病毒抗原檢測試劑盒（膠體金法）陽性率3.7% （12/322）平均年齡：8月齡，最大15月齡，最小4月齡。北京萬泰PCR-熒光探針（EV71、腸道病毒通用引物、柯薩奇病毒）陽性率12.

16、5%（1/8） 湖南 圣湘,31,五、防治原則,32,腺病毒感染主要在冬春季流行，通過呼吸道和接觸傳播，其預防措施和預防其他呼吸道傳染病相似，主要是勤洗手，勤消毒，避免接觸患者及其呼吸道飛沫；平常多飲水，多吃蔬菜和水果，注意鍛煉身體；室內多通風，保持清潔；冬春流行季節(jié)盡量少去人員密集的公共場所，外出時戴口罩，以防感染。,防 治 原 則,預防,33,正在使用和試用的疫苗有甲醛滅活疫苗和減毒活疫苗。但因腺病毒對新生地鼠有致癌作用，人們對于疫