藥學(xué)導(dǎo)論藥物分析

1、“齊二藥”假藥案,2006年4月24日起，中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院有患者使用齊齊哈爾第二制藥廠生產(chǎn)的亮菌甲素注射液后出現(xiàn)急性腎衰竭臨床癥狀。,事件中共有65名患者使用了該批號(hào)亮菌甲素注射液，導(dǎo)致13名患者死亡，另有2名患者受到嚴(yán)重傷害。,廣東省藥品檢驗(yàn)所緊急檢驗(yàn)查明，該批號(hào)亮菌甲素注射液中含有毒有害物質(zhì)二甘醇。經(jīng)衛(wèi)生部、國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局組織醫(yī)學(xué)專家論證，二甘醇是導(dǎo)致事件中患者急性腎功能衰竭的元兇。,經(jīng)食品藥品監(jiān)管部門(mén)、公安部門(mén)聯(lián)合查明

2、，齊二藥廠原輔料采購(gòu)、質(zhì)量檢驗(yàn)工序管理不善，相關(guān)主管人員和相關(guān)工序責(zé)任人違反有關(guān)藥品采購(gòu)及質(zhì)量檢驗(yàn)的管理規(guī)定，購(gòu)進(jìn)了以二甘醇冒充的丙二醇并用于生產(chǎn)亮菌甲素注射液，最終導(dǎo)致嚴(yán)重后果。,“欣弗”不良事件:克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液,6歲的哈爾濱女孩 因?yàn)楦忻白≡?，在注射“欣弗”牌克林霉素注射液后，出現(xiàn)了嚴(yán)重的不良反應(yīng)，最后死亡。,欣弗事件是由于生產(chǎn)流程不合格原因造成的藥物不合格，滅菌效果不達(dá)標(biāo)是導(dǎo)致欣弗事件的主要原因。,反應(yīng)停事件：th

3、alidomide,1957～1962年：在歐洲、北美、非洲、澳洲和日本等國(guó)廣泛使用鎮(zhèn)靜催眠藥治療妊娠嘔吐反應(yīng)，療效極為顯著導(dǎo)致了8 000多例嬰幼兒海豹樣畸形，其中5 000多例死亡。,,沙利度胺致胎兒畸形,第五章 藥物分析學(xué),藥學(xué)導(dǎo)論,藥物的全面質(zhì)量控制包含以下4個(gè)環(huán)節(jié)： 1、研制： 實(shí)驗(yàn)室?原料及制劑標(biāo)準(zhǔn)制訂?指導(dǎo)法令性文件：GLP 2、生產(chǎn) 工廠?質(zhì)檢部?指導(dǎo)法令性文件：GMP 3、供應(yīng) 醫(yī)藥

4、公司?質(zhì)檢部（科）?指導(dǎo)法令性文件：GSP 4、使用 醫(yī)院、藥房?質(zhì)檢科?指導(dǎo)法令性文件：GCP,第一節(jié)、藥物分析的性質(zhì)和任務(wù),（一）藥物分析的性質(zhì),3. 藥物分析,藥物分析是運(yùn)用化學(xué)、物理化學(xué)或生物化學(xué)的方法和技術(shù)研究化學(xué)結(jié)構(gòu)已經(jīng)明確的合成藥物或天然藥物及其制劑的質(zhì)量控制方法，也研究有代表性的中藥制劑和生化藥物及其制劑的質(zhì)量控制方法。,藥物分析的任務(wù) 1、保證臨床用藥的安全和有效藥物 對(duì)臨床用藥進(jìn)行監(jiān)護(hù)，為臨床用藥提

5、供數(shù)據(jù)。2、建立新藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)3、完善和提高現(xiàn)行藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 檢驗(yàn)：包括性狀檢查、藥物鑒 別、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定。,第二節(jié)、藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),（一）我國(guó)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：1、中華人民共和國(guó)藥典：簡(jiǎn)稱中國(guó)藥典(Chinese pharmacopoeia ，ChP)2、國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局藥品標(biāo)準(zhǔn)：簡(jiǎn)稱局頒標(biāo)準(zhǔn) 國(guó)務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門(mén)頒布的《中華人民共和國(guó)藥典》和藥品標(biāo)準(zhǔn)為國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)。藥品必須符合國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)。,建

6、國(guó)以來(lái)，我國(guó)已經(jīng)先后出版了九版藥典： 1953年版、1963年版、1977年版、1985年版、1990年版、1995年版、2000年版、2005年版、 2010年版。 藥典是國(guó)家關(guān)于藥品標(biāo)準(zhǔn)的法典，是國(guó)家管理藥品生產(chǎn)與質(zhì)量的依據(jù)，和其他法令一樣具有約束力。 中國(guó)藥典（2010年版）分為一、二、三部。另專門(mén)出版了《藥品紅外光譜集》。,中國(guó)藥典(Chinese pharmacopoeia ，ChP),中華人民共和國(guó)藥典

7、2010年版,收載的品種：醫(yī)療必須、臨床常用、療效確切、質(zhì)量穩(wěn)定、副作用小，我國(guó)能工業(yè)化生產(chǎn)并能有效控制（或檢驗(yàn)）其質(zhì)量的品種。一部：收載中藥材、植物油脂、單味制劑、中藥成方二部：收載化學(xué)藥品、抗生素、生化藥品、放射性藥品以及藥用輔料等三部：收載生物制品 由凡例（總說(shuō)明）、正文（主要內(nèi)容）、附錄（制劑通則和通用檢查方法）三部分組成。,中國(guó)藥典的內(nèi)容,凡例：對(duì)藥典內(nèi)容的說(shuō)明、注解。使用前，必須逐條地閱讀和理解。正文：為所收載

8、藥品及制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，主要包括藥品性狀、鑒別、檢查、含量測(cè)定、類別、劑量、作用與用途等。附錄：記載了制劑通則、一般雜質(zhì)檢查、一般鑒別試驗(yàn)等通法以及試劑的配制等。 索引：中文、漢語(yǔ)拼音、英文索引。,阿膠,拼音名：Ejiao 英文名：COLLA CORII ASINI

9、 本品為馬科動(dòng)物驢Equus asinus L 的干燥皮或鮮皮經(jīng)煎煮、濃縮制成的固體膠。 【制法】 將驢皮漂泡去毛，切塊洗凈，分次水煎，濾過(guò)，合并濾液，濃縮（

10、可分別加入適量的黃酒、冰糖和豆油）至稠膏狀，冷凝，切塊，晾干，即得。 【性狀】 本品呈長(zhǎng)方形塊、方形塊或狀。黑褐色，有光澤。質(zhì)硬而脆，斷面光亮，碎片對(duì)光照視呈棕色半透明狀。氣微，味微甘。,【鑒別】 取本品粗粉0.2g，置具塞試管中，加6mol/L鹽酸溶液8ml，密塞，置105℃烘箱中加熱6小時(shí) ，加水6ml，搖勻，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?0ml使溶解，作為供試品溶液。另取甘氨酸對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液

11、，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（附錄VI B）試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液2μl、對(duì)照品溶液1μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯酚-0.5%硼砂水溶液（4：1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以0.2%茚三酮乙醇液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。,【檢查】 水分 取本品1g，精密稱定，加水2ml，加熱溶解后，置水浴上蒸干，使厚度不超過(guò)2～3mm，照水分測(cè)定法（附錄Ⅸ H第

12、一法）測(cè)定，不得過(guò)15.0％。 總灰分 取本品1.0g，依法測(cè)定（附錄Ⅸ K），不得過(guò)1.0％。 重金屬 取總灰分項(xiàng)下的殘?jiān)?，依法檢查（附錄Ⅸ E第二法），含重金屬不得過(guò)百萬(wàn)分之三十。 砷鹽

13、 取本品2.0g，加氫氧化鈣1g，混合，加少量水，攪勻，干燥后先用小火燒灼使炭化，再在500～600℃熾灼使完全灰化，放冷，加鹽酸 3ml與適量的水使溶解成30ml，分取溶液10ml，加鹽酸4ml 與水14ml，依法檢查（附錄Ⅸ F），不得過(guò)百萬(wàn)分之三。 水不溶物 取本品1.0g，精密稱定，加水10ml，加熱溶解，將溶液移入已恒重的10ml

14、離心管中，離心，去除管壁浮油，傾去上清液，沿管壁加入溫水至刻度，離心，如法清洗3次，傾去上清液，離心管在105 ℃加熱2小時(shí) ，取出，置干燥器中冷卻30分鐘，精密稱定，計(jì)算，即得。 本品水不溶物不得過(guò)2.0%。 揮發(fā)性堿性物質(zhì) 取本品約5g，精密稱定，置100ml 量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml， 置凱氏燒瓶中，立刻加1%氧化鎂混懸溶液5ml，迅速密塞，通入水蒸氣進(jìn)行蒸餾，

15、以2%硼酸溶液5ml 為接收液，加甲基紅溴甲酚綠混合指示液5 滴，從滴出第一滴凝結(jié)水珠時(shí)起，蒸餾7 分鐘停止，餾出液照氮測(cè)定法（附錄Ⅸ L第二法）測(cè)定，即得。 本品每100g中含揮發(fā)性堿性物質(zhì)以氮（N）計(jì)，不得過(guò)0.10g 。 其他 應(yīng)符合膠劑項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定（附錄Ⅰ G）。,【含量測(cè)定】 取本品粉末0.2g，精密稱定，照氮測(cè)定法（附錄IX L第一法）測(cè)定，即得。

16、 本品含總氮（N）量不得少于13.0％。 【炮制】 阿膠 搗成碎塊。 阿膠珠 取阿膠，烘軟，切成丁，照燙法（附錄Ⅱ D）用蛤粉燙至成珠，內(nèi)無(wú)溏心。 【性味與歸經(jīng)】 甘，平。歸肺、肝、腎經(jīng)。

17、【功能與主治】 補(bǔ)血滋陰，潤(rùn)燥，止血。用于血虛萎黃，眩暈心悸，肌痿無(wú)力，心煩不眠，虛風(fēng)內(nèi)動(dòng)，肺燥咳嗽，勞嗽咯血，吐血尿血，便血崩漏，妊娠胎漏。 【用法與用量】 烊化兌服，3～9g。 【貯藏】 密閉。,（二）國(guó)外藥典,美國(guó)藥典(The United States Pharmacopoeia， 縮寫(xiě)為USP)：現(xiàn)為30版。美國(guó)國(guó)家處方集(The National Formulary，

18、縮寫(xiě)為NF)：現(xiàn)為25版。 合并為一冊(cè)出版，縮寫(xiě)為USP(30)-NF(25)。英國(guó)藥典(British Pharmacopoeia，縮寫(xiě)為BP)：目前版本為2005年版。,日本藥局方：本書(shū)縮寫(xiě)為JP ?，F(xiàn)為第15版。歐洲藥典(European Pharmacopoeia，縮寫(xiě)為Ph．Eup)：目前版本為第5版，自1980年開(kāi)始出版，分為兩部。 國(guó)際藥典(The International Phamacopoeia，縮

19、寫(xiě)為Ph．Int)：目前為第三版，分為5卷。,中華人民共和國(guó)藥典（Ch.P） 2010年版 美國(guó)藥典（USP） USP30-NF25 英國(guó)藥典（BP） BP2007 日本藥局方（JP） JP15 歐洲藥典（Ph. Eur）

20、 EP5.0 國(guó)際藥典（Ph. Int.） 第三版,藥品質(zhì)量管理規(guī)范,《藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范》(Good Laboratory Practice，GLP)《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》 (Good Manufacturing Practice，GMP)《藥品經(jīng)營(yíng)質(zhì)量管理規(guī)范》(Good Supply Practice，GSP)《藥物臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理

21、規(guī)范》 (Good Clinical Practice，GCP) ：,三、藥品檢驗(yàn)工作的基本內(nèi)容,（一）取樣(Sampling),應(yīng)考慮取樣的科學(xué)性、真實(shí)性和代表性，取樣的基本原則應(yīng)該是均勻、合理。固體原料藥用取樣探子取樣。,取樣量： 設(shè)樣品總件數(shù)為x當(dāng)x≤3時(shí)，每件取樣,當(dāng)x≤300時(shí)，,當(dāng)x﹥300時(shí)，,（二）性狀檢查原料藥：外觀性狀，溶解度，熔點(diǎn)，比旋度等。制劑：劑型，外觀形狀，色澤，片芯顏色等。（三）鑒別試驗(yàn)

22、 判斷真?zhèn)危ㄋ模┫薅葯z查包括有效性、均一性、純度要求及安全性四個(gè)方面。,（五）含量測(cè)定： 一般采用化學(xué)分析方法或理化分析方法，測(cè)定藥物中主要有效成分的含量。（六）寫(xiě)出檢驗(yàn)報(bào)告： 全部項(xiàng)目檢驗(yàn)完畢后，寫(xiě)出檢驗(yàn)報(bào)告，并根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果作出明確的結(jié)論。 檢驗(yàn)報(bào)告中應(yīng)包括藥品名稱、制劑規(guī)格以及檢驗(yàn)項(xiàng)目，是否符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（哪種標(biāo)準(zhǔn)、版本等）。,2. 日期（取樣、檢驗(yàn)、報(bào)告等）；,3. 檢驗(yàn)情況（

23、依據(jù)、項(xiàng)目、操作步驟、數(shù)據(jù)、計(jì)算結(jié)果、結(jié)論等）；,4. 若需修改，只可劃線后重寫(xiě)，并簽章；,（七）原始記錄 完整、真實(shí)、具體,1. 供試品情況（名稱、批號(hào)、規(guī)格、數(shù)量、來(lái)源、外觀、包裝等）；,修改方式：劃1條或2條細(xì)線，在右上角書(shū)寫(xiě)正確數(shù)字，并簽章,2,05,3,張杰,張杰,張杰,,,,5. 記錄完成后，需復(fù)核，并由復(fù)核人簽章。復(fù)核后的記錄，屬內(nèi)容和計(jì)算錯(cuò)誤的，由復(fù)核人負(fù)責(zé)；屬檢驗(yàn)操作錯(cuò)誤的，由檢驗(yàn)人負(fù)責(zé)。,品名

24、 包裝規(guī)格批號(hào) 廠牌來(lái)源數(shù)量 取樣日期取樣數(shù)量 報(bào)告日期檢驗(yàn)依據(jù)檢驗(yàn)記錄結(jié)論復(fù)核人 檢驗(yàn)人,檢驗(yàn)記錄(省略上半頁(yè)),[檢查]溶液顏色 = 0.02,符合規(guī)定,熾灼殘?jiān)?6# 16.5572g + 樣1.0124g→ 700℃→放置45′→17.5693g,符合規(guī)定,[鑒別

25、] 樣0.2g + 1滴NaoH T.S.→黑色↓,符合規(guī)定,[性狀] 白色粉末,符合規(guī)定,[含量測(cè)定],碘液0.1026mol/L,符合規(guī)定,0.00 → 22.95ml,（二） 檢驗(yàn)報(bào)告書(shū) 完整、簡(jiǎn)潔，結(jié)論明確。除無(wú)操作步驟外其它內(nèi)容同原始記錄。,（三）結(jié)論,1. 全面檢驗(yàn)均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。如：本品為“維生素C”，符合中國(guó)藥典（2005年版）的各項(xiàng)規(guī)定。,,2. 全面檢驗(yàn)后有個(gè)別項(xiàng)目不符合規(guī)定。,本品為“葡萄糖”；乙醇

26、溶液的澄清度項(xiàng)不符合規(guī)定，其他各項(xiàng)檢驗(yàn)均符合中國(guó)藥典（2005年版）的規(guī)定?？筛淖鳌翱诜咸烟恰庇?，但不得供制備注射劑用。,3. 全面檢驗(yàn)后不符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，或雖未全面檢驗(yàn)、但主要項(xiàng)目不符合規(guī)定，可作“不得供藥用”處理。如：,本品為“葡萄糖注射液”，其熱原檢查不符合中國(guó)藥典（2005年版）的規(guī)定，不得供藥用。,4. 根據(jù)送檢者要求，僅作個(gè)別項(xiàng)目檢驗(yàn)者。如：,本品（維生素B12注射液）的pH值為5.5，“pH值”項(xiàng)符合中國(guó)藥典（2005年版

27、）的規(guī)定（pH值 應(yīng)為4.0-6.0）,檢驗(yàn)報(bào)告書(shū)(省略上半頁(yè)),例,溶液顏色 ≤0.07 =0.02 符合規(guī)定,負(fù)責(zé)人 羅紅 復(fù)核人 羅紅 檢驗(yàn)人 張杰,結(jié)論 本品經(jīng)檢驗(yàn)，符合(中國(guó)藥典2005年版)規(guī)定,[含量] ≥99.0％ 99.8% 符合規(guī)定,熾灼殘?jiān)?≤0.1% 0.03%

28、 符合規(guī)定,[檢查],[鑒別] 應(yīng)生成黑色↓ 生成↓黑 符合規(guī)定,[性狀] 應(yīng)為白色粉末 白色粉末 符合規(guī)定,檢驗(yàn)項(xiàng)目 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定 檢驗(yàn)結(jié)果 結(jié)論,,,,藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂,原則安全有效性先進(jìn)性針對(duì)性“安全有效，技術(shù)先進(jìn)，經(jīng)濟(jì)合理，不斷完善”研究及制訂藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)文獻(xiàn)資料的查閱及整理對(duì)有關(guān)研究資料的了解藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制訂工作的長(zhǎng)期性,五、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法

29、驗(yàn)證,專屬性線性范圍準(zhǔn)確度精密度檢測(cè)限定量限耐用性,（一）專屬性,定義：指在樣品介質(zhì)中有其他組分共存時(shí)該方法對(duì)供試物質(zhì)準(zhǔn)確而專屬的測(cè)定能力。方法：應(yīng)著重考慮雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、相關(guān)化合物以及制劑輔料等其他組分是否對(duì)被測(cè)藥物的測(cè)定有干擾。一般通過(guò)添加上述物質(zhì)的樣品與未曾添加的樣品所得分析結(jié)果進(jìn)行比較而確定。,（二）線性與范圍 (linearity and range),1、定義：線性：在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)

30、物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。線性范圍：指利用一種方法取得精密度、準(zhǔn)確度均符合要求的試驗(yàn)結(jié)果，而且成線性的供試物濃度的變化范圍，其最大量與最小量之間的間隔，可用mg／L ~ mg／L、 ug／ml ~ ug／ml等表示。,2、方法： 線性與范圍的確定可用作圖法(響應(yīng)值Y／濃度X)或計(jì)算回歸方程(Y＝a+bX)來(lái)研究建立。 采用相關(guān)系數(shù)(r)表示標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性度、并控制r≥0.9900。 對(duì)

31、照品的LOQ必須包括在線性范圍。,（四）準(zhǔn)確度(Accuracy),1、定義： 指測(cè)得結(jié)果與真實(shí)值接近的程度，表示分析方法測(cè)量的正確性。通常采用回收率試驗(yàn)來(lái)表示。2、方法：回收試驗(yàn)法：空白+已知量A的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，測(cè)定值為M,,制劑可采用空白輔料中加入原料藥對(duì)照品法。還應(yīng)作單獨(dú)輔料的空白測(cè)定。,加樣回收試驗(yàn) 已準(zhǔn)確測(cè)定藥物含量P的真實(shí)樣品+已知量A的對(duì)照品（或標(biāo)準(zhǔn)品）測(cè)定，測(cè)定值為M,數(shù)據(jù)要求 規(guī)定的

32、范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次。,（五）精密度(Precision),定義：指用該法多次測(cè)定同一勻質(zhì)樣品的測(cè)量值彼此符合的程度。常用 標(biāo)準(zhǔn)差（SD）或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）表示。,在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度；在規(guī)定的范圍內(nèi)，至少用9次測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)，如制備三個(gè)不同濃度樣品各測(cè)三次或把被測(cè)物濃度當(dāng)作100%，至少測(cè)6次進(jìn)行評(píng)價(jià)。,同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密

33、度?？疾祀S機(jī)變動(dòng)因素的影響。變動(dòng)因素為不同日期、不同分析人員、不同設(shè)備。,1. 重復(fù)性,2. 中間精密度,不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。如建立藥典分析方法時(shí)通過(guò)協(xié)同檢驗(yàn)得出重現(xiàn)性結(jié)果，協(xié)同檢驗(yàn)的過(guò)程、重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說(shuō)明中。,3. 重現(xiàn)性,（六）檢測(cè)限(limit of detection，LOD),1、定義：,系指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量。是限度試驗(yàn)參數(shù)，無(wú)需定

34、量測(cè)定。常用%、ppm、ppb表示。 它既反映方法與儀器的靈敏度和噪音的大小，也表明樣品經(jīng)處理后空白(本底)值的高低。,2、方法：儀器分析方法：用已知濃度樣品與空白試驗(yàn)對(duì)照，記錄測(cè)得的被測(cè)藥物信號(hào)強(qiáng)度S與噪音(或背景信號(hào))強(qiáng)度N，以能達(dá)到S／N＝2或S／N＝3時(shí)的樣品最低藥濃為L(zhǎng)OD；也可通過(guò)多次空白試驗(yàn)，求得其背景響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)差，將三倍空白標(biāo)準(zhǔn)差(即3δ空或3S空)作為檢測(cè)限的估計(jì)非儀器分析方法：通過(guò)已知濃度的樣品分析來(lái)確

35、定可檢出的最低水平作為檢測(cè)限。,（七）定量限 (limit of quantitation，LOQ),1、定義：,指在具有一定準(zhǔn)確度和精密度的前提下，分析方法能夠測(cè)定出樣品中藥物的最低濃度。 它反映了分析方法測(cè)定低藥物濃度樣品時(shí)具有的可靠性。 它與上述的檢測(cè)限的差別在于：定量限要定量測(cè)定某一藥物在樣品介質(zhì)中的最低濃度，且定量限規(guī)定的最低濃度應(yīng)該符合一定的精密度和準(zhǔn)確度的要求。,2、方法：非儀器分析方法：與檢測(cè)限的

36、確定方法相同；儀器分析方法：往往將多次空白試驗(yàn)測(cè)得的背景響應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)差(即空白標(biāo)準(zhǔn)差) )乘以10，作為定量限的估計(jì)值。,耐用性 (robustness),定義：指利用相同的方法在各種正常實(shí)驗(yàn)條件下 對(duì)同一樣品進(jìn)行分析所得結(jié)果的重現(xiàn)程度。 所謂各種正常實(shí)驗(yàn)條件，包括不同的實(shí)驗(yàn)室、不同的分析人員、不同的儀器、不同批號(hào)的試劑、不同的測(cè)試耗用時(shí)間、不同的分析溫度、不同的測(cè)定

37、日期等等。,第三節(jié) 藥物分析的新技術(shù)與新方法,一、在體采樣技術(shù)常規(guī)：給藥后處死動(dòng)物，測(cè)體液或組織器官中藥物及其代謝物濃度，藥動(dòng)學(xué)參數(shù)?，F(xiàn)采用載體留針技術(shù)、微電極探測(cè)技術(shù)或微透析在體采樣技術(shù)，在活動(dòng)物體內(nèi)不同部位連續(xù)、多次取樣，數(shù)據(jù)可靠、重現(xiàn)。,二、分析技術(shù),（一）基質(zhì)輔助激光解吸附質(zhì)譜技術(shù)（MALDL-MS）20世紀(jì)80年代未，基質(zhì)輔助激光解吸離子化和電噴霧離子化出現(xiàn)，質(zhì)譜技術(shù)應(yīng)用在測(cè)定生物大分子方面?；驹硎菍⒎治鑫锓稚⒃诨?/p>

38、質(zhì)分子中并形成晶體，當(dāng)用激光照射晶體時(shí)，由于基質(zhì)分子經(jīng)輻射所吸收的能量，導(dǎo)致能量蓄積并迅速產(chǎn)熱，從而使基質(zhì)晶體升華，致使基質(zhì)和分析物膨脹并進(jìn)入氣相。,（二）親和色譜法 affinity chromatography用連接在基體上的配位體作為固定相，使其與蛋白質(zhì)或其他大分子發(fā)生可逆的高選擇性的相互作用，利用不同親和力進(jìn)行分離的液相色譜法。 在生物體內(nèi)，許多大分子具有與某些相對(duì)應(yīng)的專一分子可逆結(jié)合的特性。例如抗原和抗體、酶和底物及輔酶、

39、激素和受體、RNA和其互補(bǔ)的DNA等，都具有這種特性。,親和色譜中兩個(gè)進(jìn)行專一結(jié)合的分子互稱對(duì)方為配基。如抗原和抗體，抗原可認(rèn)為是抗體的配基，反之抗體也可認(rèn)為是抗原的配基。將一個(gè)水溶性配基在不傷害其生物學(xué)功能的情況下與水不溶性載體結(jié)合稱為配基的固相化。,親和色譜法的基本過(guò)程是： 1.配基固相化。將與純化對(duì)象有專一結(jié)合作用的物質(zhì)，連接在水不溶性載體上，制成親和吸附劑后裝柱（稱親和性）。 2.親和吸附。將含有純化對(duì)象的混合物通過(guò)親和柱，

40、純化對(duì)象吸附在柱上，其他物質(zhì)流出色譜柱。 3.解吸附。用某種緩沖液或溶液通過(guò)親和柱，把吸附在親和柱上的欲純化物質(zhì)洗脫出來(lái)。,特點(diǎn)：特異性、純度高、靈敏度好。應(yīng)用前景：脫線親和色譜和在線親和色譜,（三）毛細(xì)管電泳（Capillary Electrophoresis, CE高效毛細(xì)管電泳（HPCE）,是指離子或帶電粒子以毛細(xì)管為分離室,以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力,依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實(shí)現(xiàn)分離的液相分離分析技術(shù)。,

41、隨著生命科學(xué)的發(fā)展， CE開(kāi)始主要用于蛋白質(zhì)，多肽的分析,以后逐漸被廣泛應(yīng)用于生物，化學(xué)，醫(yī)藥，環(huán)保等領(lǐng)域。它具有分離效率高，分析速度快，樣品及試劑用量少,潔凈無(wú)污染等特點(diǎn)。,CE技術(shù)的應(yīng)用,毛細(xì)管電泳技術(shù)不僅在基礎(chǔ)科學(xué)中得到廣泛應(yīng)用，在臨床醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的應(yīng)用也有較多應(yīng)用。如臨床疾病診斷、臨床蛋白分析、臨床藥物監(jiān)測(cè)、代謝研究、病理研究、同工酶分析、PCR產(chǎn)物分析、DNA片段及序列分析等。,（四）毛細(xì)管電色譜（Capillary Elec

42、trochromatography, CEC）1981：Jorgeson首次報(bào)道采用毛細(xì)管電色譜（CEC）進(jìn)行多環(huán)芳烴分離的研究標(biāo)志著現(xiàn)代電色譜的開(kāi)端。1990：第一臺(tái)商品化儀器問(wèn)世。2000：達(dá)到頂峰。,毛細(xì)管電色譜是將高效液相色譜（HPLC）的固定相填充到毛細(xì)管中，或在毛細(xì)管內(nèi)壁涂布固定相，以電滲流為流動(dòng)相驅(qū)動(dòng)力的色譜過(guò)程。此模式兼具電泳和液相色譜的模式。 如核酸/核苷酸、蛋白質(zhì)/多肽/氨基酸、糖類/糖蛋白、酶、氨基酸、對(duì)映

43、體,人類基因測(cè)序已基本完成，人類基因組計(jì)劃進(jìn)入后基因組時(shí)代。但人類基因組圖譜并沒(méi)有告訴我們所有基因的“身份”以及它們所編碼的蛋白質(zhì)。人體內(nèi)真正發(fā)揮作用的是蛋白質(zhì)，其中可能藏著開(kāi)發(fā)疾病診斷方法和新藥的“鑰匙”。一個(gè)以“蛋白質(zhì)組”為重點(diǎn)的生命科學(xué)的新時(shí)代到來(lái)，需要對(duì)蛋白質(zhì)更多的研究，新技術(shù)和新方法將發(fā)揮更大的作用。,1.經(jīng)典的DNA分子標(biāo)記技術(shù)2.基于PCR的DNA分子標(biāo)記技術(shù)隨機(jī)引物擴(kuò)增PCR技術(shù)PCR擴(kuò)增的片段長(zhǎng)度多態(tài)技術(shù)