基于磁性納米粒子的典型農(nóng)獸藥殘留免疫分析技術(shù).pdf

1、長(zhǎng)期以來(lái)，農(nóng)獸藥殘留引起的食品安全問(wèn)題一直受到國(guó)內(nèi)外的廣泛關(guān)注，發(fā)展可靠、快速、靈敏的殘留分析技術(shù)已經(jīng)成為食品安全保障的迫切需求。其中，免疫分析技術(shù)是目前農(nóng)獸藥殘留快速檢測(cè)中應(yīng)用最普遍的技術(shù)，也是國(guó)內(nèi)外的研究熱點(diǎn)。然而，現(xiàn)有的免疫檢測(cè)技術(shù)在靈敏度、類特異性等方面還無(wú)法滿足實(shí)際檢測(cè)需求；天然酶免疫標(biāo)記物的不穩(wěn)定、容易失活等缺點(diǎn)也限制了相關(guān)免疫分析技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展。本文以農(nóng)產(chǎn)品中典型有機(jī)磷農(nóng)藥和鹽酸克倫特羅（CL）為研究對(duì)象，將磁性納米粒子

2、引入農(nóng)獸藥殘留分析技術(shù)，在研究制備 Fe3O4磁性納米粒子的基礎(chǔ)上，首次研究建立了基于Fe3O4磁性納米粒子類酶活性的有機(jī)磷農(nóng)藥和CL免疫分析技術(shù)，為提高農(nóng)藥多殘留免疫分析方法的類特異性和靈敏度，促進(jìn)磁性納米免疫技術(shù)的發(fā)展，提升我國(guó)農(nóng)獸藥殘留監(jiān)控水平提供了科學(xué)依據(jù)和技術(shù)支持。主要研究結(jié)果如下：
　　1.采用共沉淀和氨基修飾法,以1:1000的抗體稀釋度為最佳磁珠包被量，制備了功能化Fe3O4納米磁珠。透射電鏡(TEM)掃描及納米磁

3、珠特性研究結(jié)果表明，用3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)修飾的Fe3O4磁性納米粒子粒徑為10nm左右，無(wú)明顯增厚現(xiàn)象；功能化納米磁珠的半沉降時(shí)間大于1.5 h，抗體包被率最高達(dá)57％，表現(xiàn)了良好的穩(wěn)定性和包被率。
　　2.四甲基聯(lián)苯胺(TMB)顯色反應(yīng)單因素優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果表明，1 mL底物緩沖液中含有200μL0.6%（w/v）TMB/DMSO溶液和20μL75%的H2O2，在20℃、pH4和6min反應(yīng)條件下，上述Fe3O4磁

4、性納米粒子的類酶活性最高。
　　3.采用直接競(jìng)爭(zhēng)法，以 CL為研究對(duì)象，對(duì)常規(guī)和基于Fe3O4納米磁珠類酶活性的酶聯(lián)免疫檢測(cè)法（ELISA）進(jìn)行了研究，結(jié)果表明, Fe3O4磁性納米粒子可代替?zhèn)鹘y(tǒng)的辣根過(guò)氧化物酶（HRP）用于ELISA檢測(cè)，其最低檢測(cè)限（LOD）和線性范圍接近常規(guī) ELISA，分別為0.081和0.177~29.3 ng/mL，交叉反應(yīng)率、添加回收率均符合檢測(cè)要求。
　　4.以毒死蜱和喹硫磷為對(duì)象，采用間接

5、競(jìng)爭(zhēng)法（IC-ELISA），研究建立了有機(jī)磷農(nóng)藥多殘留納米磁珠ELISA檢測(cè)方法，并對(duì)建立的磁珠一抗（MFA）ELISA進(jìn)行優(yōu)化，確定了甲醇溶劑濃度為5%、pH為7.4、制備免疫磁珠時(shí)所用抗體稀釋度為1：1600的最優(yōu)檢測(cè)條件。
　　5.對(duì)毒死蜱、喹硫磷等15種農(nóng)藥交叉反應(yīng)率與回收率研究表明，與傳統(tǒng)ELISA相比，納米磁珠ELISA(mp-ELISA)的靈敏度和類特異性明顯增加，其中MFA-ELISA對(duì)14種有機(jī)磷農(nóng)藥的平均交叉反

6、應(yīng)率為34%，比傳統(tǒng)ELISA提高了127%，而對(duì)呋喃丹等氨基甲酸酯類農(nóng)藥無(wú)特異性反應(yīng)；MFA-ELISA對(duì)毒死蜱的回收率為78-107%，喹硫磷77-110%，符合農(nóng)殘檢測(cè)要求。
　　6.采用間接競(jìng)爭(zhēng)法，對(duì)研究建立的CL單殘留傳統(tǒng)ELISA和納米免疫磁珠 ELISA檢測(cè)方法進(jìn)行比較，結(jié)果表明，MFA-ELISA具有靈敏度高，特異性強(qiáng)的特點(diǎn)，與傳統(tǒng) ELISA相比，抑制中濃度（IC50）降低了28%。豬肉樣品中添加回收率研究結(jié)果表