外周血及胸腔積液中腫瘤細胞的檢測在非小細胞肺癌患者中的臨床意義.pdf

1、目的：
　　肺癌的發(fā)病率和死亡率在中國乃至全世界都居首位。目前對肺癌患者的診斷主要依靠影像學及組織病理學，但仍受到諸多限制。隨著檢測方法的不斷完善，循環(huán)腫瘤細胞（circulating tumor cell, CTC）作為一項新的腫瘤標志物，其特異性及敏感性都得到了不斷提高。本研究通過富集純化系統(tǒng)、特異性小分子探針以及熒光定量PCR系統(tǒng)對CTC進行檢測，評價外周血及胸腔積液中腫瘤細胞計數(shù)對非小細胞肺癌(NSCLC)患者的臨床應用價

2、值。
　　方法：
　　1.病例及樣本：收集2013年1月～2014年6月無錫市第二人民醫(yī)院診斷的73例NSCLC患者（其中50例合并胸腔積液）作為研究對象，同時收集良性肺部疾病患者35例。
　　2.外周血CTC檢測：采集上述各研究組靜脈血標本對CTC進行檢測。應用CTC富集純化系統(tǒng)裂解樣品中的紅細胞并通過免疫磁珠篩選去除白細胞。然后將富集到的CTC用腫瘤特異性葉酸配體—寡聚核苷酸復合物標記，洗滌去除未結(jié)合的復合物，并將

3、與CTC結(jié)合的復合物特異性地洗脫下來進行定量PCR檢測。
　　3.外周血CTC與臨床特征的關系：分析73例初診NSCLC患者術前CTC水平與NSCLC患者年齡、性別及臨床病理參數(shù)之間的關系。利用電化學發(fā)光法檢測血清中CEA與CYFRA21-1的水平，并分析外周血CTC與血清CEA， CYFRA21-1水平的相關性。
　　4. CTC在手術效果中的評價：術后第9天再次采集NSCLC患者外周血并檢測CTC的含量，通過比較手術前后

4、不同時期CTC水平的變化，判斷CTC在手術效果評價中的意義。
　　5. CTC對NSCLC患者的預后評估：利用Kaplan-Meier法評價術前不同外周血CTC水平對NSCLC患者的預后評估價值。
　　6.胸腔積液中腫瘤細胞水平分析：對50例NSCLC合并胸腔積液患者胸腔積液中的腫瘤細胞進行檢測，比較腫瘤細胞在胸腔積液和外周血之間的差異性表達。用全自動電化學發(fā)光分析儀檢測胸腔積液中CEA的水平并分析其與胸腔積液腫瘤細胞水平的

5、相關性。比較胸腔積液中腫瘤細胞檢測與常規(guī)脫落細胞學檢查之間的關系。
　　結(jié)果：
　　1. NSCLC患者外周血CTC計數(shù)顯著高于良性肺部疾病對照組(p＜0.01)。
　　2. CTC水平隨著TNM分期遞進而增加(p＜0.01)，隨著腫瘤病理分化程度升高而降低(p＜0.01)，隨著腫瘤大小增加而增加(p＜0.01)，而與患者年齡、性別以及腫瘤組織類型無明顯關系(p＞0.05)；NSCLC患者外周血術前CTC與CEA水平呈

6、正相關（r=0.543，p＜0.01），與CYFRA21-1水平無相關性（r=-0.067, p＞0.05）。
　　3.初診NSCLC患者組術后第9天的外周血CTC水平顯著低于術前，差異具有統(tǒng)計學意義(t=6.654, p＜0.01)。
　　4. Kaplan-Meier結(jié)果顯示，CTC≥16.5 CU時與NSCLC死亡率相關（χ2=51.21， p＜0.01）。
　　5. NSCLC患者胸腔積液中腫瘤細胞顯著高于外周

7、血中循環(huán)腫瘤細胞水平，且患者胸腔積液中腫瘤細胞數(shù)值與外周血中循環(huán)腫瘤細胞水平相關系數(shù)為0.882(p＜0.0001)，呈顯著正相關。胸腔積液中腫瘤細胞水平和CEA水平呈顯著正相關（r=0.677，p＜0.01）。胸腔積液脫落細胞病理學檢查陽性組腫瘤細胞水平顯著高于陰性組（p＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　NSCLC患者外周血中CTC及胸腔積液中腫瘤細胞表達明顯升高，并且與患者腫瘤發(fā)展、轉(zhuǎn)移及不良預后密切相關，是NSCLC治療