基于納米探針技術的DNA雜交分析與免疫分析方法研究.pdf

1、DNA雜交分析及免疫分析在生命科學研究中具有重要的意義，廣泛應用于生物學、醫(yī)學診斷等方面。已有分析方法的局限性促使研究者們積極的研究普遍適用性好、操作簡便、靈敏度高的DNA雜交檢測及免疫檢測新方法。 本文將納米探針技術與高靈敏化學發(fā)光技術結合應用于DNA雜交檢測及免疫檢測，對特定序列的寡聚核苷酸，人IgG及黃曲霉毒素B1進行了超微量檢測，取得了令人滿意的結果。 以CoFe2O4/Au核殼復合納米顆粒標記巰基化沙門氏菌特異

2、寡核苷酸序列，用納米金標記沙門氏菌另一特異寡核苷酸序列，通過DNA雜交反應與沙門氏菌特異目標DNA序列互補形成夾心結構。經過簡單的磁分離，去除其他沒有雜交的部分，最后將磁分離得到部分的納米金溶出成為Au3+，結合luminol化學發(fā)光體系實現對目標DNA的高靈敏檢測。結果表明，發(fā)光強度和目標DNA濃度在1-100pmol·L-1范圍內相關性良好，對目標DNA的檢測限為0.3pmol·L-1(3S/N)，相對標準偏差為3.6％(10pmo

3、l·L-1，n=7)。 同時以CoFe2O4/Au核殼復合納米顆粒為載體與羊抗人IgG構建捕獲探針復合結構，首先與目標分析物人IgG發(fā)生免疫反應，捕獲的人IgG再與納米金標記的二抗(金標羊抗人IgG)發(fā)生免疫反應，形成三明治夾心結構；通過磁分離去除未結合物質干擾，將分離得到的標記納米金溶出成為Au3+，結合Au3+催化luminol化學發(fā)光分析方法實現對目標分析物人IgG的高靈敏檢測。在實驗優(yōu)化條件下，化學發(fā)光強度與人IgG的濃

4、度在2-100ng·mL-1范圍內呈良好的線性關系，檢測限為0.5ng·mL-1。 黃曲霉毒素B1的快速靈敏檢測在食品安全檢測工作中具有重要意義。本文建立了兩種基于銀增強納米金標記探針的高靈敏度免疫分析方法。第一種方法用黃曲霉毒素B1(AFB1)抗體與金標抗原、待測抗原進行競爭免疫反應，然后加入銀增強溶液，以金為核沉積生長銀，通過檢測吸光度來確定待測物中AFB1的含量，該方法的檢出限可達到0.01ng·mL-1。第二種方法在前一

5、種方法的基礎上，將銀化學溶出，通過化學發(fā)光法檢測沉積的銀的量來確定待測物中AFB1的含量，該方法的檢出限可達到0.002ng·mL-1。 論文還建立了納米金標記-銀增強-化學發(fā)光聯用檢測沙門氏菌的新方法。通過沙門氏菌捕獲探針、金標沙門氏菌顯示探針與沙門氏菌目標核酸序列之間的DNA雜交，形成三明治復合體，然后通過銀增強在標記的納米金表面選擇性沉積銀，實現第一次信號放大；隨后結合溶出化學發(fā)光檢測技術，實現信號第二次放大。結果表明，在