密碼子優(yōu)化的豬瘟病毒E2基因DNA疫苗的構(gòu)建及其免疫效力評價.pdf

1、豬瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2,囊膜糖蛋白是豬瘟病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白之一,是豬瘟病毒中和抗體的主要靶標,是抗豬瘟病毒感染的主要保護性抗原,因此,豬瘟病毒E2蛋白是開發(fā)豬瘟新型疫苗、診斷試劑及研究豬瘟病毒致病機理的重要靶蛋白. 本研究在不改變編碼氨基酸序列的前提下,將豬瘟病毒石門株E2基因進行密碼子優(yōu)化,將其DNA序列優(yōu)化成G、C含量較高的哺乳動物細胞偏嗜性序列.將人工合成的密碼子優(yōu)

2、化的全長E2基因和去掉跨膜區(qū)的E2基因分別克隆到真核表達載體pcDNA3.1(+)中,構(gòu)建成重組質(zhì)粒peDoptiE2和peDoptiE2delTMR,體外瞬時表達試驗證實,目的基因可以在轉(zhuǎn)染的293T細胞中得到表達. 將純化后重組質(zhì)粒pcDopffE2、peDoptiE2delTMR和野生型E2基因(未經(jīng)過密碼子優(yōu)化)的真核表達質(zhì)粒pcDwtE2按100μg/只的劑量免疫家兔三次,每次間隔3w,三免后pcDoptiE2delT

3、MR免疫兔平均抗體阻斷率達到47.03﹪,用豬瘟兔化弱毒攻毒后平均抗體阻斷率升高到78.24﹪,體溫有一過性升高;而pcDoptiE2和pcDwtE2免疫組經(jīng)三次免疫后均無明顯抗體升高(抗體阻斷率低于30﹪),僅在攻毒后抗體水平有所升高. 研究結(jié)果表明,密碼子優(yōu)化且不含跨膜區(qū)的豬瘟病毒E2基因DNA疫苗peDoptiE2delTMR在兔體內(nèi)免疫效果明顯,而同樣經(jīng)過密碼子優(yōu)化全長E2基因的DNA疫苗pcDoptiE2和未經(jīng)密碼子優(yōu)