密碼子優(yōu)化和IL-2對(duì)禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥病毒gp90基因DNA疫苗免疫原性的影響.pdf

1、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥（Reticuloendotheliosis，RE）是由禽網(wǎng)狀內(nèi)皮增生癥病毒（Reticuloendotheliosis Virus，REV）引起的以淋巴網(wǎng)狀細(xì)胞增生為特征的腫瘤性病理綜合征，已成為嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)、繼馬立克氏病和禽白血病之后的第三類腫瘤性疾病。目前還沒(méi)有用于該病免疫防治的商業(yè)化的疫苗。本研究對(duì)REVgp90基因進(jìn)行密碼子優(yōu)化，并利用IL-2作為免疫佐劑，旨在研制安全、有效的DNA疫苗。
　　 首先

2、，通過(guò)基因合成的方法，按照雞體內(nèi)偏嗜的密碼子，對(duì)gp90進(jìn)行密碼子優(yōu)化，構(gòu)建pVAX1-optigp90。間接免疫熒光和Western blot試驗(yàn)檢測(cè)表明，gp90、optigp90基因均能在BHK中得到正確表達(dá)，且optigp90基因比gp90基因獲得更高水平的表達(dá)。對(duì)2周齡SPF雞通過(guò)肌肉注射質(zhì)粒150μg/羽的免疫試驗(yàn)（首免后2周二免，間隔1周加強(qiáng)免疫，三免后1周攻毒）證明，gp90基因密碼子優(yōu)化可顯著提高REVHLJ071株D

3、NA疫苗誘導(dǎo)的保護(hù)性體液免疫和細(xì)胞免疫水平，增強(qiáng)免疫保護(hù)效果，三免后1周pVAX1-optigp90質(zhì)粒免疫組的特異性抗體水平顯著高于pVAX1-gp90質(zhì)粒免疫組（P<0.05），pVAX1-optigp90質(zhì)粒免疫組的淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)OD450值和CD8+、CD4+T淋巴細(xì)胞百分含量均顯著高于pVAX1-gp90質(zhì)粒免疫組（P<0.05）。攻毒后8d進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，兩對(duì)照組心、肝、脾、腎和法氏囊均出現(xiàn)嚴(yán)重的病理變化，pVAX1-

4、optigp90組病理變化極小。
　　 為進(jìn)一步探討免疫佐劑對(duì)DNA疫苗免疫效果的影響，本研究將IRES插入到pVAX1多克隆位點(diǎn)，在IRES序列的上游和下游分別引入REV囊膜糖蛋optigp90基因及雞IL-2基因，構(gòu)建能同時(shí)表達(dá)optigp90和雞IL-2基因的真核表達(dá)載體。間接免疫熒光及Western-blot試驗(yàn)檢測(cè)表明，IL-2基因和optigp90基因均能得到正確表達(dá)。對(duì)2周齡SPF雞通過(guò)肌肉注射質(zhì)粒150μg/羽的

5、免疫試驗(yàn)證明，pVAX1-IL2-IRES-optigp90質(zhì)粒免疫組多誘導(dǎo)的保護(hù)性體液免疫、細(xì)胞免疫以及對(duì)病毒的攻擊保護(hù)效果比其它質(zhì)粒好。
　　 總之，通過(guò)體外瞬時(shí)表達(dá)檢測(cè)，IRES的上、下游插入的optigp90基因及雞IL-2基因在BHK細(xì)胞中均得到正確表達(dá)，通過(guò)SPF雞免疫試驗(yàn)可以看出，將REVgp90進(jìn)行密碼子優(yōu)化以及加入IL-2作為分子佐劑均能提高REVDNA疫苗的免疫應(yīng)答水平，并且與多載體共免疫相比，IRES融合表