第六章食品中藥物殘留的檢測(cè)分析

1、1,第六章 食品中藥物殘留的檢測(cè),2,第一節(jié) 藥物殘留概述,一、藥物殘留的概念及分類 現(xiàn)代化的畜禽生產(chǎn)中，普遍使用抗生素類藥物。在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上，抗生素可以防治病蟲(chóng)害，刺激植物生長(zhǎng)，提高產(chǎn)量。造成了抗生素在食品中的殘留。,3,,為了達(dá)到投入少量的飼料而獲得更多畜產(chǎn)品的目的，往往使用激素來(lái)促進(jìn)畜禽的生長(zhǎng)發(fā)育。常用于食品動(dòng)物的激素為性激素具有促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育、增加體重和同步發(fā)情等作用，廣泛用于畜牧業(yè)生

2、產(chǎn)中，通過(guò)飼料添加劑或皮下置入等方法而攝入牲畜體內(nèi)，造成了肉食品中激素殘留而影響人體健康。 食用含有藥物殘留的食品，使人類的健康受到了極大的危害，引起了世界各國(guó)的關(guān)注。因此，對(duì)食品中藥物殘留情況，必須加以監(jiān)測(cè)，以保證食用安全。,4,藥物使用后，部分藥物被分解或直接排出體外，另一部分將殘留在畜禽體內(nèi)，這種殘留稱為藥物殘留(residue of drugs， residue of veterinary drugs)。,,5,主要?dú)埩羲?/p>

3、物有以下幾類：,1．抗生素類：包括青霉素、鏈霉素、金霉素、土霉素、四環(huán)素、泰樂(lè)菌素等。 2．呋喃藥類：包括呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃呾啶等。 3．磺胺藥類； 4. 抗球蟲(chóng)藥； 5. 激素藥類； 6. 驅(qū)蟲(chóng)藥類。,6,二、藥物對(duì)食品的污染及危害,(一)藥物對(duì)食品的污染 1．預(yù)防和治療畜禽疾病 2．作為飼料添加劑使用 3．保鮮：在食品的保鮮過(guò)程中，有時(shí)加

4、入某種抗生素以抑制微生物的生長(zhǎng)、繁殖，使用后也會(huì)對(duì)食品造成污染。,7,（二）藥物的殘留對(duì)人體的危害,藥物雖然有預(yù)防和治療疾病的作用，但同時(shí)對(duì)機(jī)體也產(chǎn)生有害的作用。藥物與毒物之間并無(wú)明顯的界限，有些毒物在適當(dāng)?shù)膭┝繒r(shí)具有治療作用，而所有藥物過(guò)量或應(yīng)用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，均有毒性。殘留的藥物對(duì)人體的不良影響主要有： 1．毒性作用 2．使某些細(xì)菌產(chǎn)生抗藥性 3．過(guò)敏反應(yīng) 4．造成菌群失調(diào) 5．

5、致癌作用：現(xiàn)已證明殘留在食品中的克球粉、雌激素具有致癌作用。,8,三、各種藥物的使用原則,（一）合理配伍用藥 畜禽發(fā)生疾病以后要正確診斷，合理用藥，能用一種藥的情況下不用多種藥。（二）按國(guó)家規(guī)定的范圍、劑量使用藥物 各國(guó)政府都嚴(yán)格規(guī)定了各種藥物的使用條件。多數(shù)國(guó)家規(guī)定對(duì)生命期短的食用動(dòng)物禁止應(yīng)用雌激素。,9,（三）使用獸用專用藥物 一些國(guó)家規(guī)定，凡是人類經(jīng)常使用的抗生素及其藥物不能作為畜禽飼料添加劑。世界衛(wèi)生

6、組織不主張用鏈霉素飼喂動(dòng)物，以免產(chǎn)生耐藥性菌株。 （四）要有一定的休藥期 所謂的休藥期是指食品動(dòng)物從停止給藥到許可屠宰或它們的產(chǎn)品許可上市的間隔時(shí)間。 此時(shí)間的規(guī)定是根據(jù)上述物質(zhì)在動(dòng)物體內(nèi)代謝的消除率和殘留量不致影響人體健康為依據(jù)的。,10,第二節(jié) 食品中抗生素的測(cè)定,抗生素種類繁多，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，測(cè)定方法各不相同。因而給檢測(cè)工作帶來(lái)了許多困難?？股氐臏y(cè)定方法進(jìn)展很快。主要可分為微生物測(cè)定法，化學(xué)測(cè)定法

7、和物理測(cè)定法三大類。,11,,其中以微生物測(cè)定法應(yīng)用較廣。因其測(cè)定原理基于抗生素對(duì)微生物的生理機(jī)能和代謝作用的抑制，所用試劑數(shù)量少，儀器簡(jiǎn)單。如牛乳中TTC測(cè)定法，肉中四環(huán)素杯蝶測(cè)定法都屬于微生物分析法，但這類方法測(cè)定時(shí)間較長(zhǎng)，且結(jié)果誤差較大。,12,化學(xué)測(cè)定法和物理測(cè)定法則利用抗生素中某些基團(tuán)的特殊性質(zhì)或反應(yīng)來(lái)測(cè)定其含量的分析方法。包括比色法、熒光分光光度法、氣相色譜法和高效液相色譜法。,13,一、高效液相色譜 HPLC,（一）高效

8、液相色譜法的特點(diǎn) 1．分離效能高 2．選擇性高 3．檢測(cè)靈敏度高 4．分析速度快 對(duì)于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、相對(duì)分子質(zhì)量大的有機(jī)物原則上都可用HPLC進(jìn)行分離、分析。目前已廣泛應(yīng)用于化工、食品、醫(yī)藥、生化、衛(wèi)生、環(huán)境保護(hù)和高能化合物等生產(chǎn)和科研工作中。,14,二、四環(huán)素類抗生素殘留量的測(cè)定,食品中四環(huán)素類抗生素的測(cè)定多采用微生物法。 （一）原理 樣品經(jīng)提取，用

9、離子交換樹(shù)脂分離，甲醇溶劑洗脫，經(jīng)濃縮，殘?jiān)肕cllvaine緩沖液溶解，經(jīng)熒光鑒定，然后用微生物法進(jìn)行定量測(cè)定。本方法的最低檢出量為0.05mg/kg。,15,,（二）其它抗生素也可用此法進(jìn)行測(cè)定，只是試驗(yàn)的菌種不同或培養(yǎng)基不同。測(cè)定青霉素為金黃色葡萄球菌，鏈霉素或雙氫鏈霉素為枯草桿菌（6633），氯霉素為卵黃色八疊球菌（9341），新生霉素為白色葡萄球菌。,16,三、鏈霉素殘留量的測(cè)定（比色分析法）,（一）原理 在酸性條件下，鏈

10、霉素可與二硝基苯肼反應(yīng)生成黃色的鏈霉素二硝基苯腙；多余的試劑經(jīng)乙酸丁酯提取除去后，于430nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)曲線求出樣品中鏈霉素的含量。,17,四、鮮乳中抗生素殘留量的測(cè)定（TTC試驗(yàn)）,（一）原理 當(dāng)乳中含有抗生素時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)菌株嗜熱鏈球菌的生長(zhǎng)受到抑制，不能將指示劑2,3,5—氯化三苯基四氮唑（TTC）還原為無(wú)色。反之，當(dāng)乳中抗生素不存在時(shí)，加入的標(biāo)準(zhǔn)菌株，就會(huì)大量生長(zhǎng)繁殖，而且將TTC還原為紅色化合物。其紅色強(qiáng)度與細(xì)菌數(shù)

11、量成正比。 本法對(duì)各種抗生素的最低檢出量：青霉素為0.004IU/mL，鏈霉素為0.5IU/mL，慶大霉素為0.4IU/mL,18,（二）注意事項(xiàng) 1.本法的正確性與菌種的活力有密切關(guān)系。如菌種活力減弱時(shí)，應(yīng)多次反復(fù)傳代加強(qiáng)活力。 2.每次檢驗(yàn)每個(gè)樣品應(yīng)一式二份，另外要作陰性、陽(yáng)性對(duì)照各2管，陰性對(duì)照管作無(wú)抗生素乳9mL，陽(yáng)性對(duì)照管用無(wú)抗生素乳9mL加抗生素。

12、 3.水浴培養(yǎng)要避光，保持37℃，水面高于被檢樣品，判斷要迅速；檢樣經(jīng)80℃水浴加熱5min，要嚴(yán)格掌握。 4.制備培養(yǎng)基的乳要絕對(duì)無(wú)抗生素存在；操作所用試管、吸管均須經(jīng)滅菌。,,19,第三節(jié) 食品中激素的測(cè)定,由于動(dòng)物性食品中性激素的含量極微，所以一般的測(cè)定方法受到了限制，較常用的方法有薄層色譜法、熒光分析法、氣相色譜法和高效液相色譜法等。其中高效液相色譜法具有更大的優(yōu)越性，并有取代其它方法之勢(shì)。

13、 一、性激素總量的測(cè)定（薄層色譜法） （一）原理 樣品中的性激素經(jīng)有機(jī)溶劑提取、濃縮，在硅膠G薄層板上點(diǎn)樣、展開(kāi)后，以硫酸顯色，與標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)進(jìn)行比較，從而達(dá)到定性和半定量的目的。,20,硅膠H 硅膠中未加入粘合劑硅膠G 硅膠中加入粘合劑石膏硅膠S 硅膠中加入粘合劑淀粉硅膠HF254 硅膠H中加入波長(zhǎng)254nm熒光物質(zhì)硅膠GF254 硅膠G中加入波長(zhǎng)254nm熒

14、光物質(zhì),常見(jiàn)的幾種硅膠吸附劑,21,（二）注意事項(xiàng) 1.薄層色譜法可用于性激素的鑒別、半定量測(cè)定以及含量測(cè)定前的分離。 2.由于性激素的種類多，故所用的溶劑系統(tǒng)、吸附劑、展開(kāi)劑和顯色劑不能一概而論?？筛鶕?jù)具體情況，挑選效果最佳者使用。,22,二、雌激素殘留量的測(cè)定（包括己烯雌酚的測(cè)定）（熒光分光光度法),（一）熒光分光光度法 1. 原理 樣品中雌激素經(jīng)鹽酸水解為甾體綴合物，用有機(jī)溶劑提取后，再經(jīng)硫酸

15、處理，在紫外光照射下，產(chǎn)生藍(lán)色熒光；其激發(fā)波長(zhǎng)542nm，發(fā)射波長(zhǎng)560nm，根據(jù)熒光強(qiáng)度，可測(cè)定雌激素的含量。,23,2. 注意事項(xiàng) (1)本法測(cè)定的是雌激素的總量，包括雌酮、雌二醇和雌三醇。 (2)操作過(guò)程中加入氫醌，可防止熒光產(chǎn)物氧化，增進(jìn)熒光的穩(wěn)定性；二氯甲烷溶劑中加入對(duì)—硝基苯酚也起增進(jìn)熒光穩(wěn)定性的作用。 (3)因?yàn)榇萍に赜蟹恿u基存在而呈弱酸性，用碳酸氫鈉緩沖液（pH 10.5）洗滌，可將那

16、些強(qiáng)酸性物質(zhì)洗掉。,24,(4)測(cè)定中用NaOH振搖，可使雌激素轉(zhuǎn)入NaOH 液層，而中性甾體仍留在有機(jī)相中，起到清除雜質(zhì)的作用。 (5)在作乙醚提取之前，加入固體碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH至10，是乙醚定量提出雌激素的關(guān)鍵。,25,(二）液相色譜法,1.原理 試樣勻漿后，以甲醇提取過(guò)濾，注入HPLC柱中，以紫外檢測(cè)器鑒定。于波長(zhǎng)230nm處測(cè)定吸光度，同條件下繪制工作曲線，己烯雌酚含量與吸光度值在一定濃度范圍內(nèi)成正比，試樣與工

17、作曲線比較定量。本法適用于新鮮雞肉、牛肉、豬肉、羊肉中己烯雌酚殘留量的測(cè)定。,26,,2.分析步驟 （1）提取及凈化：甲醇 （2）色譜條件 （3）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 （4）測(cè)定,27,3. 注意事項(xiàng) （1）對(duì)主要影響因素甲醇、磷酸二氫鈉、pH采用正交試驗(yàn)選擇最佳實(shí)驗(yàn)條件。 （2）本法采用兩次提?。状迹x心、過(guò)濾，回收率高，但靈敏度不太高。 （3）使用流動(dòng)相時(shí)，預(yù)先進(jìn)行超聲波脫氣，以防氣泡堵塞色譜柱。,