循環(huán)腫瘤細胞ctc檢測在肺癌中的應用

1、腫瘤疾病近期療效的判斷方法,臨床因子作為預后與預測因子,預后：T, N, M staging, PS score預測：吸煙狀況：指導靶向治療性別：指導靶向治療種族：指導靶向治療組織學：指導化療和靶向治療,影像學方法,非侵入地、直觀地對患者的腫瘤大小變化情況進行評估。 缺點：存在一定的健康危害或健康隱患腫瘤大小常與腫瘤的惡性程度或浸潤能力不完全一致費用昂貴 滯后性靈敏性低,病理學方法,手術或活檢獲得病灶組織/周圍淋

2、巴結組織，進行病理學染色和分析，是目前唯一明確腫瘤有否轉移的金標準缺點：精確度不夠高 是侵入性檢查手段易造成擴散 人工誤差大難以標準化,血清腫瘤標記物測定,血清腫瘤標志物的濃度往往可以在一定程度上提示腫瘤的發(fā)展程度缺點：特異性不高 易受非特異蛋白的干擾 其他的病理生理狀態(tài)影響導致假陽/陰性結果,1869年 Aust Med J，Ashworth最早在轉移性癌癥患者血液中觀察到。2005年 N Engl J Me

3、d，Cristofanilli證實治療前CTC數目是轉移性乳腺癌患者無進展生存期和總生存期的獨立預測因子。,循環(huán)腫瘤細胞指從實體瘤中脫離出來并進入外周血液循環(huán)的腫瘤細胞。,循環(huán)腫瘤細胞,CTC檢測,預測PFS及OS 指示預后效果 復發(fā)轉移預測與分期有助于腫瘤個體化治療的藥物篩選和治療方案的確定是傳統(tǒng)的影像學及其他生物標志物的補充檢測手段有助于尋找新的腫瘤標識物以及開發(fā)新的抗腫瘤藥物,腫瘤細胞作為生物標志物,外周血和肺靜脈血中

4、的循環(huán)腫瘤細胞（CTCs）臨床意義:轉移的輔助標志物？可以預測治療？預后因子？最小損傷的突變檢測?,獲取CTC需要解決的技術問題,從紅細胞和白細胞中富集惡性腫瘤細胞將惡性腫瘤細胞與紅細胞、白細胞、正常上皮細胞、造血干細胞等區(qū)分開來,每10mL血液中可能僅含有幾個到幾十個循環(huán)腫瘤細胞，而10mL血液中含有的白細胞約有1億個，紅細胞有500億個。,三種技術,過濾法,ISET: Isolation by Size of Epi

5、thelial Tumor cells8μm孔徑過濾膜，漏檢體積較小的腫瘤細胞敏感性低,梯度密度法,腫瘤細胞和單核細胞密度小于1.077g/mlCTC純度低，混入較多白細胞腫瘤細胞會遷移至血漿層，而聚集后容易下沉聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)對細胞有毒性,免疫磁珠法,腫瘤細胞表面抗原CTC純度低，混入較多白細胞不能有效排除細胞碎片假陽性和假陰性高,Cell Search---免疫磁珠+流式細胞分析+化學

6、發(fā)光,CellSearch 是全球第一也是唯一經FDA批準可用于臨床的循環(huán)腫瘤細胞（CTC）產品,1983 磁流體,J Clin Oncol. 2011 Apr 20;29(12):1556-63. Epub 2011 Mar 21.Evaluation and prognostic significance of circulating tumor cells in patients with non-small-cell lun

7、g cancer.,背景,實驗流程,,,,,患者入組標準,未做過化療，且4周內未做過放療病理學確診為非小細胞肺癌IIIA, IIIB, IV期準備進行標準的細胞毒療法5年內未患過惡性腫瘤,實驗方法,CellSave 專用收集管采集血液采集血后于室溫儲存并于96小時內進行檢測Cellsearch 系統(tǒng)進行檢測,患者化療前CTC數量（基線CTC）與臨床特征的關系,IV期患者CTC數量明顯多于IIIB期患者， IIIB期患者的CT

8、C數量又明顯多于IIIA期患者。,肝轉移及骨轉移患者中CTC數量明顯多于其它轉移患者。,患者化療前CTC數量與腫瘤轉移地點的關系,所有非小細胞肺癌病人,所有Ⅳ期非小細胞肺癌病人,基線CTC數量與無進展生存期和總生存期的關系,基線CTC數量少于5的患者無進展生存期和總生存期明顯高于基線CTC數量大于等于5的患者。,化療前后CTC數量與患者無進展生存期和總生存期的關系,化療后CTC數量少于5的患者無進展生存期和總生存期明顯高于CTC數量大于

9、5的患者?；熐昂驝TC數量都少于5 的患者無進展生存期和總生存期明顯高于只有一次測出CTC數量少于5的患者。,化療前后CTC的數量變化反映臨床療效,化療前,化療后,化療后CTC數量減少患者的臨床療效好于CTC數量增加的患者,,結 論,CTC能在IV期非小細胞肺癌患者中檢出,CTC數量的變化反映了臨床療效,CTC數量與OS 和PFS相關，是非小細胞肺癌的一個新的預后判斷因子,,,,CTC在判斷是否存在轉移中有重要參考價值,對

10、于原發(fā)性肺癌患者，CTC計數在有遠處轉移的肺癌患者中有顯著升高，相關性優(yōu)于CEA。,CTC升高對于判斷遠處轉移的敏感性達71%，特異性達83%,CTC計數和血清CEA水平在不同切點的診斷價值,治療前和治療后CTC的數量變化反映療效,大多數患者的CTC數量在第一個化療療程后（22天）下降，提示療效好。,The Annals of Thoracic Surgery Volume 87,Issue 6,June 2009, Pages 166

11、9-1675 Circulating Tumor Cells in Pulmonary Venous Blood of Primary Lung Cancer Patients,鱗癌中periCTC和pvCTC的數量明顯高于腺癌,N Engl J Med 2008;359:366-77.Detection of Mutations in EGFR in Circulating Lung-Cancer Cells,背景,CTC中

12、EGFR突變與腫瘤組織中EGFR突變的一致性（SARMS方法）,CTC中EGFR基因型有17個與腫瘤組織中的一樣，準確率為94%，,CTC數量與病情進展的關系,吉非替尼治療后CTC數量下降，伴隨著疾病進展CTC數量也隨之上升。腫瘤大的患者CTC數量比腫瘤小的患者多。,CTC數量,影像學腫瘤變化,檢測CTC中EGFR的基因型與組織中檢測結果高度符合,可以通過CTC來檢測非小細胞肺癌患者腫瘤的基因型,CTC數量與疾病進展密切相關,,,,,

13、結 論,小細胞肺癌患者活檢組織及相對應的CTC中的CD56,活檢組織中的CD56和CTC中的CD56表達具有一致性,肺癌組織,肺癌肝轉移組織,Baseline blood CAC,腫瘤細胞,a, monosomy 6p11-q12;b, amplification EGFR, c-MYC; EGFR (red) 5.p15.3 (green),6p11-q12 (aqua), c-MYC (yellow).c, tris

14、omy CEP3 and monosomy CEP17; d, polysomy CEP3, CEP7,CEP17 and 9p21.3. CEP3 (red),CEP7 (green), CEP17 (aqua),9p21.3 (yellow).,外周循環(huán)腫瘤細胞的異常情況與手術切除的腫瘤細胞具有高度一致性。,Baseline blood CTC,腫瘤細胞,,CTC中的染色體異常分子標記物與疾病的復發(fā)和生存密切相關,,CTC