雞包涵體肝炎病毒DNA探針的制備及其斑點雜交方法的建立.pdf

1、雞包涵體肝炎(chicken inclusion body hepatitis,IBH)是由禽腺病毒引起的一種急性傳染病，已知有12種血清型的禽腺病毒與本病有關(guān)。病雞死亡突然增多，嚴(yán)重貧血、黃疸、肝臟腫大出血和壞死灶，可見肝細(xì)胞核內(nèi)有包涵體。該病又稱貧血綜合征。禽腺病毒主要侵害肝臟組織，并在感染細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生核內(nèi)包涵體。據(jù)報道我國山東地區(qū)以及內(nèi)蒙地區(qū)雞包涵體肝炎流行的致病毒株血清型主要為血清八型。因其可導(dǎo)致肉雞蛋雞的生產(chǎn)性能的下降，以及導(dǎo)致

2、免疫抑，造成免疫失敗或易發(fā)繼發(fā)感染，因而得到越來越多的關(guān)注。然而生產(chǎn)實踐中尚未有一種簡潔、快速、經(jīng)濟(jì)的檢測方法，斑點雜交技術(shù)憑借簡單的操作和較好的成本控制成為了比較理想的選擇。
　　 參考相關(guān)文獻(xiàn)設(shè)計一對引物，同時根據(jù)NCBI GenBank數(shù)據(jù)庫中禽腺病毒各種血清型Hexon六鄰體蛋白基因的保守序列設(shè)計一對引物用以相互輔證，通過PCR擴(kuò)增疑似病例的肝臟病料，得到相應(yīng)大小的目的產(chǎn)物，目的條帶經(jīng)過切膠回收、純化后，進(jìn)行克隆轉(zhuǎn)化，獲

3、得重組菌，挑取十二個克隆進(jìn)行測序，序列比對后有十株重組菌序列與禽腺病毒血清八型序列同源性在百分之九十八以上，最高達(dá)百分之九十八點八。
　　 提取重組菌質(zhì)粒酶切后，用地高辛標(biāo)記即為包涵體肝炎病毒核酸探針，探針進(jìn)行靈敏度檢測表明該探針的最小檢出量為1pg，特異性檢測表明探針與其他病毒核酸無交叉反應(yīng)。通過條件優(yōu)化后建立斑點雜交檢測方法，并檢測山東部分地區(qū)采集的病料。
　　 處理疑似病料接種雞胚腎細(xì)胞，經(jīng)過傳代回收細(xì)胞DNA，并